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研究記事

ガンジロン顆粒は、2型糖尿病においてSIRT3-MPC1-PC/PDH軸を通じて肝糖新生を抑制します

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DOI:

10.3791/69500

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2025年12月12日

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Department of Gastroenterology, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Research Center of Chinese Traditional Medicine, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 4Preventive Treatment Center, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine

この記事について

サマリー

本研究は、ガンジロングラヌールがSIRT3-MPC1-PC/PDH軸を通じて肝腫瘍新生を阻害することで2型糖尿病の高血糖を緩和するかどうかを調査しました。

要約

2型糖尿病(T2DM)は、肝インスリン抵抗性と過剰な糖新生を特徴とする全身性代謝障害です。ガンジロングラニュール(GZRG)は伝統中国医学の処方で、T2DMの管理に可能性が示されていますが、その根本的なメカニズム、特に肝臓糖腫瘍形成に関する詳細は不明です。本研究では、GZRGがSIRT3媒介シグナル伝達経路を調節することで高血糖を緩和するかどうかを調査しました。GZRGの抗糖尿病効果は、高脂肪食(HFD)誘導型T2DMマウスおよび遊離脂肪酸(FFA)誘導型インスリン抵抗性肝炎2細胞で評価されました。代謝パラメータ、グルコースおよびピルビン酸耐受性、インスリン感受性、脂質プロファイルを評価しました。SIRT3の過剰発現とノックダウンを通じて分子メカニズムを探り、グルコネオゲン経路における主要タンパク質(SIRT3、MPC1、PC、PDH-E2、PCK1、G6Pase)の発現を調べました。GZRG治療は、T2DMマウスおよびインスリン抵抗性(IR)HepG2細胞の両方において、高血糖の大幅な改善、インスリン感受性の向上、脂質代謝の改善に寄与しました。肝脂肪症を減緩し、糖新生を抑制しました。機構的には、GZRGはSIRT3の発現をダウンレギュレーションし、MPC1およびPCレベルの低下とPDH-E2の増加を同時に引き起こしました。このタンパク質発現の変化により、ピルビン酸代謝はグルコネオゼネシスから逸脱しました。SIRT3の過剰発現はGZRGの糖新生に対する抑制効果を逆転させ、一方でSIRT3ノックダウンはGZRGと相乗効果を発揮しました。GZRGはSIRT3-MPC1-PC/PDH軸を通じて肝臓糖新生を阻害することでT2DMを緩和します。これらの発見はGZRGの新規分子メカニズムを明らかにし、SIRT3がT2DM管理の治療標的となる可能性を強調しています。

概要

2型糖尿病(T2DM)は、世界的に最も有病率で衰弱させる慢性代謝疾患の一つとして浮上しており、公衆衛生および経済に大きな負担をもたらしています1,2。インスリン抵抗性(IR)と進行性の膵β細胞機能障害を特徴とするT2DMは、主にグルコースおよび脂質恒常性の障害によって引き起こされます3,4。グルコース調節に関与する複数の器官の中で、肝臓はグリコーゲノリシスおよびグルコネオゼネシスを通じて内因性グルコース産生を制御する中心的な役割を果たします。過剰な肝腫瘍新生は、T2DM病態生理の特徴である空腹時高血糖の主要な要因であり、血糖バランスの回復に重要な治療標的となっています。

現在の降血糖薬(メトホルミン7、チアゾリジネジオン8、GLP-1受容体作動薬9、SGLT2阻害薬10)は、異なるメカニズムを通じて血糖コントロールを実現していますが、長期使用は副作用、効果の低下、治療不耐症によって制限されることが多いです。その結果、複数の代謝経路を安全かつ効果的に標的とできる補完的または代替療法への関心が高まっています。伝統中国医学(TCM)は、その多成分かつ多標的の薬理学的特性を特徴とし、T2DM11、12、13、14、15などの複雑な代謝疾患の管理において有望な展望を示しています。いくつかの古典的なTCM製剤は、統合的な調節機構を通じてインスリン抵抗性の改善、脂質代謝の改善、肝腫瘍新生の抑制が報告されています(16,17)。

