方法論記事

海綿神経刺激とラットの海綿静脈洞部の圧力の記録

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DOI：

10.3791/56807

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2018年4月23日

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1Biomedical Laboratory and the Research Unit of Urology, Department of Clinical Research, University of Southern Denmark, 2Department of Surgery, University of Vermont, 3Research Unit of Urology, Department of Clinical Research, University of Southern Denmark, 4Department of Urology, Odense University Hospital

この記事について

サマリー

本研究は、手術手順の簡略化と神経電極の絶縁の海綿状の神経刺激を実行する方法について説明します。 海綿静脈洞部圧力測定とシリコーン接着剤を使用して複雑な。

要約

海綿神経 (CN) の刺激および海綿静脈洞部の圧力 (ICP) の測定は、テストおよび評価の勃起不全の治療に広範囲に使用されています。ただし、使用される方法によって異なります所、落とし穴がまだ存在します。本研究の目的は、信頼性と再現性のあるモデルを提供する手技を記述するためだった。坐骨結節に挿入、その時点坐骨海綿体筋を公開すると、陰茎の cru は、最小限の郭清と勃起機能に関与する構造への損傷 cannulated でした。持ち上げると、乾燥を必要とせず、CN の繰り返しの刺激電極神経複合体を分離する 125 μ m バイポーラ銀電極と生体適合性のシリコン接着剤を使用して達成されました。このメソッドはストレッチと神経を乾燥を減らすことによって neuropraxia を防ぎ電気的なリークを否定し、代替経路の刺激を防止する神経の完全な分離を提供します。

概要

実験動物の勃起機能のin vivo研究はエックハルト1の先駆的な実験的な作品で 1863 年創業。骨盤神経の電気刺激は、犬の増加の ICP を誘導するために使用されました。20 世紀を通して似たような実験的プロトコルは犬、猿、猫、ウサギなどの大型動物で使用されました。ラットにおける勃起機能評価最初 1989年2クインランらによって開発されました。メソッドは以来変更、いくつか他のグループ3の4によって更新されます。今日では、ラットは最も広く勃起不全の病理を勉強し、新たな治療法の選択肢を評価するための動物モデルを使用します。頸動脈, 測定 ICP、陰茎の cru のカニュレーションと CN の刺激の直線を使用して、ICP の増加を誘発する全身の血圧を記録、手続きの主な手順が含まれます。いくつかの研究は、モデルを改良した、再現性、問題が残る場合、変数の結果は、異なる研究室で報告されています。いくつかの落とし穴をまだ保持します。

前の記事5,6,7,8,9,10は、陰茎海綿体のカニュレーションの degloving の完全陰茎露出の使用をについて説明します。これは操作として最適なアプローチではなく、破壊的な郭清は、勃起機能に不可欠な構造に傷害を引き起こします。神経刺激が実験結果に影響を与えることができる複数の要因のために最適ではないが、CN の郭清は記述10、11にしました。CN 刺激の手法は、神経の周りに置き、バイポーラ フック電極上を引っ張ってくると刺激の前に神経を乾燥、周囲の組織から神経を持ち上げる含まれています。これは神経の損傷や電気の漏電、減少応答または代替経路など、骨盤底筋、膀胱の刺激による誘導で虚偽の増加の結果と胃腸の様々 な程度につながることができます。管12。これらすべての要因は、再現性を制限します。

私たちの研究の中に両方の深さと麻酔の種類である ICP に深遠な効果を観察しました。ペントバルビ タール ナトリウム、ケタミン ・ キシラジンまたはケタミン/ミダゾラム注射イソフルラン/酸素吸入、麻酔剤です。

ここで簡略化された手術法を説明、実験的プロトコルの標準化をサポートするためのデータを提供します。

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プロトコル

動物は、制度のガイドラインに従って南デンマーク大学動物医療施設に収容されました。ケアと実験動物の使用のための健康の国民の協会ガイドに従ってすべての動物実験を行った。これは、急性、生存非手術です。

