Name: NellOvo Xenotrapianto di cellule di leucemia linfoblastica acuta (ALL) derivate da pazienti (PDX-ALL) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Scopri il metodo di xenotrapianto in ovo di cellule di leucemia linfoblastica acuta derivate da pazienti. Questo protocollo rapido consente screening preclinico e studi meccanistici sulla progressione tumorale.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+evidence+that+tumors+are+angiogenesis+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent.</a> J Natl Cancer Inst. 82 (1), 4-6 (1990).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Dumartin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Netrin-1+mediates+early+events+in+pancreatic+adenocarcinoma+progression%2C+acting+on+tumor+and+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Netrin-1 mediates early events in pancreatic adenocarcinoma progression, acting on tumor and endothelial cells.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1595-1606 (2010).</li>
<li>Aguirre-Ghiso, J. A., Estrada, Y., Liu, D., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK+activity+as+a+determinant+of+tumor+growth+and+dormancy%3A+Regulation+by+p38%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">ERK activity as a determinant of tumor growth and dormancy: Regulation by p38.</a> Cancer Res. 63 (7), 1684-1695 (2003).</li>
<li>Baroni, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ribonomic+and+short+hairpin+RNA+gene+silencing+methods+to+explore+functional+gene+programs+associated+with+tumor+growth+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Ribonomic and short hairpin RNA gene silencing methods to explore functional gene programs associated with tumor growth arrest.</a> Methods Mol Biol. 383, 227-244 (2007).</li>
<li>Lopez-Rivera, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+nitric+oxide+synthase+drives+mTOR+pathway+activation+and+proliferation+of+human+melanoma+by+reversible+nitrosylation+of+TSC2%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Inducible nitric oxide synthase drives mTOR pathway activation and proliferation of human melanoma by reversible nitrosylation of TSC2.</a> Cancer Res. 74 (4), 1067-1078 (2014).</li>
<li>Balke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+short-term+in+vivo+model+for+giant+cell+tumor+of+bone%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">A short-term in vivo model for giant cell tumor of bone.</a> BMC Cancer. 11, 241(2011).</li>
<li>Balke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+characterization+of+osteosarcoma+growth+on+the+chick+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Morphologic characterization of osteosarcoma growth on the chick chorioallantoic membrane.</a> BMC Res Notes. 3, 58(2010).</li>
<li>Sys, G. M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CAM-assay+as+a+xenograft+model+for+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The CAM-assay as a xenograft model for sarcoma.</a> J Vis Exp. (77), e50522(2013).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Chick+Chorioallantoic+Membrane+%28CAM%29+assay+as+an+efficient+xenograft+model+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) assay as an efficient xenograft model of hepatocellular carcinoma.</a> J Vis Exp. (104), e52411(2015).</li>
<li>Pontel, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lymphoblastic+leukemia+necessitates+GSH-dependent+ferroptosis+defenses+to+overcome+FSP1-epigenetic+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Acute lymphoblastic leukemia necessitates GSH-dependent ferroptosis defenses to overcome FSP1-epigenetic silencing.</a> Redox Biol. 102408, (2022).</li>
<li>Oriol, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+after+relapse+of+acute+lymphoblastic+leukemia+in+adult+patients+included+in+four+consecutive+risk-adapted+trials+by+the+PETHEMA+Study+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Outcome after relapse of acute lymphoblastic leukemia in adult patients included in four consecutive risk-adapted trials by the PETHEMA Study Group.</a> Haematologica. 95 (4), 589-596 (2010).</li>
<li>Xin, Q., Chen, Z., Wei, W., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lymphoblastic+leukemia%3A+Recapitulating+the+human+disease+to+evaluate+drug+efficacy+and+discover+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lymphoblastic leukemia: Recapitulating the human disease to evaluate drug efficacy and discover therapeutic targets.</a> Biochem Pharmacol. 198, 114970(2022).</li>
<li>Gilmore, M. J., Prentice, H. G., Blacklock, H. A., Janossy, G., Hoffbrand, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+rapid+isolation+of+bone+marrow+mononuclear+cells+using+Ficoll-Metrizoate+and+the+IBM+2991+blood+cell+processor%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">A technique for rapid isolation of bone marrow mononuclear cells using Ficoll-Metrizoate and the IBM 2991 blood cell processor.</a> Br J Haematol. 50 (4), 619-626 (1982).</li>
<li>Boyer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+to+estimate+leukemia+stem+cells+in+primary+acute+myeloid+leukemia+and+in+patient-derived+xenografts%2C+at+diagnosis+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry to estimate leukemia stem cells in primary acute myeloid leukemia and in patient-derived xenografts, at diagnosis and follow-up.</a> J Vis Exp. (133), e56976(2018).</li>