ガンジロン顆粒(GZRG)は、代謝障害の管理に臨床的に使用されてきた標準化されたTCM製剤です。GZRGは8種類の薬用ハーブからなるハーブ製剤です。これまでの植物化学的および薬理学的調査に基づき、GZRGではサルビアノル酸B、D-菌種、プロアントシアニジン、バイオレットシュウ酸、サルビアノル酸A、サルビアノル酸C、カリコシン7グルコシド、3′-メトキシプエラリン、3′-ヒドロキシプエラリン、アピゲニン-7-o-β-d-ピラノ、エモジン-8-O-β-D-グルコース、クリソファノール-1-O-グルコシド、クリソファノール-8-O-グルコシド、プエラリン、ロズマリン酸、クリプタンシノン、カテキンなどが同定されています Ft-ナイフラビン、カリコシン、ライン、グアノシン、オレイン酸、アロエエモジン、フォルモノネチン、パルミチン酸、クリソファノール、D-トリプトファン、ダンスセン、フェルル酸、マンニトール、ガリック酸、L-フェニルアラニン。伝統中国医学(TCM)が2型糖尿病の管理において持つ根本的な利点は、その多成分かつ多標的の相乗作用にあります。GZRGに含まれる数十種類の活性成分は、インスリンシグナル伝達経路、グリコーゲン代謝、炎症反応など複数の生物学的プロセスと相互作用し、単一の精製化合物では十分に再現できない統合ネットワーク効果を生み出す可能性が高い18。過去の研究では、GZRGが糖尿病モデルにおいてグルコースおよび脂質代謝に有益な効果をもたらすことが示されています19;しかし、これらの効果の正確な分子メカニズムは依然として明確ではありません。特に、GZRGが肝臓の糖新生シグナル伝達を調節することで抗糖尿病作用を発揮するかどうかはまだ明らかにされていません。

シルトゥイン3(SIRT3)は、ミトコンドリアのNAD依存性脱アセチル化酵素であり、細胞エネルギー恒常性20の重要な調節因子です。SIRT3は主要な代謝酵素を脱アセチル化・活性化することで、ミトコンドリアの酸化リン酸化、脂肪酸酸化、糖新生に影響を与えます21。異常なSIRT3発現はインスリン抵抗性、脂肪肝、T2DMの病因に関与しているとされています22,23。証拠は、肝SIRT3の過剰発現が、ミトコンドリアピルビン酸キャリア1(MPC1)24、ピルビン酸カルボキシラーゼ(PC)25、ピルビン酸脱水素酵素(PDH)26、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ(PCK1)27、グルコース6-リン酸酵素(G6Pase)28などの酵素を調節することでグルコネオゲンフラックスを増加させることを示しています。したがって、SIRT3介在のピルビン酸代謝制御は、ミトコンドリア機能と肝臓のグルコース出力を結びつける重要な枢紐であり、SIRT3はT2DMにおける治療介入の魅力的な標的となっています。

GZRGにおける生体活性成分の代謝効果が確立されており、肝臓のグルコース恒常性におけるSIRT3の中心的役割を踏まえ、GZRGはSIRT3介護によるグルコネオゲン経路の調節を通じてT2DMの高血糖を緩和すると仮説が立てられました。この仮説を評価するために、GZRGがグルコースおよび脂質代謝に与える影響を、高脂肪食(HFD)誘導型T2DMマウスおよび遊離脂肪酸(FFA)誘導型インスリン抵抗性肝炎2細胞で評価しました。さらに、肝腫瘍形成に対するGZRG抑制効果の媒介におけるSIRT3-MPC1-PC/PDHシグナル伝達軸の関与も検討されました。本研究は、GZRGの代謝的利益を支える分子メカニズムを明らかにし、T2DM管理における多標的モジュレーターとしての治療可能性を支持する実験的証拠を提供することを目的としています。

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プロトコル

この動物研究プロトコルは長春中国医科大学の動物ケア・利用委員会(承認番号2024396)によって承認されました。すべての動物実験は、国家のガイドラインおよび動物保護に関する関連する国内法に従って実施されました。

実験薬
GZRG(バッチ番号26210483)は長春中国医薬大学付属病院(中国・吉林市)から提供されました。GZRGの主なバイオアクティブ成分および品質管理パラメータは、以前の研究で特徴付けられました18。