1. チューブ、電極、および外科手術用器具の準備

  1. 次の顕微鏡機器を使用: 外科はさみ、斜めマイクロはさみ、ティッシュ鉗子、デュモン #7 のペアと #5 湾曲したマイクロ鉗子、マイクロ針ホルダーとリトラクター。
    注:急性の手順としては、器具を滅菌する必要はありません。使用後は、清掃し、70% のエタノールのヒントを拭いてください。
  2. 70% エタノールでチューブを浸漬し、滅菌の 0.9% でフラッシュ使用前に 100 U/mL と塩化ナトリウム。空気の泡システムに導入することを避けるために満たされた管を残します。
  3. ICP 測定用カテーテルをするポリエチレン (PE)-50 チューブの 20-30 cm の長さ部分をカットします。管は湿し水の圧力を減らすためにできるだけ短くを確認します。
  4. 針が途中で中断されるまで、滅菌 24 G 針サイドにサイドを曲げます。Cru を陰茎に挿入するため PE チューブの遠位端にベベル部分を接続します。他は半分圧トランスデューサーに接続するためのハブに挿入します。ヘパリン生食液 (100 U/mL) システムを入力します。
  5. バイポーラのテフロン被覆電極をするためには、カット 2 125 μ m 銀は同じ長さにワイヤーします。テーブルの端にワイヤーを接続し、それらをまとめてスレッドのテープの一部を使用します。その後、黒い板に電極を接続します。
  6. テフロンに小さな切開を行い、#5 マイクロ鉗子を使用する電極の先端をテフロン コーティングの 4-5 の mm 長さ。ヒントをも長さを達成して、メスの刃の鈍端のまわりの端を曲げ、フックを作成するメスで切った
  7. 上向きフックと黒のプレートの端に少し拡張エンドと電極をテープします。10 s とラップ接着剤バブル電極フックから 1-2 mm のプラスチック板にシリコン接着剤を混ぜます。
  8. (図 1) を使用する前に約 5 分間乾燥すること。刺激への接続を許可するもう一方の端の長いセクションからテフロンをストリップします。
    注:再先端のフックをやって、電極を何回も使用できます。

2. 動物の準備

  1. 動物を麻酔した後、腹部、首、会陰の下半分を剃る。70% アルコール ポビドン ヨードが 3 回続くと動物をスクラブします。ラットを仰臥位で温水外科パッドに配置します。獣医眼軟膏を適用し、キャリアとして 2.5% イソフルランと 0.8 L/分の酸素と鼻の円錐形に麻酔を切り替えます。
    注:イソフルラン麻酔の許容可能なレベルを達成するために酸素のレベルを調整します。

3. 術前準備

  1. 手術顕微鏡下で全体の手術の手順: 3.15 X から 20 X までの倍率で十分です。手袋を使用し、手術中のクリーンな環境を維持します。ドレープにラットを配置します。

4. 坐骨海綿体筋解離 ICP 測定用

  1. メス、ストレートのはさみを使用し、デュモン #7: マイクロ鉗子 1 cm を垂直にする陰茎のベースのレベルから開始して、下方 (図 2 a) を拡張する正中皮膚切開 5 mm 外側。Q ティップを使用し、陰嚢 (図 2 b) に横方向の筋膜を慎重に分離します。筋膜を切り裂く後、リトラクターを添付し、坐骨結節 (図 2) を見つけるに綿の先端-スワップで触診。
  2. 坐骨海綿体筋、可視化されるまでこのポイントの脂肪組織の内側を通して解剖 (図 3 a)。デュモン #7 曲線マイクロ鉗子のペアを使用し、縦筋を分離します。逃げずは、明るい白い構造 (図 3 b) として表示されます。マイクロ鉗子、マイクロはさみを使用して、適切にそのコース (図 3) を参照してくださいに逃げずを公開します。
  3. システム設定のキャリブレーション後陰茎 cru (図 4) に並列実行されるかどうかを確かめて、会陰部皮膚からチューブを挿入します。場所の行を残して、切開の生理食塩水で潤いを保ちます。

5 刺激に対する CN 郭清

  1. 2 cm 下げると、正中線、メス、ストレートのはさみおよびマイクロ ピンセットのペアを使用して最初、皮膚を通して腹部切開を確認します。一致する白線に沿って筋膜切開を作成するアルバと基になる筋肉組織、膀胱と前立腺を公開します。
  2. リトラクターを良い露出を達成するために使用します。綿棒を使用して主要な骨盤神経節 (MPG) 明確に可視化を取得する脂肪組織から前立腺と CN、前立腺 (図 5) の背側面に実行しています。
  3. Mpg ファイルと CN の可視化後、慎重に斜めマイクロはさみ (図 6 a)、2-5 mm、mpg ファイルに遠位神経を覆う筋膜を切開します。#5 マイクロ鉗子の使用、無料の 4 mm 長い部分 (図 6 b) にそれの下に神経の両側にテイッシュ、神経 (図 6 c) の下で 9-0 縫合糸をスライドさせます。
  4. バイポーラ電極 (図 7 b) 神経の周りのフックの配置を容易にする縫合 (図 7 a) の助けを借りて、少し神経を昇格させます。アシスタント混在させるインシュリンの先端で 2 液シリコン接着剤神経 5 s. ドライ用の針し、フックと神経 (図 7 c, d) の周辺に接着剤を適用しなさい乾燥して接着剤を許可する約 1 分の電極を少し引いて、神経を高く保ちます。
  5. 任意の引っ張るか、または電極のねじれを避けるために右側のリトラクターを除いて、リトラクターを削除します。切開を生理食塩水に浸漬と一般の生理食塩水ガーゼで露出した臓器を濡れています。

