間葉系幹細胞 (MSC) の小さい割合 (1-5%) が静脈注射または腹腔内炎症コロン1,2ホーム大腸炎症モデルにおけるマウスの調査は示した。本研究は、MSCs の超音波ガイド下心臓内注射が腸への増加のローカリゼーションの結果することを示しています。
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この記事について
サマリー
要約
クローン病 (CD) は、中小企業の一般的な慢性炎症性疾患と大腸です。マウスとヒト間葉系幹細胞 (MSCs) 免疫抑制の可能性があるし、腸管炎症のマウス ・ モデルにおける炎症を抑制する示されているにもかかわらず、彼らのホーミングと有効性1投与経路を制限できます。,3,4,5. 大腸損傷モデルに MSCs のローカル アプリケーションは、大腸の炎症の改善に大きな効果を示しています。しかし、小腸、実験 Crohn 病のひき割りトウモロコシ-1/YitFc (SAMP) モデルにおける炎症のサイトにひと骨髄由来 Msc (hMSCs) のローカリゼーション技術に関するデータの不足があります。この作品では、サンプ マウスで hMSCs 慢性炎症性腸のよ特徴付けられた自発的なモデルの超音波ガイド下心臓内注射用手法について説明します。セックスと年齢-一致炎症無料 AKR/J (AKR) マウスは、コントロールとして使用されました。生体内分布と局在を解析するには、hMSCs いたトリプル レポーターを含むレンチ ウイルスで導入しました。生物発光イメージング; ホタルのルシフェラーゼ (フロリダ州)、成っていたトリプル記者セルの並べ替え; 単量体赤い蛍光蛋白質 (mrfp)切り捨てられた単純ヘルペス ウイルス チミジンのキナーゼ (ttk)、陽電子放出断層撮影 (PET) 画像。本研究の結果は、炎症無料 AKR マウスではなくサンプ マウスの小腸で hMSCs をローカライズする心腔内投与後 24 h を表示します。この小説は、ひき割りトウモロコシ マウスの左心室の hMSCs 超音波ガイド下注入マウスの急速な回復のため最小限の罹患率と死亡率を可能にする携帯配信の高い成功率を保証します。この手法は、小腸の炎症、TNFΔRE6などの他のモデルの MSCs の強化されたローカリゼーションの有用な方法で可能性があります。将来の研究は、動脈内配信で hMSCs の増加のローカリゼーション治療効果の増加する可能性が決定されます。
概要
クローン病 (CD) は小型の一般的な慢性炎症性疾患と大腸と腸内細菌7、8にホストの免疫システムの不適切な応答に起因すると考えられます。最近の研究では、マウスとヒト間葉系幹細胞 (MSCs) することができます腸炎症1,3,4、5のマウス ・ モデルにおける炎症を抑制することを示しています。CD9を含む炎症性腸疾患 (IBD) の患者を治療する骨髄や脂肪組織由来ヒト MSCs を使用して複数の進行中の臨床試験があります。MSC 療法の 2 つのルートは、これらの臨床試験に使用されている: 1 つは全身投与を含む (すなわち、静脈内) 内腔 IBD (CD を含む)、および、その他の MSCs の瘻孔の幹細胞のローカライズされたアプリケーション/注入が含まれます肛門周囲 CD 患者の管。最近メタ分析 MSC IBD、全身療法の (すなわち、静脈内投与) で (CD 含む) 内腔の IBD のための MSC 治療を 40% に有用であった (95 %ci: 7 79%)、患者の有効性....
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プロトコル
すべてのマウスの実験と研究の手順は、ケース ウエスタン リザーブ大学によって承認された ' s 機関動物ケアおよび使用委員会。評価の協会で手続きを行った、実験動物管理 (AAALAC) 認定認定施設。BM はインフォームド コンセント後ケース ウエスタン リザーブ大学で幹細胞の中核施設が大学病院治験審査委員会承認の議定書の下で吸気だった
。1 文化伝達ひと骨髄由来間葉系幹細胞 (hMSCs)
注: hMSCs の分離以前の出版物 15 の詳細については 、。 20
。- 文化分離ダルベッコの hMSCs ' 10% 牛胎児血清 (FBS) s ワシの変更中-低血糖 (DMEM LG) 培。37 ° C、湿度 95%、および 5% CO 2 T175 成長培地を 25 mL のフラスコでの細胞を培養します。媒体ごとに 3-4 日を交換します。14 日の hMSCs 主通路を実行します。
- ときセル 80% 合流点に到達、古いメディアを完全に削除、優しく洗浄滅菌リン酸緩衝生理食塩水 5 mL でセル (PBS; 75 cm 培養フラスコ).
- は、フラスコから PBS を削除し、0.25% トリプシン エチレン....
