同所性同種人間原発性脳腫瘍を運ぶ免疫不全マウスにおける準備と同種の人間のリンパ球の脳定位固定装置の管理のためのプロトコルを紹介します。本研究は、実現可能性と intrabrain 配信細胞免疫療法の抗腫瘍効果の概念実証を提供します。
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方法論記事
同所性同種人間神経膠腫異種移植片のマウスモデルの細胞傷害性免疫細胞の定位の養子転送
* These authors contributed equally
この記事について
サマリー
要約
膠 (GBM)、成人では、最も頻繁に、積極的な脳腫瘍の症例は、予後不良な一般的に関連付けられている、最後の 10 年間で不足している効率的な治療法が提案されています。新しい治療戦略を設計するための有望な候補者、間細胞免疫療法は高度侵襲を排除する対象となっているし、化学療法放射線腫瘍細胞、可能性がありますこの癌の迅速かつ致命的な再発に関与します。したがって、腫瘍近傍の人間の Vϒ9Vδ2 の T リンパ球など、同種の糸球体基底膜反応免疫細胞エフェクター administration(s) 効率を提供するユニークな機会を表しますが、非常に直接の治療薬に集中して、脳の悪性腫瘍のサイト。同所性同種人間原発性脳腫瘍を運ぶ免疫不全マウスにおける準備と同種の人間のリンパ球の脳定位固定装置の管理のためのプロトコルを紹介します。本研究は、可能性と intrabrain 腫瘍ベッド内で同種の人間のリンパ球の定位注射に依存するこれらの細胞免疫療法の抗腫瘍効果の前臨床証拠の概念を提供します。
概要
糸球体基底膜 (WHO グレード IV 星状細胞腫) は、成人では最も頻繁に、積極的な脳腫瘍の症例です。積極的な治療法は手術とラジオ化学療法を組み合わせた、GBM 変わりません非常に予後不良 (14.6 カ月と 2 年死亡 > 73% の生存期間中央値)1に関連付けられています。これは、いくつかの効率的な治療の進歩が2の最後の 10 年を検証されている証拠します。効果的な治療戦略3,4、5のデザイン候補の中で免疫療法6現在検討するいると高度侵襲とラジオ/化学療法抵抗性の腫瘍を削除セルは、迅速かつ致命的な腫瘍再発7への重要な貢献の疑いがあります。様々 な潜在的な免疫学的ターゲットが識別されたとの提案された免疫療法や自然を含むまたは変更した αβ GBM の腫瘍抗原など応力誘起分子8,9、ϒδ T リンパ球 10。選択した糸球体基底膜反応免疫細胞エフェクターを管理する可能性は、....
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プロトコル
次プロシージャを含む動物科目制度ガイドライン (契約 #00186.02; ペイ ド ラ ロワール [フランス] の地域倫理委員会) によるとを行った。人間の PBMCs は情報に基づいた健康なドナー (エタブリセモン Français デュ歌ったナント, フランス) から集められた血から分離しました。すべての手順は、無菌条件の下で実行されます。
1. 非特異的細胞エフェクター T 細胞の拡張
- 準備し、フィーダー細胞 35 Gy を照射します。2 x 105 - 4 x 105エフェクター細胞の刺激の 3 つの明確な健康なドナーから 10 x 106 PBMCs と 1 x 10 の6 BLCLs を準備します。
- フィーダー細胞と 15 ml の 10% の熱不活化 FCS、2 ミリメートル L グルタミン、ペニシリン (100 IU/mL) とストレプトマイシン (0.1 μ g/mL) と 300 IU/mL 組換え IL-2 添加 RPMI のエフェクター細胞を再懸濁します。
- 最終濃度 1 μ G/ml に PHA L を追加、慎重にミックス、および 150 μ L/ウェルの 96 穴 U 底プレート細胞懸濁液を配布します。
- 37 ° C で、加湿雰囲気で 5% CO2で孵化させなさ....
