活用チック神経管の神経細胞の遺伝的に定義されたグループの軸索経路の解読卵のエレクトロポレーション

Summary

このビデオは利用してニワトリ胚脊髄の神経細胞の遺伝的に定義されたグループの軸索経路を可視化する方法を示しています卵のエレクトロポレーション。

Abstract

神経細胞におけるレポーター遺伝子の発現を駆動するエンハンサーエレメントの雇用は、軸索投射を追跡するために広く使用されているパラダイムである。脊椎動物における脊髄介在ニューロンの軸索投射を追跡するために、生殖細胞ラインをターゲットとしたレポーター遺伝子としては、左右対称ラベルをもたらす。したがって、それは、IPSI -＆コントラ横方向に突出する軸索を区別するのは困難です。ひよこ神経管への一方的なエレクトロポレーションは、中枢神経系の一方の側にレポーター遺伝子の発現を制限するために、そして両側に軸索投射に従うことが有用な手段を提供します。

Protocol

I.エレクトロ

卵の取り扱い

1. ロッキングトレイ付きインキュベーター° C、好ましくは37から38への加湿インキュベーターセットに卵を置きます。
2. 胚は、彼らはハンバーガー＆ハミルトン（HH）ステージ18から20に到達したときに、インキュベーションの約66時間後に電気穿孔されています。この段階で頭がトランク（頸屈と呼ばれる状態）に直角に位置し、そのような、前方後方、左右の卵黄静脈のような余分な胚の血管の広大なセットを見られるべきである。これは、エンハンサー依存性の特異的発現を^1,3,4に最適なステージです。それは生存可能と同期胚を得るために、インキュベーターの温度と湿度を監視することが重要です。
3. インキュベーションの66時間後、インキュベーターから卵を取り除く。水平に卵を置きます。 5〜10分待ちます。胚は、現在卵の上極に位置しています。

準備

1. ペニシリン/ストレプトマイシン（P / S）（1:100希釈）とのハンクス溶液を準備します。
2. マイクロキャピラリーにガラスキャピラリーを（直径0.5mm）を引き出します。
3. マイクロマニピュレータに電極（タングステン）を配置し、パルス発生器（ECM 830）に電極を接続する。
4. - 3、パルス50msの長さは電圧30V、パルスの数：次の....

Discussion

ニワトリ胚へのプラスミドDNAのエレクトロポレーションは、生体内異所性発現のための強力な技術として進化しています。特定のエンハンサー、およびニワトリのエレクトロポレーションの組み合わせは、神経細胞^1,3,5の遺伝学的に定義されたグループの軸索経路を解読するための迅速かつ効率的なツールを提供しています。のCre / loxP部位とGal4/UAS増幅システムを活用すれば、表現のレベルと持続時間を増やすことができます。新興写真は、その軸索突起の方向によって定義された介在ニューロンの亜集団、から生じる軸索手がかりの複雑な相違である。さらに、2つの神経集団の同時分子との空間制限されたラベルを得ることができる。従って、神経回路³のアーキテクチャに関する情報を提供する。

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