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結果
図 1は、自分の幹細胞の性質を保存する高効率でトリプル記者増殖型 hMSCs ことができますを示しています。バリ (図 1図 3) で、導入された hMSCs をリアルタイムで視覚化できます。この小説は、ひき割りトウモロコシ マウスの左心室への hMSCs の超音波ガイド下注入注入、最小限の罹患率と死亡率 (図 2) マウスの高速リカバリを可能にする、非常に高い成功率を保証します。HMSCs と 1 つのマウスを注入するための平均時間は約 10 分と未満 8-9% の罹患率と死亡率はこの手法で観察されました。死亡率の主な理由は、脳卒中と出血性心嚢から心タンポナーデです。前のヴィヴォ解析 24 h 立体的の心内 (動脈) 管理、確認後管理結果のこのルートで行う無料の炎症ではなく、サンプ マウス炎症小腸 hMSCs のホー.......
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ディスカッション
本研究では、実験的 CD の小腸マウスモデルで hMSCs 超音波ガイド下心臓内注射法について説明します。この手法は、針の軌道が超音波によって提供されるマウスの左心室のリアルタイム、高解像度の画像に基づいて調整することができる生存と成功率が非常に高いです。左心室への配信の利点は、hMSCs 気管動脈内投与に分散されて静脈、肺の細胞の凝集を避けるためのバイパスします。以前は、動脈内の配信のため頚動脈カテーテルは、MSCs16,21を注入する使用されました。頸動脈カテーテル検査法には、動脈内カテーテルを配置するために頚動脈を公開するために手術が含まれます。カテーテルは、輸血細胞のため大動脈弓に向かって進んだ。カテーテルが削除されその後、内頚動脈結紮します。この手法頚動脈カテーテルと比較して、左の心室の MSCs の超音波ガイド下注入は低侵襲くらい高速 (約 10 分/マウス 60 分/マウス対) であり以下の罹患率と死亡率 (<10%対30%)。上腸間膜動脈のカテーテルを介して hMSCs 人間臨床.......
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開示事項
著者が明らかに何もありません。
謝辞
マニッシュ デイブは、国防総省グラント PR141774 およびクローンの大腸炎財団のアメリカのキャリア開発賞によってサポートされます。ファビオ Cominelli の研究室は、NIH 支え DK042191 ・ (FC)、DK055812 (・ FC)、DK091222 (FC) と DK07948 (・ FC) を付与します。アーノルド ・ キャプランの研究室を一部 L. デイヴィッド ・ e. バージニア州ボールドウィン財団によってサポートされています。資金の機関に研究分析や原稿の執筆での役割はなかった。内容は、著者の責任です。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| DMEM-LG | Gibco | 31600-091 | |
| 0.25% トリプシン-EDTA | Gibco | 25-200-072 | |
| 硫酸プロテアミン | Sigma Aldrich | P4020-1G | |
| D-Luciferin | Goldbio | luck-500 | |
| Fetal Bobine Serum | Gibco | 26140-079 | |
| Antibiotic-Antimycotic | Gibco | 15240-062 | |
| PBS | HyClone | SH30256.01 | |
| 175 cm tissue cutlure flasks | Corning | 431080 | |
| 75 cm tissue cutlure flasks | Corning | 430720 | |
| Centrifuge tubes | Crysalgen | 23-2265 | |
| Tissue-Plus O.C.T. compound | Fisher HealthCare | 4585 | |
| Cryomold Standard | Tissue-Tek | 4557 | |
| Lenti-PAC HIV発現パッケージングシステム | GeneCopoeia | HPK-LvTR-20 | |
| ポビドンイオニジンスワブ | Medline | MDS093901 | |
| 脱毛クリーム | Nair | N / A | |
| イソフルラン | ピラマル・ヘラスケア | NDC 66794 013 25 | |
| 鉗子 | ファインサイエンスツール | 11200-33 | |
| 解剖はさみ(ワーグナー) | ファインサイエンスツール | ワーグナー14068-12 | |
| プラルベ獣医軟膏 | プラルベ | NDC 17033-211-38 | |
| ソニック100超音波伝送ゲル | パーカー研究所 | 01.08 | |
| ペトリ皿 | フィッシャーサイエンティフィック | FB0875711A | |
| SAMPマウス | Cleveland Digestive Disease Research Core Centre | ||
| AKR mice | Cleveland Digestive Disease Research Core Centre | ||
| Vevo 770 イメージング システム | Visual Sonics、カナダ | ||
| IVISスペクトラムシリーズシステム | PerkinElmer、ウォルサム、マサチューセッツ | ||
| 州リビングイメージソフトウェア | CaliperLifeSciences, PerkinElmer, Waltham, MA | ||
| トリプルレポーター | Kindly provided by Dr. Zheng- Hong Lee, CWRU, (引用 19) |
参考文献
- Duijvestein, M., et al. Pretreatment with interferon-gamma enhances the therapeutic activity of mesenchymal stromal cells in animal models of colitis. Stem Cells. 29 (10), 1549-1558 (2011).
- Sala, E., et al.
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再版と許可
