涙映画サイトカインの解析は、様々 な眼疾患の勉強に役立ちます。ビーズによるマルチプレックスアッセイは簡便かつ高感度、少量サンプルの複数のターゲットのテストを有効にします。ここで涙映画サイトカインを使用してプロファイリングするためのプロトコルを説明ビーズ基づくマルチプレックス アッセイ。
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この記事について
サマリー
要約
涙液膜は、潤滑、栄養、基になるセルに保護を実現、目の外部表面を覆う脂質、タンパク質やミネラルの複雑な混合物です。涙の分析は、予測、診断、および様々 な眼疾患の予後バイオ マーカーの同定のための新興エリアです。涙は簡単にアクセスできる、非侵襲的な彼らのコレクション。したがって、高度なテクノロジは変化タンパク質や代謝物組成と病態との関連を研究する涙の複数検体の同定に隆起を集めています。涙サイトカインは、眼の表面の健康を研究するための理想的なバイオ マーカーでもドライアイと春季カタルのような別の眼表面疾患のメカニズムを理解するのに役立ちます。ビーズによるマルチプレックスアッセイは、感度の高いサンプルの少量の複数検体の検出の能力を持っています。ここで涙サンプル コレクションの標準化されたプロトコルについて述べる、サイトカインは、ビーズを使用したプロファイリングの抽出と分析による多重アッセイ。
概要
涙は、涙腺と付属腺によって生成され、眼の外側の表面をコートします。涙液膜は外側の脂質層の可溶性タンパク質が含まれています内部の水層で構成され、ムチンと膜結合ムチン。涙は、微生物の侵入を防ぐため栄養素を供給し、眼の表面に潤滑を提供します。涙は、空気と角膜への酸素輸送のための組織間のインターフェイスとして機能します。1涙液層はタンパク質、炭水化物、脂質、電解質の成ってです。緑内障、ドライアイ、春季カタル、糖尿病のような眼と全身疾患との涙液タンパク質間の関連付け、甲状腺関連眼窩と癌がいくつかの研究で確認されました。2,3,4涙のサンプルが収集できるマイクロキャピ ラリー チューブまたは涙の流れストリップ (シルマー ストリップ)。また、シルマーのテストは、角膜・屈折矯正手術診療所、結果はサイトカイン解析アッセイに使用可能性があります実行される標準的な手順です。非侵襲的なサンプルのコレクション、バイオ試料のアクセシビリティと様々 な生理学的、病理学的条件と組成物を引き裂く協会作る映画いくつかの眼と全身疾患のバイオ マーカーの潜在的なソースを引き裂きます。4,5,
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プロトコル
、シンガポールのタン ・ トク ・ セン病院倫理委員会で承認された本研究で使用するプロトコル
。1 涙サイトカイン解析
- 涙のコレクション:
- 試験椅子座ると彼/彼女の頭はヘッドレストを配置する件名をお願いします。 。
- 見て、慎重に開いて (ワットマン濾紙号 41 製) シルマー ストリップ ストリップの丸い端を眼の下の円蓋に置き、5 分間目を閉じて主題を指示する対象を求めます。涙を収集しながら、眼の表面の接触を最小限に抑えるため細心の注意を取る。 30
- ストリップを削除し、滅菌 1.5 mL 遠心チューブに彼/彼女の目を開いて件名をお願いします。サイトカインのプロファイリングのテストまで研究室または-80 o C でストアにチューブをすぐに転送します 。
- Tear サンプル涙流れストリップからの溶出:
- 涙流れストリップを (テストする涙の量を標準化) に 0.5 cm の長さにカットし、滅菌 1.5 mL 遠心チューブに配置 。
- 追加 30 μ l
- 別 1.5 mL 遠心チューブに上清を移すし、ストリップを破棄します。氷の上の管を含んでいるサンプルを置き、サイトカイン プ....
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結果
涙流れストリップを使用して 4 健常者の 8 件目から採取した涙とサイトカイン レベルは、上記のプロトコルを使用して分析しました。すべての被験者は男性および 4 人の被験者の年齢は 36、42、44、52 歳それぞれ。眼表面の健康とドライアイ疾患を評価した臨床試験 (涙映画解散時間、シルマー テスト、角膜染色、結膜染色、蓋/マイボーム腺検査、角膜の涙徴候と視覚的な兆候と症状) によると、国際ワーク ショップ目乾燥、2007 年ガイドラインおよび科目のどれも任意の徴候やドライアイの症状を示した。31
分析 41 サイトカインのうち 31 サイトカインが検出しました。 すべての涙のサンプルで IL 17A、MIP 1 β、TNF α が 4 科目の 7 目で IL 4 は IFN-γ は IL-1 a 3 subj の 5 目で検出された 3 科目の 6 の目で検出された 4 学科の 6 の目で検出されました.......
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ディスカッション
サイトカインは、小さな細胞から分泌されるタンパク質と免疫応答を調節する強力な免疫変調器です。32涙目と病気の発症のメカニズムを理解し、眼の健康の状態を判断するために役立つプロファイル サイトカインに関する研究の様々 な病態に関連しているサンプルで様々 なサイトカインの発現疾患の重症度、診断と進行。2,5低蛋白質濃度と小さなサンプル ボリューム涙サイトカインの分析のための ELISA のような試金の使用を制限する従来の方法の主要な課題であります。33ビーズによるマルチプレックスアッセイが免疫は、elisa 法に明確な利点があります。ビーズによるマルチプレックスアッセイ複数検体の分析のため少量のサンプルを必要とする、機密性の高い、体液蛋白質の picogram 濃度の検出が可能です。34
ここでビーズ基づくマルチプレックス アッ.......
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開示事項
著者が明らかに何もありません。経済的利害関係や利害の対立はありません。
謝辞
研究活動は、タン ・ トク ・ セン病院個別のシード資金調達プログラム 2015; からセンターの助成金によって支えられました。シンガポールの目の研究所パイロット助成と基金のタン ・ トク ・ セン病院ピッチを付与します。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| Milliplex MAP ヒトサイトカイン/ケモカイン磁気ビーズパネル -1 kit | Merck, USA | HCYTOMAG-60K-41 | |
| Flexmap 3D luminex instrument | Luminex Corp, Austin, TX, USA | ||
| xPonent software | Luminex Corp, オースティン, テキサス州, 米国 | ||
| RBXGenerator ソフトウェア | BIO-RAD, フランス | ||
| Bio-Plex Manager 6.1 | BIO-RAD, フランス | ||
| プレート シェーカー | コーニング, 米国 | ||
| TECAN マイクロプレート ウォッシャー | Tecan, スイス | HydroSpeed | |
| Vortex Genie 2 | Scientific Industries inc, 米国 | G560E | |
| ピペット | メトラー・トレド、カリフォルニア州、米国 | ||
| 1.5ml 微量遠心チューブ | Axygen、米国 | MCT-150-C | |
| シルマー 涙流試験ストリップ | アイケア&キュア、米国 | 101657 | |
| Flexmap 3D キャリブレーションキット | Luminex Corp、米国テキサス州オースティン | 40-028 | |
| Flexmap 3D 検証キット | Luminex Corp、米国テキサス州オースティン | 40-029 | |
| 眼科用検査用アームチェア |
参考文献
- Conrady, C. D., Joos, Z. P., Patel, B. C. Review: The Lacrimal Gland and Its Role in Dry Eye. J Ophthalmol. 7542929, (2016).
- von Thun Und Hohenstein-Blaul, N., Funke, S., Grus, F. H. Tears as a source of biomarkers for ocular and systemic diseases. Exp Eye Res. , 126-137 (2013).
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再版と許可
