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<ol><li>Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration in zebrafish.</a> Science (1979). 298 (5601), 2188-2190 (2002).</li>
<li>Jopling, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+heart+regeneration+occurs+by+cardiomyocyte+dedifferentiation+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Zebrafish heart regeneration occurs by cardiomyocyte dedifferentiation and proliferation.</a> Nature. 464 (7288), 606-609 (2010).</li>
<li>Kikuchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+contribution+to+zebrafish+heart+regeneration+by+gata4%2B+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Primary contribution to zebrafish heart regeneration by gata4+ cardiomyocytes.</a> Nature. 464 (7288), 601-605 (2010).</li>
<li>Bertozzi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+zebrafish+heart+regeneration+%22complete%22%3F+Lineage-restricted+cardiomyocytes+proliferate+to+pre-injury+numbers+but+some+fail+to+differentiate+in+fibrotic+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Is zebrafish heart regeneration "complete"? Lineage-restricted cardiomyocytes proliferate to pre-injury numbers but some fail to differentiate in fibrotic hearts.</a> Dev Biol. 471, 106-118 (2021).</li>
<li>Nguyen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+calcium+and+sarcomeres+directs+cardiomyocyte+maturation+during+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Interplay between calcium and sarcomeres directs cardiomyocyte maturation during regeneration.</a> Science (1979). 380 (6646), 758-764 (2023).</li>
<li>Fukuda, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulation+of+glycolysis+promotes+cardiomyocyte+proliferation+after+injury+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Stimulation of glycolysis promotes cardiomyocyte proliferation after injury in adult zebrafish.</a> EMBO Rep. 21 (8), e49752(2020).</li>
<li>Honkoop, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+uncovers+that+metabolic+reprogramming+by+ErbB2+signaling+is+essential+for+cardiomyocyte+proliferation+in+the+regenerating+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis uncovers that metabolic reprogramming by ErbB2 signaling is essential for cardiomyocyte proliferation in the regenerating heart.</a> Elife. 8, e50163(2019).</li>
<li>Lekkos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+phosphorylation+is+required+for+cardiomyocyte+redifferentiation+and+long-term+fish+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Oxidative phosphorylation is required for cardiomyocyte redifferentiation and long-term fish heart regeneration.</a> Nat Cardiovasc Res. 4 (10), 1363-1380 (2025).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Langendorff-like+system+to+quantify+cardiac+pump+function+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">A Langendorff-like system to quantify cardiac pump function in adult zebrafish.</a> Dis Model Mech. 11 (9), dmm034819(2018).</li>
<li>Zhang, P. C., Llach, A., Sheng, X. Y., Hove-Madsen, L., Tibbits, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+handling+in+zebrafish+ventricular+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium handling in zebrafish ventricular myocytes.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 300, 56-66 (2011).</li>
<li>Lin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+use+of+a+zebrafish+heart+voltage+and+calcium+optical+mapping+system%2C+with+integrated+electrocardiogram+and+programmable+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Construction and use of a zebrafish heart voltage and calcium optical mapping system, with integrated electrocardiogram and programmable electrical stimulation.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 308, R755-R768 (2015).</li>
<li>Miklas, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acid+primed+mTOR+activity+is+essential+for+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Amino acid primed mTOR activity is essential for heart regeneration.</a> iScience. 25 (1), 103574(2022).</li>
<li>García-Poyatos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cox7a1+controls+skeletal+muscle+physiology+and+heart+regeneration+through+complex+IV+dimerization%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Cox7a1 controls skeletal muscle physiology and heart regeneration through complex IV dimerization.</a> Dev Cell. 59 (14), 1824-1841.e10 (2024).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22How+Agilent+Seahorse+XF+Analyzers+Work%22">How Agilent Seahorse XF Analyzers Work</a>. , Agilent. https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/how-seahorse
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<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol Cells. 47 (8), 100095(2024).</li>
<li>Chablais, F., Jaźwińska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarction+in+adult+zebrafish+using+cryoinjury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarction in adult zebrafish using cryoinjury.</a> J Vis Exp. (62), e3666(2012).</li>
