マウスにおける冠動脈結紮のために修飾されたテクニック

サマリー

マウスにおける実験的心筋梗塞を誘発するために用いる外科手術は、心臓や肺の左前方の表面を可視化するために、3番目と4番目のリブの間に左開胸で始まります。左冠動脈を結紮され、胸が閉じているとマウスが自発的に回復させる。

要約

心筋梗塞（MI）は^、1月3日 、人間の死亡率の最も重要な原因の一つである。心筋梗塞患者において罹患率と死亡率を改善するために我々は、心筋虚血の病態生理についてのよりよい知識を必要としています。この知識は^、4革新的な心血管治療のための新しい治療標的を定義することは貴重であるかもしれません。マウスの実験ミシガンモデルはMIは左冠動脈（LCA）の⁵の永続的または一時的なライゲーションによって誘発された臨床研究でますます人気の小動物モデルである。このビデオでは、マウスで実験的心筋梗塞を誘発する方法をステップバイステップ方法について説明します。

動物は2％イソフルランを持つ最初の麻酔です。無意識のマウスは、その後挿管と人工換気のために人工呼吸器に接続されています。左胸を剃毛され、半ば腋窩線に沿って1.5センチメートル切開を皮膚で作られています。左大胸筋はぶっきらぼうdissocです肋骨が露出するまでiated。筋層はさておき引っ張って瞼リトラクタと固定されています。これらの準備の後、左開胸心臓と左肺の前表面を可視化するために、3番目と4番目のリブの間で行われます。 LCAの動脈の近位のセグメントは、一般的に梗塞サイズ〜左心室の40％を誘発7から0 ethilon縫合糸で結紮する。終了時には、胸が閉じられ、動物（Temgesic、0.3 mg/50ミリリットル、ip）を術後鎮痛法を受けています。動物は自然回復するまで暖かいケージ内に保持されます。

プロトコル

1。プロトコルテキスト

1. 手術に進む前に、6週齢または2から5パーセント、イソフルランの吸入による古けれ雄マウス（C57BL / 6）を麻酔。動物が十分に麻酔であることを確認するためにつま先のピンチを実行します。
2. 無意識のマウスは37℃の一定温度を維持するために暖かいパッドの上に仰向けに置かれ左側胸部胸部を剃毛されています。
3. イソフルラン充填室で挿管デバイスにマウスを固定します。口からマウスの気管内に0.2内径のチューブを挿入し、無菌手術領域（37℃温度調節器によって）挿管にマウスを置いて、人工呼吸器（分あたり120のレートの圧力に気管内チューブを接続4月6日MMH ₂ O）は、ベタジンと75％エタノールで領域を消毒。
4. マウスの目に眼軟膏を適用します。足で標準のECG電極を置き、心電図レコーダーにマウスを接続します。
5. 半ば腋窩線に沿って1.5センチメートル切開を作るために滅菌ハサミを使用します。はさみは、マウスにおける皮下組織への損傷を避けるために、メスではなく、使用されています。その後、胸壁から前胸部の筋肉を切開し、撤回するブラントチップ容器はさみを使用しています。
6. 心臓と左肺の前方表面を可視化するために、第3および第4肋骨の間の左開胸を行います
7. さらに可視化とアクセシビリティを向上させるために、適切なリトラクターを使用して胸壁を撤回。歯鉗子、鈍先端がハサミを使って、心膜を取り除きます。
8. リガチャーと動脈の間に心筋のバンドと一緒に動脈の下に針を（7-0 ethilon縫合糸で添付）を配置することにより、左冠動脈を結紮する。冠状動脈の閉塞に成功し、前方左心室壁のhypokinesis /無動でと心電図記録（ 例えば、ST上昇、QRS broadeniの変化によって確認されNG）
9. 3番目と4番目のリブ上に2つのステッチを（6-0 ethilon縫合）を配置することにより、胸を閉じます。
10. 皮膚を閉じるために5から0 ethilon縫合糸を使用しています。
11. 術後鎮痛のために、ブプレノルフィン（0.05 mg / kg）の単回腹腔内注射を投与。動物が自発的にイソフルラン麻酔を停止した後に2から5分以内に回復します。最後に、暖かいケージにマウスを置き、飲料水（テキストオーバーレイ：飲料水に0.6 mg / ml）の中のブプレノルフィン0.6 mg / mlのを提供し、術後の苦痛を防止する。密接に手術後の最初の24時間のためにマウスを監視します。
12. 心エコー検査は、3日心筋梗塞後の心機能を評価するために実施されています。成功した手順は、前方左心室壁における無動（結果で囲んでビデオを参照）によって検証されます。実験終了時に、心がさらなる調査のために、80℃に収 ​​集され保存されます。 すなわち遺伝子発現が。

結果

楽器	関数の説明
ブラントチップはさみ	皮膚、肋間胸筋、および縫合糸を切断するために使用
アイ·リトラクター	外科ビューを公開するために使用
ブラントチップ鉗子	皮膚や筋肉を把握するために使用
ニードルホルダー	針を保持するには
5から0縫合	皮膚を縫合するために使用
6から0縫合	胸の筋肉を縫合するために使用
7から0縫合	冠動脈を結紮するために使用

心筋梗塞の手順で使用される表1。楽器。

ディスカッション

本報告書で示したように、LCA結紮のため外科的処置は、マウス^3,6の実験的心筋梗塞の誘導のための信頼性と再現性の高い方法です。このプロトコルに従ってLCAのライゲーションは、典型的には魅力的心筋虚血を誘発〜左心室³の40％。これは、心臓の前面にST部分⁷と可視蒼白の大幅な心電図変化を誘導する。大心筋梗塞が原因で、死亡率は30％まで^8,9にすることができます。ノートは梗塞心筋領域とMI後死亡率は様々な動物の系統間で異なるかもしれないことになされるべきである。方法はいくつかの利点を有する。半ば腋窩線に沿ってではなく、前胸壁の皮膚切開の配置は、心エコー検査と後の調査が容易になります。手術創におけるstichesは、心臓の前方セグメントの超音波画像診断の妨げにはなりません。また、マウスの挿管は、オペレータが可能になります手術を行うための十分な時間を持っています。これは重度の徐脈や低酸素グローバル^10を誘導するように胸の中に" その場で " LCAのライゲーションは、外部化の後に、LCAのライゲーショ...