膠芽腫ラットモデルの生成

要約

出典:Bolcaen, J., et.al.、マイクロ照射器を使用した神経膠芽腫ラットモデルのPETおよびMRIガイド照射。 J. Vis. Exp. (2017)

このビデオでは、脳腫瘍の原因となる神経膠芽腫細胞を前頭前皮質に定位的に注入することにより、膠芽腫ラットモデルを確立する手順を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設の動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1.F98 GBラット細胞 Model

1. ATCCから得られたF98 GB細胞を、ダルベッコの改変イーグル培地、10%ウシ血清、1%ペニシリン、1%ストレプトマイシン、1%L-グルタミン、0.1%アムホテリシンbを使用して単層で培養し、_CO2インキュベーター(5%_CO2および37°C)に入れます。
2. 雌のFischer F344ラット(体重170g)の脳内の神経膠腫細胞を接種します。
   1. span style='background-color:transparent;color:#1a202c;'>滅菌器具を使用し、常に滅菌手袋を着用してください。
   2. 74 mg/kg ケタミンと 11 mg/kg キシラジンの混合物を腹腔内注射 (IP) し、インスリン注射器 (1 mL, 29 G) でラットに麻酔をかけます。手足の離脱反射に対する反応がないことにより、麻酔を確認します。鼻と耳の固定点を使用して、ラットを定位装置に固定します。麻酔下での目の乾燥を防ぐために、カルボマーアイジェルを置きます。
   3. ラットの目の高さから頭蓋骨の後ろまで剃り、ポビドンヨードで皮膚を消毒します。
   4. 頭蓋骨を2cmの正中線切開から露出させ、右前頭半球のブレグマに対して後方2mm、外側2.5mmに1mmの穴(ダイヤモンドドリル)を開けます。
   5. 定位誘導インスリン針(29 G)を挿入し、マイクロシリンジポンプコントローラーを使用して深さ3 mmの5 μL細胞懸濁液(20,000 F98 GB細胞)を注入します(設定（注入）I50、レート1 nL/s （001 SDN)）)。
   6. シリンジをゆっくりと引き抜き、骨のワックスで切開部を閉じます。皮膚を縫合し、ポビドンヨードで消毒します。
   7. 赤いランプを使用して手術後の動物の体温を安定させます。ラットが胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、ラットの覚醒を監視します。.完全に回復するまで、動物を他の動物と一緒に戻さないでください。すべての動物を環境制御された条件(通常の明暗サイクル12時間、20〜24°C、相対湿度40〜70%)に置き、餌と水を自由に使用してください。動物の体重、食物、水分摂取量、活動と正常な行動を監視して、動物を注意深く追跡してください。体重が20%減少した場合、または正常な行動が著しく悪化した場合(例:.、グルーミングの欠如)に、動物を安楽死させるために致死量のペントバルビタールナトリウム(160 mg / kg)を使用してください。.

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
GB RATモデル			<
ATCC	CRL-2397
Fischer F344/Ico crl Rats	Charles River	N/A	http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat
マイクロポンプシステム	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
定位フレーム	Kopf	902	モデル902デュアル小動物定位固定装置<
Velleman	VTHD02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
骨ワックス	Aesculap	1029754	https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
インスリン注射器 Microfine	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
InfraPhil IR lamp	Philips	HP3616/01	<
Ethicon	662G/662H	FS-2, 4-0, 3/8, 19 mm

td style='height:14.5pt;width:122pt;'>F98 膠芽腫細胞株td style='height:43.5pt;width:122pt;'>ダイヤモンドドリルtd style='height:14.5pt;width:122pt;'>エチロン