外傷性脳損傷のマウスモデルにおける鼻腔内間葉系幹細胞送達

Abstract

出典: Shahror, RA et al., 外傷性脳損傷マウスモデルにおける鼻腔内送達後の MRI を使用した超常磁性酸化鉄標識間葉系幹細胞の追跡。J. Vis. 経験。(2019年)

このビデオは、マウスモデルにおける鼻腔内間葉系幹細胞(MSC)の送達を示しています。MSC は鼻組織に吸収され、サイトカインシグナルを介して脳に移動し、損傷部位で神経栄養因子を分泌し、神経修復のための神経治療の可能性を提供します。

Protocol

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 超常磁性酸化鉄(SPIO)ナノ粒子による間葉系幹細胞(MSC)の標識

1. MSCをSPIOで標識するには、6 mLの標識培地(ウシ胎児血清(FBS)を含まないダルベッコの修飾イーグル培地(DMEM)中の25 μg/mLのSPIO)をMSCを含むT75フラスコ(80%コンフルエンシー)に加えます。
細胞
2. をCO₂インキュベーター(37°C、5%CO₂)で標識培地とともに振とうことなくインキュベートします。24時間後、真空に取り付けられたプラスチックチップを備えた滅菌パスツールピペットを使用して、ラベリングメディアをそっと取り除きます。細胞を6 mLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で単層2回洗浄し、微量の未内在化SPIOを除去します。
   1. 細胞が正常に標識されたかどうかを判断するには、SPIOが蛍光色素でタグ付けされているかどうかを蛍光顕微鏡または共焦点顕微鏡で標識された細胞をチェックします(つまり、ここで使用されているもののように;図1B、C)。
3. 3 mLのトリプシンで処理して接着細胞を回収し、37°Cでインキュベートします。5分間のインキュベーション後、10%FBS(v / v)を含む7 mLの予....

Results

図1:MSCによるSPIO取り込みのプロトコルとin vitro確認の概略的なフローチャート。(A)MSCを標識のためにSPIOと24時間インキュベートしました。次に、標識されたMSCを鼻腔内(IN)経路を介してTBIマウスモデルに送達しました。標識されたMSCを追跡するために、異なる時点でMRIを実施しました。SPIOナノ粒子はFITCでタグ付けされていたため、SPIOによるMSCの十分な標識の確認は、FITCチャネルを使用した(B)蛍光顕微鏡および(C)共焦点顕微鏡によって達成されました。(D)標識さ.......

Materials