同所性膀胱腫瘍モデルと膀胱内Sarnaの治療の評価

サマリー

超音波検査および生物発光イメージングによる膀胱内に配達Sarnaのとモニタリング腫瘍成長の抗腫瘍効果を評価するために同所性膀胱腫瘍モデルを確立します。

要約

私たちは、同所移植マウス膀胱腫瘍モデルでは膀胱内に配達小さな活性化RNA（Sarnaの）と膀胱癌を治療するための新たな手法を提案する。マウスモデルは、吸入全身麻酔下に尿道カテーテル法によって確立されます。化学熱傷は、その後膀胱グリコサミノグリカン層を破壊するために膀胱内の硝酸銀溶液を用いた膀胱粘膜に導入され、細胞が付着することを可能にします。滅菌水で数回洗浄後、ヒト膀胱癌KU-7-luc2-GFP細胞は2時間に住むために膀胱にカテーテルを通して注入されています。膀胱腫瘍のその後の成長は 、in vivo膀胱超音波および生物発光イメージングによって確認され、監視されています。腫瘍はその後脂質ナノ粒子（LNPs）に策定Sarnaので膀胱内に処理されます。腫瘍の成長は、超音波検査および生物発光で監視されています。この手順のすべてのステップは、添付のビデオで実証されています。

プロトコル

動物を対象とする手順は、カリフォルニア大学サンフランシスコ校の動物実験及び利用委員会（IACUC）によって承認されています。

1。細胞調製

1. ヒト膀胱癌細胞株KU-7-luc2-GFP（キャリパーライフサイエンス、ホプキントン、MA）は、10％ウシ胎児血清、50μg/ mlのゲンタマイシンを含むRPMI-1640培地で栽培されています。
2. 培養は37℃で維持され、メディアと5％CO _2は、2〜3日ごとに変わります。
3. 細胞は、トリプシン消化により回収し、血球計算板を用いてカウントした。 50μlの2×10 ⁶細胞の単一細胞懸濁液は、リン酸塩で調製した緩衝生理食塩水と氷上で保存する。

2。同所性膀胱腫瘍モデル

1. 8月10日週齢雌ヌード（NU / NU）マウス（シモンセン研究所Gilory、CA）を使用した。
2. 提供するために加温パッド上に滅菌ドレープを配置SA外科的プラットフォームを提供します。無菌の潤滑ゼリー、スタイレット針、硝酸銀溶液、および滅菌水で24-guageカテーテルが用意されています。
3. 一般的な麻酔薬は、吸入イソフルラン（誘導のために3％、メンテナンスのために1-2％）とノーズコーンを介して維持したままマウスで誘導される。無菌眼軟膏は、動物の目に適用さ....

ディスカッション

我々は、転写活性化にp21の^{CIP1/WAF1（P21）}のプロモーターを標的とLNP策定Sarnaの腫瘍の膀胱内治療に続いてマウス同所性異種移植膀胱腫瘍モデルの確立のためのプロトコルを提示します^。2、3の結果、腫瘍ができる生物発光イメージングと膀胱の超音波で確認し、監視されます。同所性モデルは、より密接に内因性の膀胱癌を近似している尿や尿路上皮の環境を提供することにより、腹腔内、皮下、または静脈内モデルよりも優れている可能性があります。同所性マウス膀胱腫瘍の様々な両方の直接膀胱壁の注入だけでなく、膀胱内注入を使用して確立されています。腫瘍の^4月8日膀胱内注入が、ここで示したように、より密接に粘膜上皮に表面的に開始し、より深く成長するヒト膀胱腫瘍を模倣し彼らは進歩として。 BLADに対応するために、硝酸銀を用いた我々の方法腫瘍取り込みのためのDERを、安価で技術的に簡単です。

Hadaschik ら 、マウスで膀胱腫瘍の膀胱内注入を説明し、信頼性の高い発光腫瘍の評価が報告されました^。5

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
試薬の名前	会社	カタログ番号	コメント（オプション）
KU-7-lucを-GFP細胞	キャリパー	128091
胸腺ヌードマウス（NU / NU）	シモンセン研究所	6から7週齢	SIM：（NCR）NU / NU fisol
超音波装置	Visualsonics	VEVO 770	RMV-704プローブ
生物発光ユニット	キャリパー	IVISスペクトラム
エクセルsafeletカテーテル	フィッシャー	14-841-21	24G X¾ "
硝酸銀	シグマ	S8157
ハミルトンシリンジ	ハミルトンの共同mpany	80301
LNP-Sarnaの	アルナイラム医薬品

表1特異的試薬および装置。