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$$\longrightharp{xx}$$,
1。 tetrodesの作製
- 長さ50センチメートルを取得して、1つ四極管の建設を開始、12.5ミクロンの直径のコアと絶縁、NI -クロム線をポリイミド。半分に線を折る。それらがくっつきようにペアに沿って指を実行します。ワイヤのペアがその全長にわたって良好な接触を持っていることを確認してください。
- 一緒に両端を保持することによって再びペアを折る。一端に形成されるループがねじれていないことを確認してください。 4つのヒントが合うように非ループの端の4本の線をカット。
- 次のステップでは、修正されたワニ口クリップ、電動回転装置、旋回装置上の水平バーが必要になります。ワニ口クリップを接着することにより、クリップのベースにプラスチック製のバーが変更されます。ワイヤの先端が露出している場合には、修正されたワニ口クリップと一緒に4本の線をクランプする。水平バーの上にワイヤーのループをハングアップする。電動ステージにワニ口クリップを置きます。
- 約3分かけてワイヤの束〜40カウンタークロックワイズねじれが続く80クロック単位でひねりを適用します。これらのパラメータは、必要に応じて変化させることができる。
- テトロードのねじれが完了すると、中低フローを使用して、ヒートガン（420 ° Cまたは790 ° F）で3つの異なる形から加熱して一緒にワイヤーを融合する。それぞれの角度の場合、約5秒間の配線から2cmの距離で、電線束が分割下記1〜2センチメートルを始めるヒートガンを駆け降りるとまで。高温で完全に断熱材を溶融し、短絡につながるとして、十分に注意してください。
- 今すぐワイヤが一緒に融合していることを、そっと四極管の緊張を緩和するために、ワニ口クリップを持ち上げて、ねじれ装置からテトロードを削除し、ワニ口クリップの近くに四極管をカット。もう一方の端で、同じ長さのワイヤの4つの非結合ストランドが存在するようなループをカット。
- 次に、柔らかい先端がピンセットで線を曲げることにより上部の個々のストランドを分離する。
- テトロードは現在のマイクロドライブの配列にロードするための準備ができています。 21から25以上のtetrodesを作成し、それがテトロードのロードプロセスのための時間になるまで、埃のないボックスに格納します。
2。マイクロドライブアレイにtetrodesとアース線をロード
- 続行するには、完全なマイクロドライブアレイが必要になります。あなたがまだ一つを構築していない場合、ビデオを参照してください"慢性的なin vivoでの録音のためのマイクロドライブアレイ：。ドライブの製造"私たちの設計計画では、四極管は、コネクタハードウェアの一端に装着され、電極チップは、マイクロドライブアレイのベースの下に延びるように、マイクロドライブにポリイミドキャリアの管を通って実行されます。
- 開始する前に、一端にコネクタボードに取り付けることができる、そしてもう一方の端に、panaviseによってクランプすることができるドライブのホルダーを構築する。この例では、ドライブのホルダーは、X - ACTOのナイフのハンドル（図1c）の一方の端に接着ミル- maxのコネクタです。
- マイクロドライブのいずれかのキャリアのチューブをポリイミドに柔らかい先端がピンセットで四極管を保持し、ステレオスコープを用いて、四極管の先端を押してください。個々の電極ワイヤは、ドライブアレイの最上部にあるコネクタボードに近いようになるまでチューブに四極管を押し込みます。キンクたり、曲げたり電線を、それが四極管の角度で、脳ではなく、垂直に入るの原因となります、と四極管の整合性を弱体化するように注意してください。
- 柔らかい先端がピンセットを用いて電極のインタフェースボードのそれぞれの穴に4本のワイヤーのもう一方の端をフィード。もう一度、配線をよじれたり、曲げないように。場所内のすべての4本のワイヤで、短縮下顎を持っているプライヤーでその穴に金色のピンを押してください。ピンが穴に押し込まれている場合、彼らは、銅線の絶縁被覆と電気的に接続を作成します。
- 後で参照するために、マイクロドライブ、電極インタフェースボード上のピン位置との間のマッピングを追跡します。
- 18 tetrodesの合計のロードを続行。アレイ上の残りの3つのマイクロドライブは、参照電極を収容するために使用されます。各参照電極は、4つのアンボンドワイヤの端の一方のみを使用する四極管で作られています。参照電極を取り付けるために、ローディングの手順に従いますが、コネクタの基板上のそれぞれの参照電極のピンに4つの電極の一方のみを添付する。