<li>Kang, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+loss-of-function+genetic+screening+identifies+opioid+receptor+mu1+as+a+key+regulator+of+L-asparaginase+resistance+in+pediatric+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Genome-wide loss-of-function genetic screening identifies opioid receptor mu1 as a key regulator of L-asparaginase resistance in pediatric acute lymphoblastic leukemia.</a> Oncogene. 36 (42), 5910-5913 (2017).</li>
<li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HAP1+loss+confers+L-asparaginase+resistance+in+ALL+by+downregulating+the+calpain-1-Bid-caspase-3%2F12+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">HAP1 loss confers L-asparaginase resistance in ALL by downregulating the calpain-1-Bid-caspase-3/12 pathway.</a> Blood. 133 (20), 2222-2232 (2019).</li>
<li>Kalina, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+standardization+of+flow+cytometer+instrument+settings+and+immunophenotyping+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols.</a> Leukemia. 26 (9), 1986-2010 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ferri da 34 g</td><td>BD Perisafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Citometro a flusso Attune NxT</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Siringa Perisafe (32 G)</td><td>BD Perisafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>Codice: A9647</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo di congelamento cellulare</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>12648010</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga (Allegra X-22R Centrifuge)</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guanti monouso</td><td>Royal Touch300 Guanti da esame in nitrile</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione</td><td>Leica MZ16FA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>Incubatrice per uova, Incubatrice rotante Vevitts 120</td><td>Vixest Trading Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcol etilico (95%)</td><td>VWR Internazionale</td><td>BDH1158-4LP</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di Ficoll (Ficoll?? Paque Plus)</td><td>MilliporeSigma</td><td>GE17-1440-02</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo FITC-CD10</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-46656 FITC</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo FITC-CD4</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-19641 FITC</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trapano a mano (Dremel3000)</td><td>Bosch</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK293T&nbsp;</td><td>ATCC, VA, STATI UNITI</td><td>Codice CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>Emocitometro</td><td>VWR international, Hausser Scientific</td><td>15170-263</td><td></td></tr><tr><td>Eparina sale sodico dalla mucosa intestinale suina</td><td>Millipore Sigma</td><td>H3149</td><td></td></tr><tr><td>Provette eparinizzate</td><td>BD Vacutainer&nbsp;</td><td>BD 366480</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamina 3000</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>L3000008</td><td></td></tr><tr><td>Kit per titoli Multiplex Lentivirus (kit per titoli qPCR Lentivirus)</td><td>Abm</td><td>LV900</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl (Ammonio chloride_</td><td>Millipore Sigma</td><td>Codice: A9434</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio invertito Olympus IX71</td><td>Olimpo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo PE-CD19</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-19650 PE</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo PE-CD8</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-1177 PE</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina (10.000 U/mL)&nbsp;</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Sigma</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>Pipette (volume regolabile)</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>A1113803</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Cellotape scozzese</td><td>3M</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piastre sterili a 6 pozzetti</td><td>VWR international, Corning</td><td>22250-140</td><td></td></tr><tr><td>Provette da centrifuga sterili</td><td>Axygen Inc, Corning</td><td>AXYMCT-150-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Palloni di coltura sterili (75T)</td><td>VWR Internazionale</td><td>10062-872</td><td></td></tr><tr><td>Provette Falcon sterili (15 mL)</td><td>SARSTEDT</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Provette Falcon sterili (50 mL)</td><td>SARSTEDT</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Filtro sterile (0,45 & micro; m filtro)</td><td>VWR Internazionale</td><td>76778-974</td><td></td></tr><tr><td>Pinze sterili</td><td>VWR Internazionale</td><td>82027-404</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini sterili</td><td>VWR internazionale</td><td>48300-031</td><td></td></tr><tr><td>Puntali per pipette sterili</td><td>VWR Internazionale</td><td>76322-136, 76322-134, 76322-154</td><td></td></tr><tr><td>Siringhe sterili</td><td>Siringa BD</td><td>309628?</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Blu</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>T10282</td><td></td></tr></tbody></table>

