Name: In vitro Analisi funzionale delle cellule T regolatorie: attenzione alla proliferazione e differenziazione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-09T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Scopri un saggio in vitro modificato per analizzare la proliferazione e la differenziazione delle cellule T effettrici mediante co-cultura con cellule Treg murine e citometria a flusso.

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<table><tbody><tr><td>1.5 mL centrifuge tube</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3457IW</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>12.5 &micro;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420043</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>1250 &micro;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420813</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>15 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339650</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>200 &micro;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420318</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>48-well plates</td><td>Corning Incorporated</td><td>3548</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>5 mL syringe piston</td><td>Shifeng Medical</td><td>SB2-061(A)</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>50 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>50 &micro;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420258</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>70 &micro;m cell strainer</td><td>Biosharp Life Sciences</td><td>BS-70-CS</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD28 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0015-1</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD3 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0001-1</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD4 PerCP-Cy5.5 (RM4-5)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>45-0042-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse Foxp3 PB (FJK-16s)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-5773-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse IFN-gamma PE (XMG1.2)</td><td>BioLegend</td><td>505808</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse IL-17A PE-Cy7 (eBio17B7)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-7177-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Beckman CytoFLEX S Flow Cytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td>per l'acquisizione di dati citometrici di campioni di cellule immunitarie</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2064</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>SM-001</td><td>per l'isolamento di linfociti primari e sottoinsiemi di cellule T</td></tr><tr><td>CD25 Monoclonal Antibody (PC61.5), PE</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-0251-83</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-041</td><td>per l'ordinamento delle cellule</td></tr><tr><td>CD4+CD62L+ T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-643</td><td>per l'ordinamento delle cellule</td></tr><tr><td>CD45.1 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>NM-KI-210226</td><td>per l'isolamento di linfociti primari e sottoinsiemi di cellule T</td></tr><tr><td>CD45.1 Monoclonal Antibody (A20), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0453-85</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>CD45.2 Monoclonal Antibody (104), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>47-0454-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>CD62L (L-Selectin) Monoclonal Antibody (MEL-14), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0621-85</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>eBioscience Cell Proliferation Dye eFluor 450</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>65-0842-90</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>E1170</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5669701</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>FlowJo 10.6.2</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>software per l'analisi dei dati citometrici</td></tr><tr><td>Golgi-Plug Protein Transport Inhibitor</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Human TGF-beta1</td><td>PEPROTECH</td><td>100-21C</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Ionomycin calcium salt</td><td>Millipore Sigma</td><td>I3909</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>LD Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-901</td><td>per l'ordinamento delle cellule</td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>LS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>per l'ordinamento delle cellule</td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td>per l'ordinamento delle cellule</td></tr><tr><td>MS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td>per l'ordinamento delle cellule</td></tr><tr><td>OctoMACS Separators</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td>per l'ordinamento delle cellule</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010049</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>PE Rat IgG1, &kappa; Isotype Ctrl Antibody</td><td>BioLegend</td><td>400408</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7 Rat IgG2a kappa Isotype Control Antibody</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-4321-82</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>PMA</td><td>Millipore Sigma</td><td>P8139</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Purified anti-mouse CD16/32 Antibody</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>QuadroMACS Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td>per l'ordinamento delle cellule</td></tr><tr><td>Recombinant mouse IL-12 p70</td><td>PEPROTECH</td><td>210-12</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Recombinant Mouse IL-6</td><td>R&amp;D Systems</td><td>406-ML</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Red Blood Cell Lysis Buffer (ACK Lysing Buffer)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1049201</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360070</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>UltraComp eBeads Compensation Beads</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>01-2222-42</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>Zombie Yellow Fixable Viability Kit</td><td>BioLegend</td><td>423104</td><td>o equivalente</td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td>o equivalente</td></tr></tbody></table>

in vitro analisi funzionale delle cellule t regolatorie: attenzione alla proliferazione e differenziazione

In Vitro Functional Analysis of Regulatory T cells: Focus On Proliferation And Differentiation

Nell'esperimento rappresentativo, le cellule T naïve sono state utilizzate come cellule Tresp per indagare gli effetti delle cellule arricchite con Treg sulla proliferazione e differenziazione delle cellule Th1 e Th17. In questo esperimento, le cellule Tresp sono state attivate da cellule anti-topo CD3 e non CD4+ arricchite con APC, per poi differenziarsi in cellule Th1 sotto induzione IL-12 p70 o in celle Th17 sotto induzione TGF-β1 e IL-6. In queste due condizioni di induzione, sono stati studiati cambiament...

In vitro Analisi funzionale delle cellule T regolatorie: attenzione alla proliferazione e differenziazione

Regulatory T (Treg) cells play key roles in maintaining immune homeostasis. Abnormalities in Treg cell function are associated with various diseases, ...

