慢性サルモネラ感染誘発性腸線維症

サマリー

このプロトコルは、トランスムラール炎症および線維症を含むクローン病の主要な病理学的特徴に似たサルモネラ駆動腸線維症のマウスモデルを記述する。この方法は、C57Bl/6遺伝的背景に維持された変異マウスを使用して線維性転帰を変化させる宿主因子を評価するために使用することができる。

要約

コラーゲンなどの細胞外マトリックスの病理学的蓄積を特徴とする組織線維化は、持続的な炎症および調節不自由な修復の結果である。炎症性腸疾患(IBD)では、線維症は外科的切除以外の有効な治療法がない再発的な狭窄形成につながる。その遅い発症のために、線維症を駆動するプロセスはあまり研究され、ほとんど知られていない。したがって、線維性合併症はIBDにおける大きな課題を表す。このプロトコルでは、C57Bl/6マウスのストレプトマイシン前処理に続いて、ワクチングレードのサルモネラ・チフィムリウムΔAroA変異体が持続病原体化につながる場合に、腸線維症の堅牢な生体内モデルが記載されている。盲党の線維症。Sを準備するための方法論。チフィムリウムΔAroAは、接種、盲腸および脾臓における病原体負荷を定量化し、腸組織におけるコラーゲン沈着を評価することを説明する。この実験的疾患モデルは、CD様腸線維症を増強または悪化させる宿主因子を調べるのに有用である。

概要

潰瘍性大腸炎(UC)およびクローン病(CD)は、IBDの2つの主要な形態であり、消化^管1、2の慢性および再発性炎症性疾患として特徴付けられる。これらの障害は、患者の生活の質に大きな影響を与えます。IBDの症状には、腹痛、下痢、吐き気、体重減少、発熱、^疲労3が含まれる。最近の研究は、疾患病因に寄与する遺伝的および環境的要因を同定しました;このような危険因子は、発光抗^原4の転座またはオーバーサンプリングをもたらす上皮障壁の破壊に寄与すると考えられている。その結果、腸管^{免疫細胞4}によって媒介される共生細菌叢に対する異常な炎症反応を開始する。IBD関連合併症の特徴は、関節、皮膚、および^肝臓1、2を含む様々な器官に影響を与えるGI管を越えた部位にまで及ぶ可能性がある。UCの特徴は、典型的に結^腸1に局在する重症および拡散性炎症を含む。疾患病理学は、表面的な粘膜潰瘍を引き起こす腸の粘膜および粘膜下に影響を与^える1.対照的に、CDは、疾患の証拠は一般的に結腸および遠位回

プロトコル

すべての動物プロトコルは、ブリティッシュコロンビア大学の動物ケア委員会によって承認されました。

1. マウスの経口ガビングに対するサルモネラ菌の調製 ΔAroA培養

1. Sの冷凍グリセロールストックから。チフィムリウムΔAroAは、無菌接種ループを有する100μg/mL連鎖マイシンを含むLB寒天を用いて筋板を調出する。37 °Cで一晩インキュベートします。ストリープレートは4°Cで1週間まで保存できます。
2. 感染の1日前に、2.5mLの水に0.5gのストレプトマイシンを溶解して抗生物質を調剤する。ストレプトマイシン溶液を殺菌するフィルター殺菌後、100μLのストレプトマイシン溶液(20mgストレプトマイシン/用量)を用いて、球根先端の22Gガバゲ針と1mL注射器を用いてマウスを経口的にゲーゲジする。接種ループを使用して、単一のコロニーを持つ培養チューブにLBブロス(50 μg/mLストレプトマイシン)の3mLを接種する。サルモネラ培養を200RPMで振りながら一晩37°Cで好気的にインキュベートする。
3. 感染の日に、無菌PBSで一晩サルモネラ培養の2連続1/10希釈を行うことによって最終的な感染用量を調剤する。これにより、約3 x 10⁶ CFUを含む100 μLの接種が行われ得られます。
4. 球根先端の22Gガビンジ針と1 mL注射器を使用して、準備....

結果

ストレプトマイシン治療に続いてSに対する経口感染が続く。チフィムリウムΔAroAは、特に盲腸において堅牢な腸の炎症および線維症をもたらす(図1)。盲腸1g当たり108~109CFUの典型的な病原体負担と、脾臓1g当たり104^CFUは、感染した動物から回収することができる(図2)。ピクロシリウス赤色染色セカル切片における線維症の評価は、感染後21日目のピーク線維症を示し、病理の多くは42 pi(図3および図4)によって解決される。コラーゲン沈着は腸の粘膜下で最も顕著であり、粘膜の線維症は軽度である。

ディスカッション

IBDの病因に関する我々の理解は、腸の炎症のマウスモデルによって大幅に強化された。このような個々のモデルは、複雑で多因子性ヒト疾患のすべての特徴を要約するものではないが、疾患進行の主要な特徴を同定するのに有用であった。IBDに関連する線維性の狭窄は、現在の治療が疾患の発症を逆転させるのに効果がないため、主要な満たされていない臨床ニーズのままである。また、腸線維症は、現在の動物モデルの限界のために実験室での研究が困難です。BALB/cマウスにおけるTNBSへの慢性暴露は、IL-13およびTGF-B1シグナル^{伝達27、28}によって駆動される結腸における堅牢なコラーゲン沈着を誘導することが示されている。しかし、腸線維症は、DSS治療、IL-10欠損症、または養子T細胞転写モデルなどの大腸炎の他の日常的に使用される実験室モデルでは一般的に観察されない。Grasslらは、減衰したΔAroA変異サルモネラ株を有するC57Bl6の慢性消化管感染が盲^腸12の粘膜および粘膜.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
2 mL 丸底安全ロックチューブ	Eppendorf	22363344
ステンレス鋼ビーズ	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Large-Orifice ピペットチップ	フィッシャー	2707134
2 mL メガブロックプレート	Sarstedt	82.1972.002
強制針	FST	18061-22
ストレプトマイシン硫酸塩		ΣS9137
ミキサーミル	Retsch	MM