nell'ovo xenotrapianto di cellule di leucemia linfoblastica acuta (all) derivate da pazienti (pdx-all)

In Ovo Xenografting of Patient-Derived Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) Cells (PDX-ALL)

Per determinare se l'attecchimento di cellule umane di ALL in embrioni di pollo in via di sviluppo ha avuto successo, sono stati amplificati i lentivirus incompetenti per la replicazione di 2a generazione portatori di mCherry e li hanno utilizzati per marcare le linee cellulari B- e T-ALL, rispettivamente SEM e MOLT316,17. Come mostrato nella Figura 1A, ~50% delle celle ALL B- (due pannelli in alto a sinistra) e T-(due pan...

Nell'Ovo Xenotrapianto di cellule di leucemia linfoblastica acuta (ALL) derivate da pazienti (PDX-ALL)

This study introduces a rapid, cost-effective, and efficient method for in ovo xenografting of patient-derived acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells, ...

in-ovo-xenografting-patient-derived-acute-lymphoblastic-leukemia-all

Research

Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Questo video descrive la tecnica per creare un modello di xenotrapianto derivato da un paziente zebrafish. Nel protocollo campione, valutiamo l'efficacia dei farmaci Gemcitabina e Navitoclax sul modello di xenotrapianto di tumore pancreatico.

Xenotrapianto derivato da paziente Zebrafish (zPDX): un modello di cancro

Di seguito è descritto un metodo per produrre citochine esogene nei topi xenograft (PDX) derivanti dal paziente mediante iniezione intraperitoneale settimanale di una linea cellulare stromale trasfusa da citochine. Questo metodo amplia l'utilità di PDX e fornisce l'opzione per la consegna transiente o sostenuta della citochine esogena in una moltitudine di modelli PDX.

Espressione di citochine esogene in Xenografts derivati ​​da pazienti mediante iniezione con una linea cellulare stromalica trasdotta a citocina

Descriviamo un protocollo per rilevare l'espressione simultanea di marcatori di cellule staminali leucemia sulle cellule di leucemia mieloide acuta primaria tramite flusso cytometry. Vi mostriamo come quantificare tre popolazioni di cellule progenitrici e una popolazione di LSC putativa con crescente grado di maturazione. Abbiamo confermato la presenza di queste popolazioni in corrispondente paziente-derivato-xenotrapianti.

Il flusso Cytometry per stimare cellule staminali leucemia nella leucemia mieloide acuta primaria e negli xenotrapianti paziente-derivato, alla diagnosi ed al Follow Up

Qui, presentiamo un protocollo per la preparazione e la somministrazione stereotassica di linfociti umani allogenici in topi immunodeficienti portatori di tumori cerebrali primari umano ortotopico. Questo studio fornisce un proof-of-concept per sia la fattibilità e l'efficacia antitumorale di immunoterapie cellulari intrabrain-consegnato.

