この記事では、UV殺菌細菌食品を固体培地上で維持線虫の寿命を測定するための一般的なプロトコルを提示する。
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この記事について
サマリー
要約
老化は細胞成分と死亡率をもたらす細胞内小器官の進行性の悪化によって特徴付け変性過程です。線虫
プロトコル
パート1：準備線虫の増殖培地（NGM）プレート
このセクションでは、寿命の実験のための固体NGMプレートの準備について説明します。アンピシリン（アンプ）とNGMに追加fluorodeoxyuridine（FUDR）の両方を持っていない添加物、およびアンプ/ FUDRプレートが含まれていては標準のNGMプレート、：基本的な寿命の実験では、プレートの2つのタイプが必要です。アンピシリンは、外国の細菌汚染を防ぐために使用されます。 FUDRは、細胞分裂を阻害卵の生産が減少し、孵化から卵を防ぎます。長寿の分析のためのFUDRの使用は、成人の寿命に影響を与えると成長する幼虫からそれらを分離するために数日ごとにワームを転送する必要がなくなりますしていません。プレートの両方のタイプがEでシードされていますその後、紫外線への曝露によって殺されている大腸菌 OP50細菌、。
- NGM（レシピとストレージノート用のセクション5を参照）とラベルのペトリ皿を準備します。あなたは、NGMの10 mLの当たり1 60ミリメートルのペトリ皿が必要になります。以前に調製した固体NGMで開始している場合は、1.2に進みます。あなたが新鮮なオートクレーブNGMで開始している場合は、1.4に進みます。
- 完全に30秒のパルスに高い上に電子レンジで固体NGMを溶かす。構築から加圧ガスの気泡を防ぐために、パルス間の渦巻のメディア。 <....
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ディスカッション
長寿の遺伝的制御は 、Cで広く研究されている寿命を決定することができる容易さと速さが主な原因虫 、。この記事に記載されているプロトコルは、Cの再現性の寿命のデータを取得するための基本的な枠組みを説明しエレガンスとはrelatednematodeの種にも適用できます。2は 、これらの手順は、さまざまな条件下での寿命を測定するために適合させることができるいくつかの簡単な変更を行うことで。ここでは、RNA干渉（RNAi）、細菌の欠乏による食事制限、および薬物のないNGM、生菌を含むいくつかの一般的なバリエーションを、説明します。
おそらく、このプロトコルの最も一般的なバリエーションは、生菌でワームのメンテナンスです。これは、いくつかのマイナーな変更を加えることによって達成することができます。最初に、細菌（1.13までのステップ1.7）でプレートをシードするための手順を変更。代わりに飽和するOP50の文化を育てると、200μLの培養液から直接プレートに中期対数増殖期とピペットに成長する。細菌は一晩.......
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謝辞
この作業は、老年学の賞とNIHグラントMKGSへ1R01AG031108 - 01 NIH訓練助成金P30AG013280でサポートされているのグレン/遠くブレークスルーによってサポートされていました。 MKは、高齢化のエリソン医学財団新奨学生です。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント | |
|---|---|---|---|---|
| アガー | 試薬 | Fisher Scientific | DF0145-17-0 (214530) | |
| アンピシリン | 試薬 | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | 試薬 | Fisher Scientific | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | 試薬 | Fisher Scientific | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | 試薬 | Fisher Scientific | NC9699248 (1332-01) | |
| カルベニシリン | 試薬 | Gold Biotechnology | C0109 | |
| コレステロール | 試薬 | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| フルオロデオキシウリジン (FUDR) | 試薬 | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| イソプロピル β-d-チオガラクトピラノシド (IPTG) | 試薬 | Gold Biotechnology | I2481C5 | |
| KPi 二塩基塩 | 試薬 | Fisher Scientific | 5087862 (3252-01) | |
| KPi 一塩基塩 | 試薬 | Fisher Scientific | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | 試薬 | Fisher Scientific | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | 試薬 | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | 試薬 | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| 酵母エキス | 試薬 | Fisher Scientific | DF0886-17-0 (288620) |
参考文献
- Wood, W. B. The Nematode Caenorhabditis elegans. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).
- Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).....
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再版と許可