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結果
本研究では、脳内定位注射腫瘍ベッド内で直接実行に基づく腫瘍を持つマウスの細胞免疫エフェクター細胞の養子の転送の戦略について説明します。
大規模な注入量に関連付けられている脳損傷のすべてのリスクを最小限に抑える、エフェクター細胞懸濁液 (20 x 106 15 20 μ L の PBS セル) を集中する必要があります。この細胞濃度ステップがエフェクター細胞の生存率に影響を与える可能性があるかどうかを確認するには、これらの細胞は説明プロトコルに従って準備され、変らずに読み込まれます。エフェクター細胞は、変らずにそれらをロードした後すぐに、または 10 分を収集しました。セルは、propidium ヨウ化 (PI)、細胞側の透過物と異なる縦長 (0、24、72 時間) でフローサイトメトリーによる解析ではない蛍光 DNA のデュアルインターカレーション剤で染色しました。準備と読み込み、変らずに有意に影響しないことエフェクター細胞の生存.......
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ディスカッション
養子伝選択ネイティブまたは設計された免疫エフェクター細胞腫瘍浸潤の脳腫瘍、非変形細胞15、に対して反応性を制限することの世話などを効率的に治療するために有望なアプローチを表す 16,17,18。ただし、脳を含む中枢神経系は、血液脳関門の存在と古典的なリンパ排液システム19,20の不足のために特に特定の免疫状態です。これらの生理学的機能は人身売買組織に影響を与えるし、免疫細胞の全身性注射を危険にさらす可能性があります。これらの障害を克服するためには薬理学的化合物21,を含む微小球に関しては、腫瘍部位に密接に抗腫瘍細胞は配信ではなくローカルの原則に野末注射を検討しています
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開示事項
著者が明らかに何もありません。
謝辞
著者は、ナントから大学病院動物施設 (UTE) ナントの畜産とケア、細胞と組織イメージング、イメージング ナント大学 (MicroPICell) の中核施設とフローサイトメトリー施設 (Cytocell) のスタッフに感謝します。彼らの専門家のテクニカル サポート。この仕事 INSERM、CNRS、ユニヴェルシテ ・ ド ・ ナント、Institut 国立デュがん (インカ #PLBio2014-155)、リーグのナシオナル contre le がん (AO 地域間 2017 年)、欧州コンソーシアム時代ネット Transcan2 によって資金が供給された (Immunoglio)。チームは財団注ぐラ凝った Medicale (DEQ20170839118) によって資金を供給します。LabEX 囲碁のコンテキストでこの作品を実現し、IHU セスタス プログラムでサポートされている、国家研究機関 Investissements d'Avenirを介してプログラム ANR-11-LABX-0016-01 と ANR-10-IBHU-005、それぞれ。IHU セスタス プロジェクトはナント メトロポールとペイ ・ ド ・ ラ ・ ロワール地域でもサポートされます。著者は、Chirine ラフィア ・が原稿を修正ヘルプを提供することをありがちましょう。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 3つの異なる健康なドナーからの | PBMC | ||
| つの異なるドナーからの | BLCLロ | ||
| ズウェルパークメモリアルインスティテュートミディアム(RPMI) | Gibco | 31870-025 | |
| FCS | Dutscher | S1810-500 | |
| L-グルタミン | Gibco | 25030-024 | |
| ニシリン/ストレプトマイシン | Gibco | 15140-122 | |
| IL-2 | ノバルティス | プロリューキン | |
| PHA-L | シグマ | L4144 | |
| 脳定位固定装置フレーム | Stoelting Co. | 51600 | |
| マウスアダプタッカー (脳定位固定装置用) | ストールティング株式会社 | 51624 | |
| マイクロシリンジポンプインジェクター | WPI | UMP3-4 | |
| NanoFilシリンジ | WPI | NF34BV-2 | |
| NSGマウス | Charles River | NSGSSFE07S | |
| Ketamine | Merial | Imalgène 1000 | |
| キシラジン | バイエル | ロンプール 2% | |
| はさみ | WPI | 201758 | |
| 鉗子 | WPI | 501215 | |
| OmniDrill 115/230V | WPI | 503598 | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon | VCP397H | |
| キシロカイン | アストラゼネカ | 3634461 |
参考文献
- Stupp, R., Roila, F. Malignant glioma: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Annals of Oncology. 20 Suppl 4, 126-128 (2009).
- Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. Standards of care for treatment of....
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再版と許可