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Noi descriviamo un metodo per generare le cellule T normativo, di memoria e naif da un singolo donatore di sangue umano. Polarizzato Tregs può essere quindi confrontato con altri sottoinsiemi in una varietà di applicazioni genetiche e funzionali con omogeneità genetica, comprendente un saggio di soppressione anche dettagliati qui.

Generazione di cellule T regolatrici indotte da cellule primarie umane T naive e memoria

Generazione di linfociti T da staminali pluripotenti indotte (iPS), le cellule fornisce un approccio alternativo di utilizzare cellule staminali embrionali per T cell-based immunoterapia. Il metodo dimostra che utilizzando...

Differenziazione Regia di cellule staminali pluripotenti indotte verso Linfociti T

CD4+ Le cellule T regolatorie sono potenti immunomodulatori e svolgono importanti funzioni nell'omeostasi immunitaria. La scarsità di queste cellule nel sangue periferico rende difficili gli studi funzionali, in particolare nel contesto dell'infezione da HIV-1. Qui descriviamo un metodo per isolare ed espandere le Treg CD4+ funzionali dal sangue periferico di individui con infezione da HIV-1.

Nuovi strumenti per espandere cellule T regolatorie di individui HIV-1-infetti

Adenovirale trasferimento genico nelle cellule T CD4 naive con transgenici espressione del recettore adenovirus Coxsackie permette l'analisi molecolare della differenziazione delle cellule T...

Trasduzione Adenoviral di CD4 T naive Cells allo Studio Differenziazione Treg

Le cellule T CD4+ ingenue si polarizzano in vari sottoinsiemi a seconda dell'ambiente al momento dell'attivazione.  La differenziazione delle cellule T CD4+ naive in vari sottogruppi di effettori può essere ottenuta in vitro attraverso l'aggiunta di stimoli recettoriali delle cellule T e segnali specifici delle citochine.

Mouse Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; Isolamento T cellulare e<em&gt; In vitro</em&gt; Differenziazione in T sottopopolazioni cellulari

Qui, descriviamo un protocollo per analizzare il fenotipo delle cellule T regolatorie (Treg) isolate da topi naïve e cronici infetti dal virus della coriomeningite linfatica. Inoltre, forniamo un processo per valutare l'attività soppressiva delle cellule Treg.

Fenotipica e analisi funzionale di cellule T regolatorie attivati ​​Isolato dal linfocitica cronica coriomeningite topi infettati da virus

Questo protocollo descrive la generazione riproducibile e fenotipizzazione delle cellule T regolatorie indotte umane (iTregs) dalle cellule naïve T CD4 + in vitro. Diversi protocolli per l'induzione FOXP3 permettono lo studio di specifici fenotipi iTreg ottenuti con rispettivi protocolli.

La differenziazione in vitro di cellule CD4 + umana FOXP3 + indotta da T regolatorie (iTregs) da cellule T CD4 Naïve utilizzando un protocollo TGF-β contenenti

Qui, presentiamo un protocollo per indurre la tolleranza nel trapianto e valutare in vitro e in vivo la capacità soppressiva delle sottopopolazioni cellulari distinti dal destinatario e lo stato immunitario del destinatario verso il donatore o antigeni esogeni.

In Vitro e In Vivo valutazione della attività soppressiva T, B e cellule mieloidi e risposte umorali dai destinatari del trapianto

Questo articolo descrive un nuovo metodo per generare emigranti timici (iTE) derivati da cellule staminali specifiche dell'antigene tumorale del tumore da un sistema di coltura timica tridimensionale (3D). ITE sono un sottoinsieme omogeneo di cellule T strettamente correlate alle cellule T ingenue con la capacità di proliferazione, formazione della memoria, e la soppressione del tumore.

Un sistema di coltura timica tridimensionale per generare emigrati timici derivati da murine

Qui descriviamo un metodo robusto per determinare l'identità e la purezza delle cellule immunitarie attraverso firme epigenetiche rilevate utilizzando la PCR quantitativa (qPCR). La demetilazione del DNA in un locus specifico funge da identificatore univoco per un particolare tipo di cellula e consente l'identificazione delle cellule T CD8, normative o Th17.

Determinazione dell'identità e della purezza delle cellule immunitarie utilizzando la PCR quantitativa basata sull'epigenetica

Scopri un saggio in vitro modificato per analizzare la proliferazione e la differenziazione delle cellule T effettrici mediante co-cultura con cellule Treg murine e citometria a flusso.

In vitro Analisi funzionale delle cellule T regolatorie: attenzione alla proliferazione e differenziazione

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