Trapianto ortotopico di polmone sinistro nei ratti

La mia ricerca si è concentrata sullo sviluppo di un modello standardizzato e riproducibile di trapianto di polmone sinistro per studiare le complicanze post-trapianto, in particolare il rigetto cronico, e per comprendere meglio il meccanismo che guida il fallimento del trapianto a lungo termine. Il nostro protocollo offre una curva di apprendimento più breve, un'unica capacità operativa e una maggiore riproducibilità rispetto alle tecniche esistenti. Il nostro modello standardizzato di trapianto diretto di polmone fornisce una piattaforma affidabile per lo studio delle complicanze dopo il trapianto di polmone e può accelerare la ricerca traslazionale per migliorare la sopravvivenza del trapianto.

In futuro, il nostro laboratorio si concentrerà sullo studio del rigetto cronico dopo trapianto di polmone al fine di migliorare il tasso di sopravvivenza a lungo termine dei riceventi di trapianto di polmone. Per iniziare, procurati cateteri e lame endovenose calibro 14 e 16. Tagliare i cateteri in una cuffia con una coda con una lama.

Quindi dividi ogni polsino in un corpo e una coda, ciascuno di circa due o tre millimetri di lunghezza. Utilizzando un bisturi, creare graffi superficiali sul corpo del bracciale per aumentare l'attrito per il fissaggio della sutura. Per prelevare il polmone del donatore, ritrarre la lingua di un ratto anestetizzato verso l'esterno e verso l'alto usando una pinza.

Posizionare una lampada chirurgica anteriormente al collo per illuminare chiaramente l'apertura della glottide. Ora, inserire una cannula endovenosa calibro 14 nelle vie aeree attraverso la glottide. Impostare il ventilatore in modalità a pressione controllata.

Quindi, inserire i parametri di peso, regolare la pressione a 15 centimetri di acqua e collegare il ventilatore. Osservare l'aumento e l'abbassamento del torace per garantire la sincronizzazione con la frequenza del ventilatore. Quindi, fissa gli arti e la testa usando del nastro adesivo o delle cinture.

Fai un'incisione sulla linea mediana lungo la parete addominale. Iniettare l'eparina attraverso la vena peritoneale esposta, quindi lasciare la circolazione sistemica per tre minuti per garantire la completa eparinizzazione. Tagliare il diaframma e aprire la cavità toracica dalla linea mediana dello sterno.

Quindi, fissare la parete toracica su entrambi i lati con gli emostatici. Rimuovere il timo per esporre gli organi della cavità toracica. In sequenza, tagliare la vena cava superiore, la vena cava inferiore e i padiglioni auricolari sinistro e destro.

Ora, iniettare soluzione salina fredda nella radice dell'arteria polmonare utilizzando una siringa da 20 millilitri per un minuto per una perfusione a bassa pressione fino a quando il polmone del donatore diventa completamente bianco. Tagliare i tessuti che collegano il polmone del donatore ed estrarre il cuore del donatore e il polmone in blocco. Immergere il blocco cuore-polmone del donatore in soluzione salina pre-raffreddata.

Posizionare il blocco cuore-polmone sul ghiaccio al microscopio. Afferrare la trachea con un emostatico e fissarla nella plastilina. Copri i polmoni con carta per lenti sterile bagnata.

Ora, usa una pinza per separare l'arteria polmonare, il bronco e la vena polmonare al microscopio. Legare il bronco vicino al polmone utilizzando suture chirurgiche 6-0. Usa le forbici a molla per tagliare l'arteria polmonare, il bronco e la vena polmonare.

Estrarre l'arteria polmonare, il bronco e la vena polmonare dai rispettivi polsini realizzati con cateteri a rientranza calibro 16, 14 e 16 gauge. Fissare le pareti del tubo al bracciale con 8-0 Suture chirurgiche. Conservare i polmoni del donatore in soluzione salina e rimetterli sul ghiaccio fino all'impianto.

Depilare la regione toracodorsale sinistra dell'animale ricevente. Posizionare l'animale nella giusta posizione di decubito laterale su un tavolo operatorio termostatico. Ora, praticare un'incisione attraverso la pelle e la parete toracica nel punto dell'impulso apicale nel quarto spazio intercostale per accedere alla cavità toracica.

Utilizzare un divaricatore palpebrale per aprire la cavità toracica. Quindi, spingere delicatamente da parte il polmone sinistro usando un batuffolo di cotone umido per esporre e sezionare bruscamente il legamento polmonare inferiore. Quindi, afferra il polmone sinistro con una pinza e ritrailo al di fuori della cavità toracica.

Fissare l'ilo con un emostato, quindi stabilizzarlo con argilla da modellare. Ora, seziona l'ilo polmonare per separare l'arteria polmonare, la vena polmonare e il bronco. Bloccare le estremità prossimali dell'arteria polmonare, della vena polmonare e del bronco utilizzando pinze vascolari.

Pre-legare l'arteria polmonare, il bronco e la vena polmonare del ricevente con 8-0 Suture chirurgiche per anastomosi rapide. Tagliare una piattaforma sul polmone sinistro bloccato del ricevente per facilitare il posizionamento del polmone del donatore. Praticare piccole incisioni alle estremità distali dell'arteria polmonare, della vena polmonare e del bronco.

Sciacquare l'arteria polmonare e la vena polmonare con soluzione salina eparinizzata per prevenire la formazione di coaguli. Quindi, prelevare il polmone del donatore dal ghiaccio e posizionarlo sulla piattaforma preparata del polmone sinistro del ricevente. Usa una pinza per sollevare un lato dell'apertura tagliata, quindi impianta e lega in sequenza i polsini dell'arteria polmonare, della vena polmonare e del bronco nel ricevente.

Apri la clip micro emostatica e osserva il polmone del donatore che passa dal bianco al rosso. Ispezionare i siti anastomotici per eventuali segni di sanguinamento. Ora, rimuovere il polmone sinistro del ricevente e riportare il polmone del donatore nella cavità toracica.

Asciugare la cavità toracica con cotone sterile. Quindi, chiudere la cavità toracica strato per strato. Attendere il recupero respiratorio spontaneo prima di rimuovere il ventilatore.

Dopo un'ora, i destinatari erano liberi di mangiare. Sei mesi dopo il trapianto, la TC ha mostrato che la ventilazione dei polmoni trapiantati era paragonabile al gruppo fittizio, indicando una funzione polmonare preservata. L'aspetto macroscopico dei polmoni non differiva visibilmente tra il gruppo fittizio e quello trapiantato, non mostrando segni di deterioramento o anomalie.

La colorazione con ematossilina ed eosina dei tessuti polmonari non ha rivelato cambiamenti patologici significativi nei polmoni trapiantati rispetto al gruppo sham, con strutture alveolari conservate e assenza di infiltrazione infiammatoria.