著者らは開示するものは何もない。

背側前脳の外植片上に成長因子-コーティングビーズの配置

このビデオでは、大脳皮質の外植片に、成長因子でコーティングされたビーズを、準備して置くための2つの方法を示しています。これらのビーズは、前脳の外植片のような神経組織の開発に空間的に制限された遺伝子の発現を誘導するために使用することができます。メソッドは、アッフィ - ゲルビーズやヘパリンacryllicビーズの両方を使用するために与えられている。

これが私が最初に使用するビーズの種類です。ジェルブルーのジェルビーズです。彼らは柔らかいです。だから、私はXs.Theのビーズの2番目のタイプは、ヘパリンアクリルビーズであるXs.Theにこれらのビーズを配置するために、口ピペットの端にプールガラスピペットを使用する必要があります。それらは硬いタイプのビーズであり、タングステン針を使用してX外植片にこれらのビーズを配置します。これがガラスキャピラリーチューブで、まずブンゼンバーナーで溶かします。次に、それらを引っ張って、より細かい先端を作成します。そこで、キャピラリーチューブを炎の真ん中に持ち、チューブが溶けるときに転がします。柔らかくなるのが感じられます。炎から持ち上げてから引き抜きます。このダイヤモンドチップペンで毛細管全体に線をエッチングして、まっすぐにカットできるようにします。次に、端を火炎研磨してきれいにします。キャピラリーを炎に通して端を磨き、開口部を小さくして、ビーズがキャピラリーを通過するのではなく、ビーズを捕らえることができるようにします。注意すべき重要なことは、キャピラリーチューブを炎の中であまり長く保持したくないということです。実際には非常に速いパスで、そうでなければシールされてしまいます。私は通常、これらのいくつかを作成しますが、その多くは先端が炎で密封されている場所で判明するためです。コントロールするのが難しいので、いくつか作るだけです。これは、先端が密閉されている例です。これは良いピペットの一例です。私はこのエイノールチューブに250マイクロリットルのアゲルビーズをピペットで入れ、1ミリリットルのPBSで5回洗って、浸していたアジ溶液を取り除きます。ビーズが落ち着くまで約3分待ってから、余分なPBSを吸引し、これをさらに4回繰り返します。ビーズはまだ完全に落ち着いていないので、ビーズが落ち着いているので、余分なPBSを吸引してこれを4回繰り返すつもりです。そして最後に、PBSを300マイクロリットル追加して、ビーズの作業を開始します。これは標準的なマウスピペットで、引っ張ったキャピラリーを3分の1ほど上に押し込むだけです。まず、ピペットにPBSを入れます。それは通常、毛細管現象だけで満たされます。これは30ミリ培養皿の蓋をしたもので、ビーズの液滴を青く入れました。そしてその隣にはPBSの小さな液滴があります。そして、この皿には5マイクロリットルのタンパク質溶液が入っています。この場合、BとPの4つですが、マウスピペットを使用して選択したタンパク質を使用することもできます。ここでこの青い円からビーズを移し、PBSの液滴で一度すすぎます。次に、ビーズをマウスピペットで取り、タンパク質溶液の液滴に入れ、室温で約1時間または4度で数時間インキュベートします。そこで、PBSにビーズのプールがあり、適切なサイズのビーズを選択する必要があります。小さすぎると、マウスピペットを通過するだけです。彼らはただ最後に座っている必要があります。さて、ここで私が選んだビーズ、大きいビーズが3つ、小さいビーズが3つあることがわかります。実験では大きい方のビーズを使用します。次に、PBSの液滴から大きなビーズをタンパク質溶液の液滴に移します。そのために、舌をマウスピペットからそっと引き離します。吸うような動きではなく、ただ負圧をかけるだけです。そして、それを移し替えてから、基本的に舌を口の上に戻します。パイプヘッドは、吹くのではなく、ビートを端から押し出すために正の圧力を追加するだけです。現在、タンパク質溶液の液滴に5つのビーズがあり、それらを4度で数時間、または室温で30分から1時間インキュベートします。つまり、これは、私がすでに解剖したナスと一緒に培地に浮かんでいる膜を含む培養皿です。ピペットの先端を取って、メディアの一部を吸い込みます。X explanにビーズを配置する直前に、メディアの液滴でビーズを1回だけすすぎます。これらは、アクリルビーズを拾って配置するために使用するタングステン針です。これはタングステン針で、今はホルダーに入っています。そして、これらはいくつかの素晴らしい鉗子です。45度の角度で。タングステン針を鉗子で使用して、このPBSのプールからビーズを持ち上げ、ビーズをタンパク質溶液の液滴に移します。私がアゲルビーズでやったように。アゲルビーズと同様に、これらのアクリルビーズをPBSで5回すすぎ、液滴をこのプレートに移しました。次に、タングステン針を鉗子で使用して、ビーズをタンパク質の液滴に移し、ゲルビーズと同じようにインキュベートします。だから、ビーズを持ち上げるのです。私は右手をテーブルにしっかりと押し付け、左手の人差し指で針を安定させながら液体の中へ降りていくと、針でビーズに軽く触れてゆっくりと液体から持ち上げます。時々針から落ちるので、別の針に戻ってください。今、私の左手には45度の角度の鉗子があります。ポイントを下にして、ビードと針を液に触れて使用します。鉗子の先端を使って、そっと押します。だから今、私はタンパク質に5つのビーズを持っています。さて、だから私の右手ではビーズにタングステン針があり、左手では、鉗子を再びポイントを下にして、それらを押し出すのと同じ方法で4つ、ここでもう一度やります。37°Cでインキュベートし、時間は特定のアッセイによって異なります。

growth-factor-coated-bead-placement-on-dorsal-forebrain-explants

Research

JoVE Journal

Biology

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

University of California, Irvine (UCI).  このビデオでは、大脳皮質の外植片に、成長因子でコーティングされたビーズを、準備して置くための2つの方法を示しています。これらのビーズは、前脳の外植片のような神経組織の開発に空間的に制限された遺伝子の発現を誘導するために使用することができます。メソッドは、アッフィ - ゲルビーズやヘパリンacryllicビーズの両方を使用するために?...

背側前脳の外植片上に成長因子-コーティングビーズの配置

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