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<li>Aleström, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+Housing+and+husbandry+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: Housing and husbandry recommendations.</a> Lab Anim. 54 (3), 213-224 (2019).</li>
<li>Singleman, C., Holtzman, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+dissection+in+larval%2C+juvenile+and+adult+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, Danio rerio.</a> J Vis Exp. (55), e3165(2011).</li>
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<li>Cook, M., Lal, S., Hume, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional%2C+proteomic+and+metabolic+drivers+of+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">Transcriptional, proteomic and metabolic drivers of cardiac regeneration.</a> Heart. 111 (18), 851-858 (2025).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming%3A+A+byproduct+or+a+driver+of+cardiomyocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming: A byproduct or a driver of cardiomyocyte proliferation.</a> Circulation. 149 (20), 1598-1610 (2024).</li>
<li>Bond, S. T., McEwen, K. A., Yoganantharajah, P., Gibert, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+metabolic+profile+analysis+of+zebrafish+embryos+using+a+seahorse+XF+24+extracellular+flux+analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Live metabolic profile analysis of zebrafish embryos using a seahorse XF 24 extracellular flux analyzer.</a> Methods Mol Biol. 1797, 393-401 (2018).</li>
<li>Gibert, Y., McGee, S. L., Ward, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+profile+analysis+of+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Metabolic profile analysis of zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. (71), e4300(2013).</li>
<li>Trampel, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seahorse+metabolic+analysis+for+human+and+mouse+cardiac+organotypic+slices%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Seahorse metabolic analysis for human and mouse cardiac organotypic slices.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Ruggiero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+balanced+circadian+glycolytic+rhythm+drives+cardiomyocyte+cell+cycle+progression+during+fish+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">A balanced circadian glycolytic rhythm drives cardiomyocyte cell cycle progression during fish heart regeneration.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Lee, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessment+of+cardiac+responses+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29+to+acute+and+chronic+temperature+change+using+high-resolution+echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Functional assessment of cardiac responses of adult zebrafish (Danio rerio) to acute and chronic temperature change using high-resolution echocardiography.</a> PLoS One. 11 (1), e0145163(2016).</li>
<li>Shaftoe, J. B., Geddes-McAlister, J., Gillis, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+cellular+response+of+the+zebrafish+%28Danio+rerio%29+heart+to+temperature+change%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated cellular response of the zebrafish (Danio rerio) heart to temperature change.</a> J Exp Biol. 227 (20), jeb247522(2024).</li>
<li>Ryan, R., Moyse, B. R., Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+cardiac+regeneration%E2%80%94looking+beyond+cardiomyocytes+to+a+complex+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish cardiac regeneration—looking beyond cardiomyocytes to a complex microenvironment.</a> Histochem Cell Biol. 154 (5), 533-548 (2020).</li>
<li>Angelini, A., Pi, X., Xie, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+long-chain+fatty+acid+respiration+in+neonatal+mouse+cardiomyocytes+using+SeaHorse+instrument%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Evaluation of long-chain fatty acid respiration in neonatal mouse cardiomyocytes using SeaHorse instrument.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101392(2022).</li>
<li>Ludikhuize, M. C., Meerlo, M., Burgering, B. M. T., Rodríguez Colman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+profile+the+bioenergetics+of+organoids+using+Seahorse%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to profile the bioenergetics of organoids using Seahorse.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100386(2021).</li>
<li>Neary, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+signaling+controls+postnatal+changes+in+cardiac+mitochondrial+morphology+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia signaling controls postnatal changes in cardiac mitochondrial morphology and function.</a> J Mol Cell Cardiol. 74 (100), 340-352 (2014).</li>