- あなたがマルチサイト録音を計画している場合、それはtetrodesから事前にコネクタボードへの接続を計画する価値があるかもしれない。これは、実験中に間違って四極管の調整の可能性を最小限にする必要があります。
- テトロードのローディングが完了すると、2つの接地線、動物用と保護コーンのための1つを行います。 1つの6"長い絶縁鋼線（テキスト：0.005"直径）をカットし、ワイヤの両端から、金属製のピンセットを使用して、絶縁体の周囲3mmを削除します。次に4をカット"長い間絶縁鋼線（テキスト：0.005"直径）。一端と反対側で1 cmの絶縁体の周囲3mmを削除します。
- インタフェースボードに向かってマイクロドライブアレイと、最大の側面の穴に通します6'アース線を。指定された地面の穴でゴールドピンと電極界面のボードへの導線が接続してください。この線は、動物の頭蓋骨に接続します。
- 以前にインストールされているアース線への経路4'アース線に平行。別の指定された地面の穴に金のピンを使用して電極のインタフェースボードから3mm被覆をはぎとった端を接続します。この線は、後でノイズのピックアップを減らすために小さなファラデーケージとして機能する保護コーン、に接続されます。我々は現在、接続ワイヤを終了していると私たちのtetrodesを精製に進むことができます。
3。 tetrodesの長さを設定する
- この過程で私たちの目標は、彼らが少し長くターゲットの脳の構造の深さよりもされるように、すべてのtetrodesをカットすることです。この例では、マイクロドライブは、多くの新皮質の領域と成体ラットの背側海馬に到達するのに十分な5〜6ミリメートル、最大旅行のために設計されています。最初に、tetrodesが最大限に露出するようにすべてのマイクロドライブを下げる。同時に鋭い細かいハサミを用いて所望の最終的な長さより約5mm長い長さにすべてのtetrodesをカット。
- 最後のカットの場合は、panaviseで鋸歯はさみのペアを用意。わずかな角度の下方で、ダングリング他のハンドルを残したまま、上向きセレーション付つのハンドルをクランプする。
- 今すぐ完全にマイクロドライブを上向きにすることで、彼らのガイドカニューレにすべてtetrodesを撤回。
- ステレオスコープを使用して、完全にそのカニューレから一テトロードを引き出さない。ガイドカニューレから所望の距離で定規、位置ギザギザハサミを使用する。ゆっくりとゆっくりとの滑らかな動きとの四極管をカット。この四極管が切断された後、3〜4ミリメートルで、最大のマイクロドライブ撤回。すべてが切断されるまで、各テトロードに、このプロセスを繰り返します。この時点で、金めっきのための準備が整いました。
4。 tetrodesと品質チェックの金めっき
ニクロムテトロード線をメッキゴールドは、長期安定的な録音のための非常に重要です。それは腐食し、改善する生体適合性を防ぎます。
- 外部モードでのインピーダンスメータとオーディオ出力（図1d）とDCのチェックモードでの電流発生器をセットアップします。各四極管内のチャネルの6つのペアに現在の発電機の2本のリード線をタッチし、ショートパンツがペア間に存在するかどうかを判断するために、オーディオフィードバックを使用してください。短絡が存在する場合は、もう一度鋸歯状のはさみとテストと四極管を再カット。問題が解決しない場合は、四極管を破棄し、それを交換してください。
- ショートパンツはすべてtetrodes内に存在しない場合、のような遠いできるだけすべてtetrodesを拡張し、すべてのマイクロドライブを下に移動。
- 電極のインピーダンス（図1e）チェックするための機器構成を変更します。今すぐすべてのtetrodesのヒントは、標準の金めっき液の浴に手をつける。金浴を電気的インピーダンスの電圧計の正側に接続されている。コネクタボード上の対応する端子にインピーダンスメーターの負のリード線に触れることにより、電極のインピーダンスを確認してください。
- マイクロドライブのアレイ上のすべてのワイヤのインピーダンスを測定し記録する。正常値は1-3 Mohmをからの範囲。
- 現在の発電機では、1〜3μAの間に電流を設定します。次に、しっかりとコネクタ基板上の端子にインピーダンスメーターの負のリード線を取り付けます。電気めっきの構成（図1F）に機器を置きます。インピーダンスメータでは、すぐにバックモードをバイパスするために、通常モードから切り替えて、と。バイパスモードでは、現在では、四極管と金溶液を通過する、とゴールドは、電極の先端上にプレーティングされます。メッキの各ラウンド後のインピーダンスは、以前よりも小さくする必要があります。インピーダンスは1MΩを上回るの下にドロップしなかった場合の電流パルスを繰り返します。許容インピーダンスの保守的な範囲は350キロオームに250kOhmです。インピーダンスが200キロオームを下回った場合、これは短絡している可能性があります。
