微生物微小液滴培養システムを用いた細菌の適応進化

要約

出典: Jian、X.、 et al.、微生物微小液滴培養システム(MMC)を使用した自動微生物培養と適応進化。 J. Vis. 経験。 (2022)。

このビデオでは、微生物マイクロドロップレット培養システムを使用して、メタノール耐性に向けた細菌の適応進化を促進する方法を示します。改変された細菌培養物を高メタノールストレス培地と混合し、微小液滴に分割することにより、システムはメタノールストレス下で改善された成長を示す変異体を選択します。反復濃縮サイクルとコロニー単離を通じて、メタノールに適応した細菌株を培養し、さらなる分析または応用を行います。

プロトコル

MMCにおける適応進化

1. 最初の細菌溶液の準備
   1. 関連する標準規制に従って、MeSV2.2用の特殊な液体媒体および固体プレートを調製し、121°Cで15分間オートクレーブします。
   2. 固体プレート(直径= 90 mm)を使用して、37°Cの恒温インキュベーターで72時間培養します。次に、独立したコロニーをピックアップし、10 mLの特殊な液体培地を含む50 mLのシェイクフラスコで、37°Cの振とうインキュベーター(200 rpm)で72時間培養します。
   3. 培養したMeSV2.2溶液を培地でOD₆₀₀ 0.1〜0.2に希釈し(総量が10 mL以上であることを確認します)、シェイクフラスコで5時間培養を続けて、最初の細菌溶液を取得します。
      手記： MeSV2.2は、メタノール必須大 腸菌 株です。特殊な液体培地には 500 mmol/L のメタノールが含まれており、これは MeSV2.2 にとって強いストレスであり、その結果、成長が非常に遅くなります。
2. MMC を初期化します。
3. 滅菌された試薬ボトルを 2 つ取り出し、そのうちの 1 つは最初の細菌溶液用で、もう 1 つは新鮮な培地用です。最初の細菌溶液(5 mL)、新鮮な培地(12〜15 mL)、およびMMCオイルを試薬ボトルに注入します。<....

結果

図1: MMCの操作ソフトウェアインターフェース。(A)ソフトウェアのメインインターフェイス。(1)手術室内の温度。(2)液滴認識の光電信号値。液滴が通過すると、信号値は高くなります(>2V)。オイルが通過すると、信号値は低くなります(<1V)。(3)機能の選択。選択できる機能は、成長曲線測定(成長曲線)、適応実験室進化(ALE)、単一因子マルチレベル分析(1因子)、実験ニーズに応じた操作のカスタマイズ(カスタマイズ)の4.......

材料