<li>Cheng, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+changes+associated+with+cardiomyocyte+dedifferentiation+enable+adult+mammalian+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Metabolic changes associated with cardiomyocyte dedifferentiation enable adult mammalian cardiac regeneration.</a> Circulation. 146 (25), 1950-1967 (2022).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+fatty+acid+oxidation+enables+heart+regeneration+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inhibition of fatty acid oxidation enables heart regeneration in adult mice.</a> Nature. 622 (7983), 619-626 (2023).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Goncalves, R. L. S., Gerencser, A. A., Nicholls, D. G., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contributions+of+respiration+and+glycolysis+to+extracellular+acid+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">The contributions of respiration and glycolysis to extracellular acid production.</a> Biochim Biophys Acta. 1847 (2), 171-181 (2015).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+and+analysis+of+extracellular+acid+production+to+determine+glycolytic+rate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measurement and analysis of extracellular acid production to determine glycolytic rate.</a> J Vis Exp. (106), e53464(2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 ml tubi Eppendorf&nbsp;</td><td>Starlab</td><td>S1615-5550</td><td></td></tr><tr><td>piastra a 96 pozzi &nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>AB-0800</td><td></td></tr><tr><td>Antimicina A</td><td>ChemCruz & nbsp;</td><td>SC-202467A</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo DMEM</td><td>Agilent</td><td>1035755-100</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>D2650-100mL</td><td></td></tr><tr><td>Ghiaccio secco&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Supelco</td><td>1.00983.2500</td><td></td></tr><tr><td>Kit per il Saggio di Flusso Extracellulare &nbsp;</td><td>Agilent</td><td>103518-100</td><td>Pack contiene una piastra utilitaria, un idrobooster, una cartuccia sensore, un coperchio (viene fornito con le piastre a isolot)</td></tr><tr><td>FCCP</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>Agilent</td><td>103577-100</td><td></td></tr><tr><td>Glutamina</td><td>Agilent</td><td>103579-100</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropiastra di cattura a isoli</td><td>Agilent</td><td>101122-100</td><td>25 griglie incluse nel pacchetto</td></tr><tr><td>Strumento per l'acquisizione dello schermo dell'isolotto</td><td>Agilent</td><td>101135-100</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per microdissezione</td><td>ideal-tek</td><td>3131760</td><td>Dimensione 5-S (saranno necessarie 2x per isolare il ventricolo dal bulbus arteriosus e dall'atrio)</td></tr><tr><td>Forbici per microdissezione</td><td>FST</td><td>15009-08</td><td></td></tr><tr><td>MS-222</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>Oligomicina</td><td>MP&nbsp;</td><td>151786</td><td></td></tr><tr><td>Omogeneizzatore mottor per pestello&nbsp;</td><td>VWR</td><td>431-0100</td><td></td></tr><tr><td>Pestelli</td><td>VWR</td><td>431-0094</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di Petri 35mm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>627102</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di Petri 92mm</td><td>Starstedt</td><td>82.1473</td><td></td></tr><tr><td>Kit per il test BCA Pierce</td><td>Thermo Scientific</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Mini compresse per inibitori di proteasi e fosfatasi, Pierce Proteasi e Inibitori della Fosfatasi, Prive di EDTA</td><td>Thermo Scientific</td><td>A32961</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato</td><td>Agilent</td><td>103578-100</td><td></td></tr><tr><td>Buffer di lisi RIPA</td><td>Babbo Natale</td><td>SC-364162</td><td></td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>MP&nbsp;</td><td>02150154-CF</td><td></td></tr><tr><td>Interfase Agilent di Seahorse Analytics</td><td>Agilent</td><td>https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485</td><td></td></tr><tr><td>Analizzatore Seahorse XFe24</td><td>Agilent</td><td>https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-analyzers/seahorse-xfe24-analyzer-740878</td><td></td></tr><tr><td>Sigillante</td><td>Thermo Scientific</td><td>AB-0558</td><td></td></tr><tr><td>SPECTROstar Nano</td><td>MG LABTECH GmbH</td><td>601-0298</td><td></td></tr><tr><td>Spugna</td><td></td><td></td><td>Fai un'incisione abbastanza lunga e profonda da far rientrare il pesce sul lato ventrale</td></tr><tr><td>Wave (versione 2.6.1.56)</td><td>Agilent</td><td>https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/software-download-for-wave-desktop</td><td></td></tr><tr><td>XF calibrant&nbsp;</td><td>Agilent</td><td>100840-000</td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione dell'attività metabolica dei ventricoli interi rigeneranti del pesce zebra ex vivo utilizzando un saggio extracellulare di flusso

