飲料水で投与デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）は、急性大腸炎の確立されたマウス炎症性損傷モデルです。このプロトコルは、DSSの治療や組織の準備のための方法を概説します。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
この記事について
サマリー
要約
- クローン病大腸炎特に潰瘍性大腸炎およびクローン病の大腸亜種、大腸炎は、ウイルスや細菌感染症、虚血性傷害、または自己免疫疾患から発生する可能性があります。急性大腸炎は、腹痛や膨満、吸収不良、下痢、血便、便中の粘液を呈することがある。我々は環境、遺伝学、および大腸の炎症性腸疾患と動物モデルにおける上皮のバリア機能不全この疾患の我々の理解を進める上で不可欠であったとの間の複雑な相互作用を理解し始めている。一つの人気モデルは数日間続く上皮損傷と大腸で堅牢な炎症反応の結果、低分子量デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）でマウスの飲料水を補完する関係
プロトコル
パート1：傷害 - 修復大腸炎モデル
- ベースラインの重量は、DSSの治療を開始する前に、各マウスのために取得する必要があります。
- 3％（w / v）のデキストラン硫酸ナトリウム塩の水溶液と0.45μmのセルロースアセテートフィルターでフィルターを作成します。
- 四日間のための3％DSS溶液を用いてマウスのケージに飲料水を交換してください。マウスは、水の他のソース（すなわち、排除のヒントは、自動給水システム上に配置）へのアクセスを持つべきではありません。
- 4日目に、いくつかの結腸上皮の回復を可能に、さらに3日間、水とDSSソリューションを交換してください。マウスは大腸炎の全身的影響を定量化するために4日目に体重を測定する必要があります。体重減少は深刻な損傷と共通です。
- 7日目に、マウスの重量を測定し、生け贄に捧げる。マウスは、イソフルラン、または他の制度の吸入過剰投与により安楽死することができる、IACUCは方法を承認した。
パート2：コロンの剖検と収穫
- 腹部への遮るもののないアクセスを確保するために、マウスで安全な脚の腹側を公開します。 70％エタノールで完全に腹部を濡らす。
- 組織鉗子による腹部の正中線をつかみ、テン肌をこのように上向きに延長する。腹部の内容を公開するため、腹部を切開するために先の細いはさみを使用してください。正中線でx....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
ディスカッション
このプロトコルは、急性損傷、傷害、修復、または慢性の結腸傷害のプロセスをモデル化するように変更することができます。
急性傷害の変更：
即時の犠牲に続いて4-6日のためのDSSの治療のアドリブ
傷害修復の変更：
3-4日と犠牲の回復期間（上記のプロトコルで説明されている）に続いてDSS治療の4-6日で負傷。
慢性大腸炎の変更：
マウスは、各サイクルの間に回復十六日に3％DSSの三五日間のサイクルで配置されます。マウスは、最後の16日間の休止期間後に屠殺されています。
研究者はこのモデルでの注意が必要ないくつかの問題があります。
- 損傷部位のばらつきは：私たちの手で、我々は、近位結腸と盲腸の相対的な温存で、主に遠位傷害のパターンを参照してください。その他には.......
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
開示事項
動物実験は、ヴァンダービルトIACUCによって定められたガイドラインおよび規制に準拠して行った。
謝辞
NIH（1 K08 DK080221 - 01）とヴァンダービルト制度開発基金から提供された資金。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| デキストラン硫酸ナトリウム塩 | USB Corp., Affymetrix | 9011-18-1 | 分子量 40,000-50,000 |
| 10% 緩衝リン酸ホルマリン | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| イソフルラン, USP | Phoenix Pharmaceuticals, Inc. | NDC 57319-474-06 | |
| TISSUE PATH Macrosette カセット | Fisher Scientific | 15182706 | |
| BD 10 ml シリンジ | BD Biosciences | 309604 | |
| エチルアルコール | Pharmco-AAPER | E190 | 蒸留水で70%に希釈 |
| 20G ストレートフィーディングニードル | VWR international | 20068-612 | |
| 27G1/2 PrecisionGlide ニードル | BD Biosciences | 305109 | |
| 解剖用鋏（鋭尖・鈍尖） | VWR international | 82027-588 | |
| Waughピンセット | VWR international | 82027-428 | |
| 非吸収性縫合糸 | LOOK Surgical | SP116 | |
| Whatman ブロッティングペーパー | VWR international | 28298-020 | 必要に応じて切断 |
| Nalgene 低表面活性剤セルロースアセテート (SFCA) フィルター | Cole-Parmer | EW-06731-2 | |
| カーボンファイバー複合材デジタルノギス | Fisher Scientific | 15-007-958 |
参考文献
- Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).
- Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic e....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
再版と許可
タグ