6. 海綿体 ICP 測定用穿刺

  1. リトラクターを使用して逃げずの可視化を復元します。Cru を歪めるだろう、坐骨海綿体筋に、リトラクターを接続ことを確認します。
  2. 針を添付し、逃げずにそれを導入する前にヘパリン生理食塩水でチューブをフラッシュします。保持引き伸ばされ、片方の手でデュモン #7 曲線マイクロ鉗子を使用して逃げず (非利き手)、逃げず、筋肉の残りの部分の挿入点の遠位。ストレート微細鉗子その他の支配的な手で針を保持し、それを導入する海綿体 (図 8) のコースと平行します。
  3. 5-8 mm 針を海綿体に押し込みます。チューブをフラッシュおよび cru を押して回線 (図 9) をテストします。漏れがないことを確認します。偶発的な線を引いて避けるためテープでテーブルにチューブを固定します。リトラクターを削除します。

7. CN の刺激

  1. 録画プログラム (例えばスパイク 2) と海綿静脈洞部と平均動脈圧を連続記録を実行しています。
  2. CN 刺激の刺激 (例えばSD9 草楽器を参照テーブルの材料) の次のパラメーターを設定: 電流 1.5 mA、周波数 16 Hz、3 V で電圧とパルス幅の 1 分の刺激を最小限に抑えて 5 女史適用 50 s刺激間に残り。
    注:最初の刺激は通常減少応答 (図 10) になります。

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結果

使用推奨される刺激の設定でこのプロトコルのイソフルラン 2.0% 酸素吸入麻酔下で 0.8 L/分必要があります結果が図 11および図12に示すように、背中合わせに複数があります。75 〜 80 ミリメートル Hg。図 13間刺激応答を示しています同じ安定した応答に 20 分刺激に 73 〜 77 ミリメートル水銀テスト行 ICP 測定で安定してチューブをフラッシングと cru (図 9) で軽くたたくことによって。ベースラインに戻って急速な応答は、うまく配置されたラインの特徴です。逃げずの整合性が破損している (図 14) を刺激するとテストが低いピーク圧力と、フラッシュと、タッピング後ベースラインに戻って遅い応答および減少応答で発生します。また、ヘパリン生理食塩水フ...

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ディスカッション

本研究の第一の目標は、ICP 録音のため陰茎 cru カニュレーションの簡略化された手術手技と電気刺激の CN の分離を記述するためだった。紹介した手術を簡素化し、CN の刺激で ICP の上昇の再現可能な録音を提供する海綿体の解剖に変更。1 cm 縦切開で指導として明白な坐骨結節を使用して、陰茎のベースの外側を実現坐骨海綿体筋や精巣白膜の良好な露出。この手順より速く (15 分未満) 文学と原因最小限の組織混乱2,3,4に記載しました。

現在使われている CN 刺激法は、フック、リフティング、含まれています、応用10各電気前に CN の乾燥です。この手法では、それぞれの刺激のための同じである条件は限りません。また、神経のリフティング マイクロマニピュレーターの使用を必要とし、ストレッチと neuropraxia につながる神経の解放を繰り返します。...

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開示事項

著者が明らかに何もありません。

謝辞

著者の謝辞があります。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
アドソン鉗子ファインサイエンスツール11006-12
モン#7鉗子ファインサイエンスツール11271-30
モン#5鉗子ファインサイエンスツール11273-20ToughCut
メイヨーシザーファインサイエンスツール14110-15
ミニチュアバンナススプリングシザーファインサイエンスツール15006-09
超微細止血サイエンスツール13020-12
Crile止血ファインサイエンスツール13004-14
Kwik-SIL接着剤ワールド精密機器KWIK-SIL
テフロンコーティング銀線0.125mmワールド精密機器AGT0510
弾性ワイヤーリトラクターカスタムメイド
メスの刃ファインサイエンスツール10023-00
PE-50 チューブワーナーインスツルメンツ64-0753
23 G ニードルクルウス121272
SD-9 スクエアパルス スティミュレーターソマトコ1077/183
血圧トランスデューサーとケーブルワールド プレシジョン インスツルメンツBLPR2
ラウコトゥップ コットンチップ アプリケーターLohmann-Raucher11966
Pro-ophta Ocular SticksLohmann-Raucher16515
NaCl 0,9 % 100 mL地元の薬局
ヘパリン地元の薬局
25 mL シリンジオーデンセ大学病院
獣医眼軟膏 - Viscotears地元の薬局
銀線 Science Products GmbH、ハイデルベルク、ドイツ
シリコン接着剤 Kwik-Sil、World Precision Instruments、サラソタ、フロリダ州、米国
デュデュファイン

参考文献

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