Assessing the Metabolic Activity of Whole Regenerating Zebrafish Ventricles Ex Vivo Using an Extracellular Flux Assay

Valutazione dell'attività metabolica dei ventricoli interi rigeneranti del pesce zebra ex vivo utilizzando un saggio extracellulare di flusso

The ability of zebrafish to regenerate their hearts throughout adulthood is partially attributed to metabolic adaptations. Although it has been ...

L'assay del cavalluccio marino consente la valutazione ad alto rendimento del metabolismo nei ventricoli di zebrafish integri ex vivo. Questo metodo può essere utilizzato per validare alterazioni genetiche in geni coinvolti nel metabolismo e per caratterizzare i cambiamenti metabolici durante il processo rigenerativo. Accendere il sistema e preparare tutte le soluzioni farmacologiche e i mezzi prima di iniziare l'esperimento.Nella pagina Definizioni dei gruppi del software WAVE, sotto la scheda Strategie di iniezione, assegnare l'oligomicina alla Porta A, il carbonyl cianide 4-trifluorometossi fenilidrazone, o FCCP, alla Porta B e la miscela di rotenone e antimicina alla Porta C a partire dal catalogo dei composti. Eliminare tutte le strategie di iniezione preesistenti una volta definita la strategia sperimentale. Quindi, nel pannello Gruppi, definire i gruppi sperimentali e assegnare la corrispondente strategia di iniezione.Nella pagina Mappa della piastra, selezionare le posizioni dei campioni sulla piastra a 24 pozzetti cliccando su ciascun gruppo e sui relativi pozzetti corrispondenti, lasciandone quattro vuoti. Nella pagina Protocollo, rimuovere le schede di controllo o sperimentali non necessarie e abbinare le assegnazioni delle porte del software alle posizioni del farmaco sulla cartuccia. Impostare 10 cicli per la linea di base, 3 cicli per l'oligomicina, 7 cicli per il FCCP e 9 cicli per la miscela di rotenone e antimicina-A.Assicurarsi che ogni ciclo consista in tre minuti di mescolamento, due minuti di attesa e tre minuti di misurazione. Rimuovere la cartuccia e la piastra di servizio dall'incubatrice umidificata preparata la sera precedente. Successivamente, rimuovere l'idrobooster e il coperchio dalla cartuccia e posizionare la cartuccia sensore sulla piastra di servizio contenente il calibrante.Pipettare delicatamente gli inibitori nei rispettivi pozzetti lungo la parete laterale, evitando di battere. Nel software, selezionare Esegui saggio. Assegnare un nome alla corsa e fare clic su Avvia corsa.Salvare l'esecuzione con un nome file e caricare il saggio. Una volta aperto il vassoio dell'analizzatore, posizionare la cartuccia caricata con i farmaci e la piastra di utilità contenente il campione di calibrazione secondo la mappa della piastra presente sul vassoio. Premere Esegui saggio per avviare il saggio.Dopo aver coperto la piastra a occhielli contenente cuori isolati con una griglia, verificare che tutte le pozzette siano state correttamente calibrate mediante il segno di spunta verde nel software. Quindi fare clic su Apri Vassoio per espellere la piastra di utilità. Senza il coperchio, posizionare la piastra a occhielli nell'analizzatore con l'angolo A1 in alto a sinistra e fare clic su Carica Piastra Cellule per avviare l'esperimento.Al termine dell'esperimento, fare clic su Espelli per espellere la piastra a occhielli e la cartuccia. Rimuovere la piastra a occhielli e la cartuccia espulsi dall'analizzatore e chiudere la cartuccia con il coperchio. Conservare la piastra a occhielli sul ghiaccio secco.Quindi fare clic su Fine per chiudere il vassoio. Infine, fare clic su Visualizza risultati per visualizzare i dati. Salvare ed esportare le misurazioni dal computer dell'analizzatore.Caricare i dati sull'interfaccia di analisi e selezionare il grafico del tasso di consumo di ossigeno (OCR) da Visualizzazioni standard. Visualizzare l'OCR e il tasso di acidificazione extracellulare, o livello ECAR, e correggere il fondo utilizzando pozzetti vuoti. Selezionare Pozzetti dalla mappa della piastra per mostrare o nascondere i dati.Dopo aver quantificato i livelli proteici, normalizzare le misurazioni di OCR e ECAR per garantire un confronto affidabile tra i campioni. I ventricoli selvatici non danneggiati, senza trattamento farmacologico, hanno mostrato un tasso di consumo di ossigeno e un tasso di acidificazione extracellulare stabili, indicando una funzione respiratoria normale e la sopravvivenza dei ventricoli in condizioni ex vivo. È stato osservato un lieve aumento del tasso di consumo di ossigeno con 10 micromolar oligomicina, otto micromolar FCCP e 25 micromolar rotenone e antimicina.Un aumento leggermente maggiore è stato osservato con 50 micromolar oligomicina, 30 micromolar FCCP e 45 micromolar rotenone e antimycinina. Dopo la permeabilizzazione, il tasso di consumo di ossigeno ha mostrato una riduzione sostenuta e non è aumentato dopo l'iniezione di FCCP, indicando un fallimento metabolico dei ventricoli permeabilizzati. Il trattamento con oligomicina non altera in modo significativo il tasso di consumo di ossigeno.FCCP ha aumentato la velocità di consumo di ossigeno e la velocità di acidificazione extracellulare, con i ventricoli che sovraesprimono la malato deidrogenasi citosolica 1 AB che mostrano la massima capacità respiratoria rispetto ai ventricoli di controllo. Utilizzando questo protocollo, il consumo di ossigeno e la velocità di acidificazione extracellulare dei cuori di zebrafish possono essere misurati ex vivo. I dati di ECAR riflettono non solo il lattato derivato dalla glicolisi, ma anche l'anidride carbonica derivata dalla respirazione, entrambi influenzanti l'acidificazione extracellulare.

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Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Zebrafish rappresenta un potente modello vertebrato che è stato sotto-utilizzato per studi metabolici. Qui si descrive un metodo rapido per misurare...

