キイロショウジョウバエでは、世紀の1以上にわたり、多くの重要な生物学的過程の分子および細胞基盤を理解するために使用されている遺伝的に行動的に扱いやすいモデル系である。 ショウジョウバエがよく飛ぶ行動の遺伝的洞察を得るために利用されてきた。
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この記事について
サマリー
要約
キイロショウジョウバエ 、ショウジョウバエは、例えば癌、心血管疾患や様々な神経疾患1などのヒト疾患の広い範囲の分子機構を研究するために使用されています。私たちは、幼虫の移動、大人のクライミング能力（リングアッセイ）、 ショウジョウバエの求愛行動を決定するためのシンプルかつ堅牢な行動アッセイを最適化した。これらの行動のアッセイは、ハエの行動に関する遺伝的要因と環境要因の役割を研究するために広く適用されます。幼虫のクロール能力は確実にショウジョウバエの幼虫のクロール能力の早期の変化を決定するため、また、それらの運動に薬やヒト疾患遺伝子の効果を（トランスジェニックハエの）を調べるために使用することができます。彼らがそうでなければ評価することができたところこれらのハエが大人に生きていけないように遺伝子の発現または廃止は、蛹の大人の段階で致死性が発生した場合に幼虫のクロールアッセイは、より適切になります。この基本的なssayは、 ショウジョウバエの幼虫で追加行動反応を調べるために、明るい光やストレスと組み合わせて使用することもできます。求愛行動は広く性的行動の遺伝的基礎を調査するために使用されており、また同様に学習や記憶など、活動との調整を調べるために使用することができます。 ショウジョウバエの求愛行動は、視覚、聴覚、および嗅覚信号を含む様々な感覚刺激の交換を伴う成功した交尾で絶頂に達する十分に特徴付けられ、モータの動作の複雑な一連につながる男女の間に。伝統的な成人登山のアッセイは、（負の走地性）は、異なる試験2月4日の間には有意な変化で、退屈な、労働集約的で、時間がかかります。急速（RING）負の走地性を反復アッセイ図5に示すように 、再現性に敏感な、高スループットのアプローチ大人の運動を定量化すると負の走地性bを提供し、より広く用いられてプロトコルを介して多くの利点がありますehaviors。リングアッセイでは、いくつかの遺伝子または薬物治療は、ハイスループットスクリーニングのアプローチは、実験のほうが従順することで、同時に動物の多数を使用してテストすることができます。
プロトコル
A.幼虫クロールアッセイ
1。幼虫コレクション
- ハエの8オンスボトル（10-15男性+女性10月15日）を設定します。
- ハエの明確な瓶その後、ハエは24時間の卵を産むしましょう。 （新しいボトルに大人を転送し、必要に応じて繰り返します）。
- 3-4日のためにボトルをインキュベートし、または3齢幼虫になるまで表示されます。
- 幼虫のボトルに20％ショ糖の100 mlを、20分間放置 - 50を追加します。幼虫は上にフロートします。
- チップと25ミリリットル血清ピペットを用いて収集した幼虫は、カットオフ、およびメッシュバスケットに場所。
- 2倍の脱イオンH 2 Oでメッシュバスケットに幼虫を洗う幼虫は現在の実験の準備が整いました。
2。薬で幼虫を治療する
- 溶液5％スクロース+薬剤を含む5 mlのビーカーに幼虫の希望数を輸送するためにブラシを使用しています。
- 少なくとも15分間幼虫してみましょう。
- メッシュバスケットに薬剤処理した幼虫を入れ、すすいでください。彼らは今、使用する準備が整いました。
3。運動アッセイ（測定総走行距離や体壁の収縮）
- に個々....
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ディスカッション
ショウジョウバエの行動は密接に遺伝的要因と環境要因によって調節される。我々は、他のものは、以前の行動やショウジョウバエ 5-19にモデル化する人間の神経変性疾患への飛行に関連する遺伝子を調べるためにデータを収集するためにここで説明するアッセイを使用しています。クロールアッセイのために、第3齢幼虫の慎重な選択が重要なステップです。薬で治療する場合、それは良好な溶解性を持っている場合、最大の効果を得るために（またはそれ以上の薬物の種類や性質に応じて）10〜15分かかります。したがって、我々は定期的に餌を15分間薬剤を飛ぶし、テストする前に、さらに15分待ちます。それは、溶液中の薬物濃度を維持するために、しかし、重要であり、治療群間の露光時間、正確な比較のために同じです。 CNS活性薬剤は、通常、持続的な最大の効果〜45分を持ちます。幼虫はフライ食品を除去するために選択（または授乳を掘った）の後によく洗浄しなければならないと許可され、クロールアッセイを開始する前に1分間馴化。低い温度は幼虫のクロール能力に影響を与えることができるように寒天プレートは、1時間室温（.......
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開示事項
我々は、開示することは何もありません。
謝辞
私たちは、幼虫のクロールデータを生成するためAstha Maltareに感謝します。私たちは、原稿上の彼のコメントを与えるために博士はニコラス·ランソン·ジュニアに感謝します。この作品は、ジョンズホプキンス大学でALSのためにロバートパッカードセンター（UBP）および筋萎縮性側索硬化症協会（UBP）がサポートされていました。と国立精神衛生研究所（CDN）からR01MH083689。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 試薬の名前 | 会社 | カタログ番号 | |
| スクロース | フィッシャー·サイエンティフィック | S5-500 | |
| アガロース | インビトロジェン | 16500-500 | |
| 6オンスショウジョウバエのボトル | ジェネシー科学 | 32から130 | |
| ペイントブラシ（＃1） | テッド·ペラ社 | 11859 | |
| 食品成分を飛ぶ | |||
| コーンミール | フィッシャー·サイエンティフィック | NC9109741 | |
| 寒天 | ジェネシー科学 | 66から104 | |
| 糖蜜 | フィッシャー·サイエンティフィック | NC9349176 | |
| プロピオン酸 | アクロス | 14930-0010 | |
| Tegosept | 頂点 | 20から258 | |
| エタノール | フィッシャー科学的な | BP2818-4 | |
| 酵母 | ジェネシー科学 | 62から107 |
参考文献
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).
- Feany, M. B., Bender, W. W. A Drosophila model of Parkinson's disease. Nature Mar.
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再版と許可
