ショウジョウバエに見られる保存されたインスリンのシグナル伝達経路キイロショウジョウバエこの生物II型糖尿病を含む代謝性疾患をモデル化するための潜在的なツールとなっています。そのためには、効果的に成人ハエの末梢グルコース処理の全身のインスリン作用を測定するための生理学的アッセイを確立することが重要です。
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この記事について
サマリー
要約
保存された栄養感知のメカニズムが発達幼虫期の1,2時の血糖値の恒常性を維持するために、それぞれのペプチドは哺乳類のインスリンとグルカゴンに似た哺乳類やショウジョウバエ、機能間に存在する。主に有糸分裂後の成人のハエの研究は、インスリン様ペプチドの遺伝子除去（ILP）産生細胞（IPC）を3の結果としてグルコースの恒常性の摂動を明らかにした。したがって、成人ミバエは、II型糖尿病を含む代謝性疾患に適した遺伝的モデルシステムとして有望視されて保持する。さらにショウジョウバエのシステムを開発するには、哺乳動物における耐糖能とインスリン感受性を測定するために使用される同等の生理的アッセイを確立する必要があります。この目的のために、我々は最近、成人のハエにおける経口ブドウ糖負荷応答を測定するための新たな手順を記載していると4,5グルコース恒常性を維持するに成人IPCの重要性を示した。ここで、我々は、インスリンの注射6前述の手順を変更し、成体のハエで、末梢インスリン感受性を測定するために新たな血リンパの抽出法とそれを組み合わせている。一意に、我々のプロトコルは、インスリン注射、インスリンシグナル伝達変異体と大人のハエの耐糖能とインスリン感受性に影響を与える潜在的な介入を特徴づけることが可能になる方法論に応じて末梢グルコース負荷を処分する大人ハエの能力の直接的な生理学的な測定が可能です。
プロトコル
1。インスリン溶液の調製
- は0.01 mg / mlの濃度を達成するためにPBSでインスリンを溶解することにより新鮮なウシのインスリン溶液を調製します。インスリン/ PBSおよび制御PBSの両方のソリューションは、注射の手順では氷上で保存する必要があります。これらのソリューションは、0.5％（v / v）のFD＆Cブルーなしで準備する必要があります。 1食品着色料。
2。針の準備とセットアップインジェクション
- マイクロピペットpuller.Theを使用してガラスキャピラリーの針を準備し、以下の引き手の設定は、注射のための十分な品質の針の生成：熱、345、プル、210、速度、100;時間、200（100ミリ秒）。たて針は、キムワイプの組織を通じて、先端を押すことによって平滑化されている必要があります。この鈍化過程では、細長い高抵抗チップを削除し、より大きな細孔径を持つstouterのヒントを生成します。
- 単独でインシュリン/ PBS溶液またはPBSを含むマイクロ遠心チューブにチップアッププレース鈍い針。各針のバック充填でアクションの結果をキャピラリー。ない破片や気泡が先端に表示されていないことを保証するために実体顕微鏡下で針の先端を観察。きれいに記入していない任意の針を捨てる。
- 針の先端が実体顕微鏡を通して見えるようにマイクロマニピュレータを手動マイクロインジェクターのニードルホルダーとの位....
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ディスカッション
このレポートに記載されている方法は、 ショウジョウバエの血リンパの組成の検出可能な変化をもたらす生理学的プロセスを調査するあらゆる研究に有用である可能性がある。この方法で注入し、血リンパのコレクションを組み合わせることで、それは特定の実験的治療または操作の直接の生理学的に関連する影響を把握することが可能です。断頭2を含む以前の技術よりも体液のコレクションでこの"流血"技術の主な利点は、腸contents.Ifケアが時々に現れる可能性のあるpericerebral脂肪体の組織を、収集しないように取られるとこの手法は、体液サンプルの汚染を最小限に抑えることです。血リンパの液滴を滲み、その後のサンプルは、正確に生体内循環液の状態を反映している必要があります。
このスケールで実行されたすべての注入実験に内在する潜在的交絡因子は、注射後の総循環流体の初期希釈です。これは、簡単に年齢をマッチさせたコントロールに実験的なハエやインスリンのPBSの同じ量を注入し、結果を正規化することによって、しかし、し.......
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開示事項
利害の衝突は宣言されません。
謝辞
この作品は、NIAからYW.CF（AG21068、AG31086）への補助金によって支えられている。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 試薬/装置の名前 | 会社 | カタログ番号 | |
| ウシインスリン | シグマ | I5500 | |
| 無限のグルコース試薬 | サーモエレクトロン株式会社 | TR1541 | |
| 手動マイクロインジェクター | サターのインストゥルメント | ||
| P - 87 Flamming /ブラウンマイクロピペットプラー | サターのインストゥルメント | ||
| シングルバレルホウケイ酸ガラスキャピラリー | AMシステム | 626000 | |
| FD＆C青色1号 | マコーミックアンドカンパニー | ||
| 1μlのマイクロキャピラリーチューブ | ドラモンド | ||
| 三軸の手動マイクロマニピュレーターとベース | 世界の精密機器 |
参考文献
- Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes. Science. 296, 1118-1118 (2002).
- Kim, S. K., Rulifson, E. J. Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora c....
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