マウス脳の両半球からの局所電界電位の記録

要約

出典:Chen, Y., et al. Evaluation of Hemisphere Lateralization with Bilateral Field Potential Recording in Secondary Motor Cortex of Mice. J. Vis. Exp. (2019).

このビデオは、マウス脳の両側M2領域からの局所電界電位(LFP)のin vivo記録を示しています。麻酔をかけたマウスを固定し、処置の準備をします。LFPを記録するには、複雑な運動運動に関与する両側のM2領域のターゲット座標に微小電極を挿入します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 動物の麻酔と手術

1. マウスの体重を量り、地元の動物管理委員会から承認された麻酔法で麻酔をかけます。
2. 手術前に鉗子で尻尾やつま先をつまむことで、深い麻酔を確認します。
3. マウスを定位固定装置に配置し、頭を固定します。
4. 両目に軟膏を塗って、両目をしっとりと保ちます。術前および術後の鎮痛に関する地域の動物飼育ガイドラインに従ってください。
5. 外科用バリカンを使用して髪を剃ります。露出した手術領域の中央にハサミで小さな切開(12-15mm)をします。鉗子を使用して、頭皮を正中線からそっと引き離します。
6. 皮膚をやさしく分離し、残留組織を取り除きます。過酸化水素でコーティングされた綿棒を使用して頭蓋骨を清掃します。
7. 頭蓋骨の左側と右側の両方に半径1.0〜1.5 mmの小さな穴を2つ開けて、実体顕微鏡で記録微小電極をM2領域に挿入できるようにします(図1A)
   手記：両側性M2の脳定位固定装置の位置:ブレグマの前方1.94 mm、正中線の外側1.0 mm、硬膜の腹側0.8〜1.1 mm。
8. タングステン針で硬膜を慎重に取り外します。
9. ホルガラス製ホウケイ酸マイクロピペット(外径1.0mm)を記録用微小電極として1-2MΩの抵抗でプルします。
10. 機械式マイクロマニピュレーターを使用して、0.5 M NaClを充填した2つの別々の記録微小電極を穴に挿入します(60°、図1B)。

>2. マウスの両側M2におけるLFP記録

1. 左右のガラス電極を両側のM2の適切な座標にゆっくりと下げます(図1C)。
2. 品質管理のために、LFPをキャプチャする前に、差動増幅器を使用して各電極の抵抗をテストします。
3. 録音処理を0.1Hzのハイパスと1,000Hzのローパスに設定し、1,000倍に増幅します。
4. マウスが麻酔下で毎秒2回の呼吸数で均一に呼吸している状態で、安定した状態で少なくとも60秒の自発的活動のデジタル化された生のLFPデータを収集します。
5. 記録後、電極を脳からゆっくりと持ち上げ、高速頸部脱臼によってマウスを安楽死させます。
6. データを保存し、オフラインで分析します。

結果

図 1:同時 LFP 録音手順の図。(A)頭蓋骨を露出させ、硬膜を切除した定位固定マウスで、左右のM2におけるLFPのin vivo両側記録。(B)同時に穿孔された穴の皮質表面に接触する2つのガラス微小電極。(C)微小電極とAg/AgCl線を基準電極として適所に配置して記録する。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
AC/DC差動アンプ	A-Mシステムズ	モデル3000
アナログデジタルコンバータ	ケンブリッジ・エレクトロニック・デザイン・リミテッド	マイクロ1401
ガラスホウケイ酸マイクロピペット	南京春教育実験装置会社	161230	外径:1.0mm
微小電極プーラー	成茂	PC-10
NaCl	広州化学試薬工場	〒7647*14-5
ピン微小電極ホルダー	ワールド・プレシジョン・インスツルメンツ(株)	MEH3SW10
スパイク2	ケンブリッジ・エレクトロニック・デザイン・リミテッド
実体顕微鏡	ツァイス	435064-9020-000
脳定位固定装置	RWDライフサイエンス	68045
ウレタン	シグマ・アルドリッチ	94300