Name: Lo sbiancamento iterativo estende la molteplicità con luso dellautomazione della colorazione per le strutture principali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: Impara il metodo IBEX per l'imaging tissutale avanzato utilizzando coloratori automatici e amplificazione del segnale a tirosina. Questa tecnica migliora la sensibilità di rilevazione e la riproducibilità in neuroscienza.

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<ol><li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+an+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">IBEX: an iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nature Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">IBEX: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Prichard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+automated+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Overview of automated immunohistochemistry.</a> Arch Pathol Lab Med. 138, 1578-1582 (2014).</li>
<li>Stack, E. C., Wang, C., Roman, K. A., Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+immunohistochemistry%2C+imaging%2C+and+quantitation%3A+a+review%2C+with+an+assessment+of+Tyramide+signal+amplification%2C+multispectral+imaging+and+multiplex+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis.</a> Methods. 70, 46-58 (2014).</li>
<li>Speranza, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+immune+dynamics+during+SARS-CoV-2+infection+in+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in immune dynamics during SARS-CoV-2 infection in rhesus macaques.</a> Life Sci Alliance. 5, 4(2022).</li>
<li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+requirements+and+recommendations+for+multiplex+immunofluorescence+tyramide+signal+amplification+assays+to+support+translational+oncology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Procedural requirements and recommendations for multiplex immunofluorescence tyramide signal amplification assays to support translational oncology studies.</a> Cancers (Basel). 12 (2), 255(2020).</li>
<li>Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence+and+multispectral+imaging%3A+forming+the+Basis+of+a+clinical+test+platform+for+immuno-oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence and multispectral imaging: forming the Basis of a clinical test platform for immuno-oncology.</a> Front Mol Biosci. 8, 674747(2021).</li>
<li>Bankhead, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QuPath%3A+Open+source+software+for+digital+pathology+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">QuPath: Open source software for digital pathology image analysis.</a> Sci Rep. 7, 16878(2017).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+analysis+with+SPIAT+and+spaSim+to+characterize+and+simulate+tissue+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial analysis with SPIAT and spaSim to characterize and simulate tissue microenvironments.</a> Nat Commun. 14, 2697(2023).</li>
<li>Meyer, L., Eling, N., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cytoviewer%3A+an+R%2FBioconductor+package+for+interactive+visualization+and+exploration+of+highly+multiplexed+imaging+data%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">cytoviewer: an R/Bioconductor package for interactive visualization and exploration of highly multiplexed imaging data.</a> BMC Bioinformatics. 25, 9(2024).</li>
<li>Windhager, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+end-to-end+workflow+for+multiplexed+image+processing+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">An end-to-end workflow for multiplexed image processing and analysis.</a> Nat Protoc. 18 (11), 3565-3613 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Kit TSA Alexa per reagenti per colorazioni </td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Coloranti TSA alternativi se non sono disponibili filtri per microscopia a opale. Questi includono Alexa Fluor 488 (canale blu/verde), Alexa Fluor 555 o 568 (canale rosso), Alexa Fluor 647 (canale rosso lontano), Alexa Fluor 750 (infrarossi vicini, se dotati di filtri appropriati).&nbsp;</td></tr><tr><td>Anticorpi Arg1</td><td>Segnalazione cellulare</td><td>93668</td><td>Usato nella Figura 4 al minuto 1:100</td></tr><tr><td>Material Blades</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Oppure, un profilo alto o basso dipenderà dal tipo di tessuto</td></tr><tr><td>Anticorpi CD11b</td><td>Abcam</td><td>ab133357</td><td>Utilizzato nella Figura 4 al 1:2000</td></tr><tr><td>Anticorpi CD163</td><td>Abcam</td><td>ab182422</td><td>Utilizzato nella Figura 4 al minuto 1:500</td></tr><tr><td>Anticorpi CD31</td><td>Segnalazione cellulare</td><td>77699S</td><td>Usato nella Figura 2 al minuto 1:100</td></tr><tr><td>Anticorpi CD3e</td><td>Dako</td><td>A045201-2</td><td>Utilizzato nella Figura 1 al minuto 1:100</td></tr><tr><td>Tool Coplin Jar</td><td>Fischer Scientific</td><td>01-816-21</td><td>O simili</td></tr><tr><td>Copertine materiali </td><td>VWR</td><td>v48393-026</td><td>O simili</td></tr><tr><td>Antibody CX3CR1</td><td>Abcam</td><td>ab308613</td><td>Usato nella Figura 4 al minuto 1:450</td></tr><tr><td>Stain DAPI</td><td>Akoya</td><td>FP1490</td><td></td></tr><tr><td>Software FIJI</td><td></td><td></td><td>Utilizzato per misurare l'intensità del segnale</td></tr><tr><td>Slide Fisher Superfront Slides</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-246</td><td>O simili</td></tr><tr><td>Software HALO</td><td>Indica Labs</td><td></td><td>Esempio di software di analisi delle immagini commercialmente disponibile. Usato per allineare e analizzare immagini.