Trasferimento adottivo stereotactic di citotossici cellule immunitarie nei modelli murini di xenotrapianti Multiforme di Glioblastoma umano ortotopico

Questo protocollo descrive le procedure di ottimizzazione in un modello di xenotrapianto tumorale a doppia fluorescenza basato su virus utilizzando il pesce zebra larva come ospiti. Questo modello xenotrapianto eterogeneo imita la composizione tissutale del microambiente del cancro al pancreas in vivo e funge da strumento più preciso per valutare le risposte ai farmaci in modelli personalizzati zPDX (zebrafish patient-derived xenogrft).

Modello Xenotrapianto eterogeneo derivato dal paziente del cancro pancreatico utilizzando larve di pesce zebra come ospiti per la valutazione comparativa del farmaco

Descriviamo una cellula mononucleare del sangue periferico umano (PBMC), basato sul modello murino xenotrapianto umanizzato per la ricerca sull'immuno-oncologia traslazionale. Questo protocollo potrebbe servire come linea guida generale per stabilire e caratterizzare modelli simili per la valutazione della terapia I-O.

Un ormone e mezzo umano (PBMC) Un modello di Xenotrapianto umanizzato per la ricerca sull'immuno-oncologia traslazionale (I-O)

Qui presentiamo un protocollo per testare l'efficacia delle terapie mirate selezionate in base alla trucco genomico di un tumore. Il protocollo descrive l'identificazione e la convalida dei riarrangiamenti strutturali del DNA, l'innesto dei tumori dei pazienti nei topi e il test delle risposte ai farmaci corrispondenti.

Test delle terapie mirate nel cancro utilizzando l'analisi dell'alterazione strutturale del DNA e gli Xenogrini derivati dal paziente

Qui, descriviamo un protocollo in cui un modello di xenotrapianto derivato dal paziente di leucemia linfoblastica acuta viene utilizzato come strategia per valutare e monitorare le tossicità associate alle cellule T del recettore dell'antigene chimerico mirato al CD19.

Valutazione delle tossicità associate alle cellule T del recettore dell'antigene chimerico utilizzando un modello murino di xenotrapianto derivato dal paziente per la leucemia linfoblastica acuta

Questo protocollo fornisce istruzioni dettagliate per la generazione e la risoluzione dei problemi di xenotrapianti di leucemia linfoblastica acuta umana (ALL) da linee cellulari e materiale fresco del paziente in embrioni di zebrafish transitoriamente immunosoppressi, insieme a linee guida per la valutazione della risposta ai farmaci mediante citometria a flusso. La pipeline sperimentale può essere adattata anche per i tumori solidi.

Previsione rapida della risposta ai farmaci in vivo utilizzando innesti di cellule leucemiche in embrioni di zebrafish

Questo protocollo descrive un metodo efficiente e non chirurgico per l'impianto ortotopico di xenotrapianti derivati da pazienti con carcinoma mammario nei topi. La tecnica prevede la dissociazione enzimatica del tumore seguita da un'iniezione diretta nei cuscinetti adiposi mammari, consentendo un impianto ad alto rendimento. La convalida completa garantisce la fedeltà del modello, facilitando studi rigorosi su vari sottotipi di cancro al seno.

Dissociazione ad alto rendimento e impianto ortotopico di xenotrapianti derivati da pazienti con carcinoma mammario

Qui, viene descritto un metodo basato sulla citometria a fosfoflusso per analizzare la segnalazione a valle delle vie mTORC1, JAK/STAT5 e MAPK in cellule di leucemia mieloide umana acuta xenotrapiantate in topi e ottenute da aspirati di midollo osseo. I livelli di p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 e p-ERK1/2 vengono misurati simultaneamente utilizzando un citometro a flusso spettrale di nuova generazione ad alta sensibilità.

Citometria intracellulare a fosfoflusso di pazienti con leucemia mieloide acuta Xenotrapianti derivati da pazienti

Scopri il metodo di xenotrapianto in ovo di cellule di leucemia linfoblastica acuta derivate da pazienti. Questo protocollo rapido consente screening preclinico e studi meccanistici sulla progressione tumorale.

Nell'Ovo Xenotrapianto di cellule di leucemia linfoblastica acuta (ALL) derivate da pazienti (PDX-ALL)

Esplora altri video