試薬と抗体
市販のアッセイキットを用いてグルコース、グリコーゲン、非エステル化脂肪酸(NEFA)、トリグリセリド(TG)、総コレステロール(TC)、高密度リポタンパク質(HDL)コレステロール、低密度リポタンパク質(LDL)コレステロールを定量化しました。糖化ヘモグロビンおよびインスリン用の酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)キットも市販されました。ピルビン酸脱水素酵素(PDH)およびピルビン酸カルボキシラーゼ(PC)用のELISAキットも商業的に入手されました。RNAおよびcDNAの研究には、RNA組織/細胞キット、qPCRプレミックス、gDNA RT SuperMixが商業的に取得されました。トランスフェクションはトランスフェクション試薬を用いて行われました。SIRT3に対する一次抗体(RRID: AB_2837621)、ホスホエノルピルビン酸カルボキシキナーゼ1(PCK1;RRID: AB_2838732)、PDH-E2、グルコース-6-リン酸酵素(G6Pase;RRID: AB_2845572), ミトコンドリアピルビン酸キャリア1(MPC1;RRID: AB_2836209)、PC(RRID: AB_2836732)、およびグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素(GAPDH;RRID: AB_2833041)は商業業者から調達されました。

マウスと治療法
雄のC57BL/6Jマウス(5〜6週齢)は遼寧長生バイオテクノロジー有限公司から取得され、標準的な環境(22±2°C、湿度50%〜60%、12時間の明暗サイクル)で飼育され、餌と水は自由に利用されました。1週間の順応期間の後、6匹のマウスがランダムに対照群(Con)群に割り当てられ、標準的なチャウダイエットを与えられました。残りのマウスは肥満とインスリン抵抗性を誘発するために12週間高脂肪食(HFD)を受けました。

13週目には、空腹時血糖値(FBG)が11.1 mmol/L≥を示すマウスは、成功した2型糖尿病(T2DM)モデルに分類されました。これらの糖尿病マウスは、HFDモデル群、低用量GZRG(L-GZRG、3.2g/kg/d)、中用量GZRG(M-GZRG、6.4g/kg/d)、高用量GZRG(H-GZRG、12.8g/kg/d)、およびメトホルミン(Met-Met、0.2g/kg/d)に無作為に割り当てられました。GZRGとMetは経口ガベージで8週間毎日投与されました。ConグループとHFDモデルグループは同等量の蒸留水を受け取りました。治療期間終了後、すべてのマウスから血液および肝組織のサンプルを採取し、その後の分析を行いました。

腹膜炎内血糖負荷試験(IPGTT)、ピルビン酸耐性検査(PTT)、インスリン負荷試験(ITT)
代謝耐性検査は、薬物治療開始後6〜8週間の間に実施されました。IPGTTおよびPTTでは、マウスは約16時間の夜間空腹を摂取しました。ITTでは、より短い4時間の断食期間が導入されました。断食後、マウスは腹腔内注射を受けました。これらは、グルコース(IPGTTの場合2g/kg)、ピルビン酸ナトリウム(PTTの場合2g/kg)、またはヒト通常のインスリン(ITTの場合1 U/kg)のいずれかでした。注射後0分、30分、60分、90分、120分に、比較済みグルコメーターを用いて尾部静脈の血液サンプルから血糖値を測定しました。

生化学的分析および酵素活性アッセイ
空腹時血糖値(FBG)、ヘモグロビンA1c(HbA1c)、インスリン(INS)レベルは、製造元の指示に従い市販のアッセイキットを用いて測定されました。インスリン抵抗性恒常性モデル評価(HOMA-IR)は以下の式で計算されました。

HOMA-IR = [FBG (mmol/L) x INS (μU/mL)] / 22.5

肝臓組織におけるNEFA、TG、TC、LDL-C、HDL-Cの循環レベル、およびPDHおよびPCの酵素活性は、それぞれの市販キットを用いて定量化しました。

肝臓組織の組織病理学的解析
新鮮な肝組織は10%中性緩衝ホルマリンに24時間固定され、その後標準処理でパラフィン埋め込みが行われました。切片(厚さ5μm)はヘマトキシリンとエオシン(H&E)で切断され、一般的な形態評価のために染色されました。脂質の可視化のために、選ばれた肝臓検体を最適切削温度(OCT)化合物に埋め込み、スナップ冷凍、クリオ切開、オイルレッドOで染色しました。