Analisi Profilo metabolico di embrioni di zebrafish

L'uso del pesce zebra per la ricerca cardiovascolare si sta espandendo verso la ricerca sui cuori adulti. Per queste applicazioni, l'isolamento rapido e semplice dei tessuti cardiaci è fondamentale per evitare modifiche post-mortem e per ottenere un numero adeguato di campioni. Qui, descriviamo un metodo rapido e riproducibile per sezionare i cuori di pesce zebra adulto.

Recupero di Zebrafish adulti cuori per applicazioni ad alta velocità effettiva

I pesci zebra sono un importante organismo modello per lo studio dell'omeostasi energetica.  Utilizzando un indicatore redox sensibile al NADH2, alamar Blue, abbiamo sviluppato un test che misura il tasso metabolico delle larve di zebrafish in un formato di piastra a 96 pozzetti e può essere applicato alla scoperta di farmaci o geni.

High Throughput<em&gt; Danio Rerio</em&gt; Energia spese Assay

Qui, presentiamo un protocollo per visualizzare lo sviluppo di cuori in zebrafish in 4 dimensioni (4D). Imaging 4D, tramite microscopia di fluorescenza di luce-foglio (LSFM), prende 3-dimensionale (3D) immagini nel corso del tempo, di ricostruire i cuori in via di sviluppo. Indichiamo qualitativamente e quantitativamente che lo shear stress attiva endocardial tacca di segnalazione durante lo sviluppo di camera, che promuove trabeculation cardiaco.

Microscopia di fluorescenza di luce-foglio di catturare immagini 4-dimensionale degli effetti di modulazione dello sforzo di taglio sul cuore Zebrafish in via di sviluppo

Questa tecnica viene descritto la registrazione in tempo reale del consumo di ossigeno e tassi di acidificazione extracellulare nei tessuti retinici explanted del mouse utilizzando un analizzatore di flusso extracellulare.

Misurazione del metabolismo energetico in tessuto retinico Explanted usando l'analisi di flusso extracellulare

Descriviamo un protocollo per valutare la morfologia cardiaca e la funzione nel pesce zebra adulto utilizzando l'ecocardiografia ad alta frequenza. Il metodo consente la visualizzazione del cuore e la successiva quantificazione dei parametri funzionali, come la frequenza cardiaca (HR), l'uscita cardiaca (CO), il cambiamento dell'area frazionaria (FAC), la frazione di espulsione (EF) e la velocità di afflusso e deflusso del sangue.

Ecocardia ad ultrasuoni ad alta frequenza per valutare la funzione cardiaca del pesce zebra

Questo protocollo utilizza l'imaging a foglio luminoso per studiare la funzione contrattile cardiaca nelle larve di zebrafish e ottenere informazioni sulla meccanica cardiaca attraverso il monitoraggio cellulare e l'analisi interattiva.

Imaging a foglio luminoso 4D della contrazione cardiaca del pesce zebra

Questo protocollo descrive un metodo di microscopia ottica a basso costo per valutare la morfologia e la funzione cardiaca negli embrioni di zebrafish, consentendo una valutazione riproducibile della cardiotossicità dello sviluppo senza la necessità di sistemi di imaging avanzati.

Imaging cardiaco funzionale in embrioni di zebrafish utilizzando microscopia standard e analisi video: applicazioni nella ricerca ambientale e biomedica

I metodi presentati forniscono istruzioni passo dopo passo per l'esecuzione di una raccolta di saggi respirometrici basati su micropiastre utilizzando mitocondri isolati da quantità minime di muscolo scheletrico di topo. Questi saggi sono in grado di misurare i cambiamenti/adattamenti meccanicistici nel consumo di ossigeno mitocondriale in un modello animale di uso comune.

Utilizzo di mitocondri isolati da minime quantità di muscolo scheletrico del mouse per High micropiastre rendimento respiratorie Misure

La coltura di goccioline verticali ex vivo è un'alternativa alle attuali tecniche sperimentali in vitro e in vivo. Questo protocollo è facile da eseguire e richiede piccole quantità di reagente, consentendo al contempo la capacità di manipolare e studiare la vascolarizzazione, la morfogenesi e l'organogenesi fetale.

Utilizzando<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Upright Droplet Culture di interi organi fetali per studiare i processi evolutivi durante mouse Organogenesi

University of Oxford.  In questo articolo descriviamo un protocollo dettagliato per quantificare il tasso di consumo di ossigeno e il tasso di acidificazione extracellulare dei ventricoli adulti ex vivo per caratterizzare la loro capacità metabolica ossidativa e glicolitica.

Valutazione dell'attività metabolica dei ventricoli interi rigeneranti del pesce zebra ex vivo utilizzando un saggio extracellulare di flusso

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