- 繰り返しパルスの後のインピーダンスが十分に低下しない場合、電極の先端が詰まっされることがあります。テトロードを再カット、ショートパンツをチェックし、金メッキ処理を繰り返します。再加工で効果がない場合は、四極管を交換し、再度起動してください。
- すべてtetrodesをメッキした後、エタノールで簡単にテトロードのヒントを浸し、そして、それらが3〜5分間乾燥させます。
- 空気にさらさテトロードのヒントを、現在のジェネレータを使用してtetrodes内で短絡回路のテスト。 DC接続は、四極管の二つ以上の電極の間に存在する場合は、再び金で四極管、そしてプレートを再カット。
- すべてtetrodesの金メッキが完了したら、各tetrod間のインタフェースに中厚シアノアクリレート接着剤のドロップを追加eとそのはチューブポリイミド。これは、マイクロドライブに四極管を固定し、四極管の長さを維持します。
- 最後のステップとして、すべてのネジを回して、ドライブにすべてのtetrodesを移動する。
5。保護コーンの取り付け
保護コーンの目的は、環境からのマイクロドライブと露出テトロードのワイヤーを保護することです。また、実験中に処理するためのサポートを提供し、電気的なノイズを低減します。我々は3次元印刷プラスチックコーン（：ドライブの製造リファレンスパートI）を使用してください。しかし、それは缶ソーダの曲がった部分のように、他の材料から円錐を作ることは可能です。
- プラスチック製のコーンに乗り、内側または外側の表面にいくつかのアルミ箔テープを修正。
- 次に、コーンを通して小さな穴（直径1.5 mm）をドリルダウンして、ゆるく円錐内部にワッシャーとナットでネジを取り付けます。これは、アース線の電気の通路として機能します。我々は00から80サイズのネジとワッシャーの組み合わせを使用することをお勧めします。
- 最初に、挿入と部分的に円錐の側面に3つ1〜72サイズのネジを（長さの3 / 16インチ）にします。ドライブアレイは一時停止して、ドライブ上のコーンを挿入します。両方のアース線は、ドライブアレイの底から伸びることを確認してください。何回か1から72のネジを1本の周りに4'アース線の露出部分をラップし、しっかりとネジを締めます。残りの二つの円錐のネジを締めて、ドライブのベースにコーンを固定します。
- 最後に、1cmの短いアース線の被覆のない部分を取ると箔テープと座金との間で、ネジの周りにそれを巻き。ネジを締めて、地面を固定します。今、私たちは最後に外科的移植の準備ができているマイクロドライブアレイを持っている。
6。代表的な結果
- マイクロドライブアレイの生産はこれで完了です。あなたのマイクロドライブアレイは、18 tetrodesと3つの参照チャネルがロードされます。それは耐久性の保護コーンとキャップに収められています。保護コーンと終了のマイクロドライブアレイは、平均で25gまで20グラム重量を量る。
- 終了ドライブアレイは、標準的な外科的処置を用いて注入される。ご覧のように、ドライブはプリアンプのチップとデータ集録ハードウェアとソフトウェアに信号を伝送する線の束に取り付けられています。
図1：テトロードねじれ設定の）回路図。水平バーは自動化されたテトロード式ツイスト装置上記の四極管の未結合電極ワイヤを中断。テトロードのインピーダンスの測定と電極メッキ用B）のセットアップ。短絡をチェックするときに、回路が異なっている：。黒いワイヤがコネクタの基板上の別の電極のチャネルに接続されているC）クローズアップカスタムのマイクロドライブアレイホルダーのツールが作ら。円筒形のバーは、X - Actoのナイフの柄です。コネクタは26ピン、二列、ミル- maxのコネクタです。短いチェックのための2つの部分が歯のアクリルを使用して互いに結合している。D）の構成。チャンネルXとチャンネルYは4テトロードチャネルの任意の2つの異なったチャネルである。E）電極インピーダンスを測定するための構成。電流源は、'off'です。インピーダンスメーターが'on'と'試験'に設定されています。F）は、電極チップの金めっきの構成は、。電流源が'on'の場合、オーディオが'on'であるために設定され、モードは"ユニポーラ"であり、DCテストが'on'である、現在は2マイクロアンペアに設定されています。