細胞培養と処理
ヒト肝腫瘍細胞株HepG2は中国科学院のタイプ培養コレクションから採取されました。細胞は25 mMグルコース、10%胎児用牛血清(FBS)、1%ペニシリン・ストレプトマイシンを補足した最小必須培地(MEM)で培養されました。培養は5%CO2の加湿インキュベーターで37°Cで維持されました。

インスリン抵抗性(IR)の in vitro モデルを確立するために、70%-80%のコンフルレンスにある細胞に対して、オレイン酸とパルミ酸を含む遊離脂肪酸(FFA)混合物を2:1モル比で24時間処理しました。これは、先に報告された方法に基づき、わずかな修正を加えました。FFA誘導後、培養培地は同じFFA混合物と様々な濃度のGZRGを含む新鮮MEMに置き換えられ、さらに24時間の培養期間が設けられました。

細胞生存率アッセイ(CCK-8)
対数成長段階のHepG2細胞を収穫し、1 x 104 セルの密度で96ウェルプレートにシードしました。周辺井戸には蒸発を最小限に抑えるために100μLの無菌リン酸塩緩衝生塩水(PBS)が充填されました。準着を確保するために一晩の培養後、実験デザインに従って細胞を処理しました。処理後、各ウェルに10μLのCCK-8溶液を加え、プレートは37°Cで2時間インキュベートされました。 450 nmでの吸収はマイクロプレートリーダーを用いて測定されました。細胞生存率は次のように計算されました:

[(As - Ab) / (Ac - Ab)] × 100%

ここで、Asは試料の吸収、Acは対照(未処理セル)の吸収、Abはブランク(セルのないウェル)の吸収です。

HepG2細胞におけるプラスミドトランスフェクション
SIRT3過剰発現プラスミド(OV-SIRT3)と、3つの異なるSIRT3標的型の小型干渉RNAプラスミド(si-SIRT3-1#、si-SIRT3-2#、si-SIRT3-3#)、さらにネガティブコントロールのsiRNA(si-NC)がベンダーによって構築されました。細胞が50%〜60%のコンフルエンスに達した際にトランスフェクション試薬を用いてトランスフェクションを行いました。トランスフェクション複合体は無菌条件下で次のように調製されました:溶液Aは、プラスミドDNA1μgを還元血清培地250μLに希釈し、穏やかに混合して生成されました。溶液Bは、2〜3μLのトランスフェクション試薬を還元血清培地250μLに希釈し、その後室温で5分間渦を生まずに培養することで調製されました。2つの溶液を組み合わせ、ピペッティングで優しく混合し、室温で30分間培養してDNA脂質複合体を形成しました。トランスフェクションでは、手技の1時間前に培養培地を吸引し、PBSで細胞を洗浄し、還元血清培地(血清不使用かつ抗生物質不使用)を1mL追加しました。その後、トランスフェクション複合体500μLを各ウェルに滴下ずつ加え、均一性を確保するために培養プレートを優しく渦巻きました。細胞は37°Cで4〜6時間インキュベートされ、その後培地を完全な培地に置き換えて細胞毒性を軽減しました。その後、細胞をさらに24〜48時間培養してからさらなる解析を行いました。トランスフェクション効率は定量PCR(qPCR)で評価されました。全RNAを抽出し、逆転写してcDNAに変換し、SIRT3特異的プライマーを用いて18S rRNAを内部対照として増幅しました。相対的な発現レベルはΔΔCt法で決定され、これらの結果に基づき最も効果的なsiRNA構成要素が選定され、その後の実験に用いられました。

