Visualizzazione non invasiva della morfologia microvascolare del letto ungueale nei topi mediante capillaroscopia

Uno degli interessi del nostro laboratorio è la disfunzione vascolare nelle malattie neurodegenerative. Il nostro obiettivo è quello di rilevare e monitorare la patologia microvascolare periferica tramite capillaroscopia per ottenere informazioni sul suo potenziale ruolo nelle malattie del sistema nervoso centrale. Il rilevamento della disfunzione microvascolare negli animali è spesso invasivo, effettuato ex vivo o costoso. Con questo protocollo, i ricercatori possono valutare in modo semplice ed economico la microvascolarizzazione del letto ungueale e tradurre i risultati clinici della capillaroscopia della piega ungueale in modelli animali. Introduciamo una nuova posizione per la visualizzazione della microvascolarizzazione periferica speculare, il letto ungueale. Rispetto alla capillaroscopia delle pieghe ungueali, la capillaroscopia ungueale fornisce un'area più ampia per una migliore osservazione della morfologia e della struttura microvascolare.

[Istruttore] Per iniziare, posizionare il mouse anestetizzato sul tavolo operatorio per la procedura. Quindi applicare un gel lubrificante per gli occhi o un unguento oftalmico sterile non medicato su entrambi gli occhi per evitare che la cornea si secchi. Quindi, mantenendo l'animale sotto anestesia utilizzando un cono nasale, applicare una generosa quantità di crema depilatoria su tutta la zampa utilizzando un applicatore. Garantire una copertura completa delle zone della zampa e del letto ungueale. Dopo aver lasciato la crema per due minuti, pulire accuratamente la crema depilatoria con un fazzoletto pulito e lavare la zampa in acqua tiepida sterile. 24 ore dopo la rimozione del pelo, installare l'apparecchiatura per capillaroscopia in una stanza a temperatura controllata mantenuta tra 21,5 e 22,5 gradi Celsius. Collegare il capillaroscopio a un computer portatile tramite connessione USB. Apri l'applicazione software video Debut sul laptop. Dopo che il topo è stato adeguatamente anestetizzato, applicare un gel lubrificante per gli occhi o un unguento oftalmico sterile non medicato su entrambi gli occhi. Posiziona del nastro da laboratorio bianco o un materiale di sfondo simile sotto la zampa per migliorare il contrasto e migliorare la visualizzazione del vaso. Ora posiziona la zampa posteriore con il lato volare rivolto verso l'alto sulla piattaforma del nastro da laboratorio, sotto l'obiettivo. Allargare delicatamente le dita dei piedi per separare le unghie sotto l'obiettivo del microscopio utilizzando un applicatore. Assicurarsi che i letti ungueali siano chiaramente separati per un'imaging ottimale dei vasi. Visualizza ciò che viene ingrandito dal capillaroscopio e metti a fuoco il letto ungueale regolando i regolatori degli stadi X e Y e la rotella di ingrandimento per ottenere un'immagine chiara. Per ridurre l'abbagliamento e migliorare la messa a fuoco, applicare generosamente l'olio da immersione sulla zampa, garantendo una copertura completa delle unghie. Concentrati sull'unghia del secondo dito della zampa posteriore, poiché questa è l'unghia più grande e più facile da immaginare nei topi. Regola i regolatori degli stadi X e Y e la rotella di ingrandimento per mettere a fuoco la rete di navi. Regolare l'obiettivo per ridurre al minimo l'abbagliamento e portare in vista la rete del vaso ungueale. Per registrare un video, premi il pulsante rosso Registra in Debut. Salva ogni video nella cartella di progetto appropriata ed etichetta ogni video di conseguenza. Quindi, apri il software ImageJ e trascina il file nell'interfaccia del software per caricare l'immagine. Per regolare la luminosità e il contrasto, selezionare l'immagine, quindi Regola e Luminosità/Contrasto. Questo strumento aiuta a modificare il contrasto delle immagini per visualizzare meglio la morfologia dei vasi. Una volta regolata l'immagine, fare clic su Imposta nello strumento Luminosità/Contrasto. Infine, vai su File, Salva con nome e seleziona Tiff per salvare l'immagine. La morfologia vascolare del letto ungueale è stata esaminata con successo utilizzando il metodo della capillaroscopia. La tipica vascolarizzazione ungueale del topo consisteva in un vaso afferente, un vaso efferente e una rete di capillari che collegavano entrambi. La rete capillare ungueale era coerente tra i diversi ceppi di topo, come dimostrato nei topi wild-type su un background SV129/S6 e un background C57/B6J.