ラットモデルにおける組換えアデノ随伴ウイルスベクターの静脈内投与

要約

出典: Grames, MS, et al.ラットへのアデノ随伴ウイルスの静脈内投与の方法とヒントと中枢神経系形質導入の評価J. Vis. 経験。(2017年)

このビデオは、ラットにおける組換えアデノ随伴ウイルス(AAV)の尾静脈注射を示しています。外側尾静脈に注射された後、ウイルスは血流に入り、心臓を循環して脳に到達し、そこでニューロンに入り、神経治療用途のための標的タンパク質の生成を促進します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. rat

1. 酸素を1 L /分に上げ、イソフルラン麻酔を5%に設定します。すべての接続ホースと活栓の向きをチェックして、ガス麻酔が誘導チャンバーに流れていることを確認します。
2. ラットが反応しなくなるまで、ラットをガス麻酔導入チャンバーに約3分間置きます。
3. つま先をつまんで適切な麻酔深度を確保します。つま先をつまんだ後、足や脚に動きがあってはなりません。
4. イソフルラン麻酔を2%に減らして維持し、麻酔が麻酔マスクに流れるように活栓を調整します。
5. ラットの鼻を麻酔マスクに入れ、ラットが横向きになるように調整します。
6. 外側の尾静脈を特定します。
   注:外側の尾静脈は約10時と2時の位置にあり、尾の背側上部は12時の位置にあります。ラットを横向きにして、外側の尾静脈を上に向ける必要があります。
7. アルコール調製パッドで注射部位を拭きます。注射部位は尾の長さの3分の2下にあります。

2. vector

外
1. 側尾静脈の真上で1本の指で、注入領域の少し上の尾部をしっかりと保持します。これにより、静脈が拡張します。
2. ベベルを上に向けて、針を目に見える尾静脈と同じ方向に合わせます。
3. もう一方の手が尾を握って尾静脈を押さないように細心の注意を払いながら、尾静脈の上の皮膚を突き刺します。
4. 尾静脈からの圧力を解放して、正常な血流を可能にします。
5. 針を静脈に動かします。針が尾静脈に穴を開けていることを確認するには、プランジャーを少し引き戻します。針が静脈にある場合、血液は針に流れ込みます。
   1. 必要に応じて針の位置を変更します。次に、針を安定させるために、注射部位の上の手を注射部位の下に動かし、注射器の端を尾に当てます。
6. ベクターを尾部にゆっくりと注入します(約20 μL / s)。
   注:ベクターが静脈を流れると、静脈は色を失う可能性があります。溶液が静脈の外に注射された兆候には、ベクターを注入するときの水疱、皮膚の白化、または抵抗が含まれます。練習することで、血管外への曝露を最小限に抑えることができます。
7. ベクターが投与された後、ラットから針を抜き、ガーゼパッドを注射部位に押し付けて、30〜60秒間出血を止めます。

3. クリーンアップ

1. : イソフルラン麻酔と酸素をオフにします。意識を取り戻すまでネズミを監視し、ケージに戻します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
1mLシリンジ		309626	25gの針が付属しています。注射用針27-30gに交換
BD 30g 針	305106
イソフルラン	ピラマル ヘルスケア	66794-013-25	イソフルラン USP 250 mL
麻酔マスク	Kopf Instruments	906
ガーゼ	Henry Schein	100-2524	2" x 2" (5 cm x 5 cm)
ガス麻酔気化器	SurgiVet	4214322	クラシックT3
ガス麻酔スカベンジャー	SurgiVet	32373B10	Enviro-PURE
加熱パッド	Sears	17280
70% エタノール	Decon Laboratories, Inc.	2401	140プルーフ
70%イソプロパノール	VWR	89108-160

BD