</td></tr><tr><td>Anticorpi Iba1</td><td>Segnalazione cellulare</td><td>17191</td><td>Utilizzato nella Figura 4 al minuto 1:800</td></tr><tr><td>Software inForm</td><td>Akoya</td><td></td><td>Utilizzato per misurare l'intensità del segnale</td></tr><tr><td>Anticorpi iNOS</td><td>Abcam</td><td>ab283655</td><td>Usato nella Figura 4 al minuto 1:400</td></tr><tr><td>Strumento Leica Bond Rx (o RXm)</td><td>Leica Biosystems</td><td>21.2201</td><td>Viene chiamato "Autostainer 1" nel testo. Assicurarsi che tutti i reagenti associati siano disponibili anche tra cui scatole per la colorazione e soluzioni sfuse.</td></tr><tr><td>Reagent LiBH4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>62460-5G-F</td><td>Conserva in un ambiente anidro</td></tr><tr><td>Strument Mantra Snap</td><td>Akoya</td><td></td><td>È necessario un microscopio multispettrale a fluorescenza per rimuovere i coloranti. Esempio di microscopio che può essere usato per rilevare coloranti opali.</td></tr><tr><td>Microtomo Tool </td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>O simili con accessori preferiti come pennelli</td></tr><tr><td>Reagente per la colorazione Kit Opal IHC 480</td><td>Akoya</td><td>FP1500001KT</td><td>Utilizzato nella Figura 4</td></tr><tr><td>Reagente per la colorazione Kit Plex Opal IHC 6-plex</td><td>Akoya</td><td>NEL821001KT</td><td>520 e 620 non sbiancano, usate nelle Figure 1, 2 e 4</td></tr><tr><td>Reagente per la colorazione Kit Opal IHC 780</td><td>Akoya</td><td>FP1501001KT</td><td>Utilizzato nella Figura 4</td></tr><tr><td>Forno Tool </td><td>Millipore Sigma</td><td>Z683329</td><td>O simili, si può fare anche su autostainer</td></tr><tr><td>Anticorpi Pancitocheratina</td><td>Abcam</td><td>ab9377</td><td>Utilizzato nella Figura 4 al minuto 1:50</td></tr><tr><td>Reagent PBS (opzionale)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAJ61196AP</td><td></td></tr><tr><td>Instrument PhenoImager</td><td>Akoya</td><td></td><td>Imaging multispettrale a vetrata intera con unmixing spettrale integrato nel software</td></tr><tr><td>Reagent ProLong Gold Antifade</td><td>Fisher Scientific</td><td>P36961</td><td>O supporti di montaggio acquosi simili</td></tr><tr><td>Anticorpi ProSP-C n-terminale (ProSPC)</td><td>Bioreagenti delle Sette Colline</td><td>WRAB-9337</td><td>Utilizzato nella Figura 4 al 1:250</td></tr><tr><td>Antibody RAGE</td><td>R& D</td><td>MAB1179</td><td>Usate nelle Figure 1 e 2 al minuto 1:50</td></tr><tr><td>Reagente Buffer di reazione</td><td>Roche</td><td>NC1895692</td><td>Per l'uso con l'autotintore Ventana</td></tr><tr><td>Anticorpi SARS-CoV-2-N</td><td>Segnalazione cellulare</td><td>68344</td><td>Utilizzato nella Figura 2 al 1:1000</td></tr><tr><td>Lamelle TOMO Adhesion CC Braci del microscopio WH</td><td>Avantik</td><td>SKUSL6519-1</td><td>Se l'aderenza tissutale è preoccupante</td></tr><tr><td>Instrument Ventana Discovery Ultra</td><td>Roche</td><td></td><td>Viene chiamato "Autostainer 2" nel testo. Assicurarsi che tutti i reagenti associati siano disponibili anche tra cui scatole per la colorazione e soluzioni sfuse.</td></tr><tr><td>Tampone di lavaggio reagente </td><td>Leica Biosystems</td><td>AR9590</td><td>Per l'uso con autocoloratore Leica Bond</td></tr><tr><td>Reagente Acqua</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-230-147</td><td>La DI è la migliore, non il millipore</td></tr><tr><td>Bagno d'acqua Tool </td><td>Leica Biosystems</td><td>140607020C1</td><td>O simili</td></tr></tbody></table>

lo sbiancamento iterativo estende la molteplicità con l'uso dell'automazione della colorazione per le strutture principali

Iterative Bleaching Extends Multiplicity with Use of Staining Automation for Core Facilities

Lo sbiancamento iterativo estende la molteplicità con l'uso dell'automazione della colorazione per le strutture principali

Iterative Bleaching Extends Multiplicity (IBEX) is a highly sensitive tyramide signal amplification (TSA)-based multi-round fluorescence imaging technique ...

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Recupero di fluorescenza dopo Photobleaching di giallo fluorescente proteine Tagged p62 in Aggresome-come le strutture indotta

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