細胞内脂質蓄積のためのオイルレッドO染色
対数成長段階のHepG2細胞を24ウェルプレートに2 x 105 細胞の密度でシードし、250 μMオレイン酸および250 μMパルミット酸を含む高脂質培地で48時間誘導して脂質蓄積モデルを構築しました。処理後、細胞はPBSで洗浄し、10%ホルムアルデヒドで室温で10分間固定しました。蒸留水で洗浄し、60%イソプロパノールに短時間浸した後、細胞は新たに調製したオイルレッドO作業液(成分A1とA2を3:2の比率で混合して得られる)で10〜15分間染色しました。余分な染料は60%イソプロパノールで洗い、その後蒸留水で除去されました。核はメイヤー氏ヘマトキシリン(1.0 g/L)で1〜2分間カウンター染色されました。最終洗浄後、細胞はグリセロールゼラチンでマウントされ、200倍倍の光学顕微鏡で画像を撮影して脂質滴の定性評価を行いました。

HepG2細胞におけるインスリン抵抗性の誘導とグルコース定量
HepG2細胞は24ウェルプレートで2×105 細胞のシーディング密度で培養され、インスリン抵抗性の in vitro モデルを構築しました。治療24時間後、培養上清液を採取し、さらなる分析を行いました。細胞内グルコース測定のために、細胞懸流液を1000 x g で4°Cで10分間遠心分離しました。 上澄液は廃棄され、細胞ペレットは等張緩衝剤で1回または2回洗浄され、同じ条件下で遠心分離が行われました。その後、ペレットは0.2〜0.3mLの均質培地で均質化され、300Wプローブを用いた氷水浴で超音波破壊を行い、3〜5秒のパルス、続いて30秒間隔、3〜5回繰り返されました。得られた均質酸は、遠心分離を経ずに直接アッセイされました。培養上澄液および細胞均質液のグルコースレベルは、製造元の指示に従い標準化されたグルコースアッセイキットを用いて測定され、代謝反応の正確かつ再現性のある評価を確保しました。

細胞内トリグリセリド含有量の測定
HepG2細胞は1000 x g の遠心分離で10分間採取し、上澄液は廃棄されました。細胞ペレットは等張性リン酸バッファー(0.1 M、pH 7.0-7.4)で1回または2回洗浄され、その後同じ条件下で遠心分離が行われました。上清液を除去した後、ペレットは再懸浮し、0.2〜0.3 mLの絶対エタノールで均質化されました。ホモジネートは氷上で超音波破壊(300W、1回のバースト3〜5秒、30秒間隔、3〜5回繰り返す)を受けました。得られたホモジネートは、さらなる遠心分離を行わずに直接後続解析に使用されました。96ウェルプレートが、ブランクウェル、標準ウェル、サンプルウェルから設置されました。徹底的な混合後、プレートは37°Cで10分間培養され、マイクロプレートリーダーを用いて500 nmで吸収を測定しました。細胞サンプル中のトリグリセリド含有量は、グリセロール標準の連続希釈から導出された標準曲線に基づいて計算されました。

総コレステロール含有量の測定
HepG2細胞(5 x 106)は、氷上で超音波破壊により1 mLの抽出バッファーに溶解されました。ホモジネートは10,000 x g で4°Cで10分間遠心分離し、上澄液を即時分析のために採取しました。コレステロール標準液(50μmol/mL)を製備し、連続的に希釈して標準曲線(0.3125〜10μmol/mL)を生成しました。コレステロール検査キットに用意された試薬1、2、3を混合し、37°Cまで予温して作動するクロモジェニック溶液を準備しました。 サンプルまたは標準物質は作動溶液と混合され、37°Cで30分間インキュベートされ、500nmで吸収度が測定されました。コレステロール含有量は標準曲線に基づいて計算されました。

免疫蛍光染色
カバースリップ上で培養した細胞は氷で冷えたPBSで洗浄し、4%パラホルムアルデヒドで室温で15分間固定しました。PBS洗浄後、細胞は0.1%トリトンX-100で10分間透過し、4°Cで5%BSAで一晩ブロッキングしました。その後、細胞は一次抗SIRT3抗体(希釈1:500)と共に4°Cで一晩インキュベートされました。PBS洗浄後、細胞は蛍光結合の二次抗体(希釈1:2000)を室温暗房で1時間培養しました。核はDAPI(0.5 μg/mL)で10分間染色されました。カバースリップはフェード防止マウンティングメディウムを用いてガラススライドに取り付けられ、蛍光顕微鏡で観察されました。

RNA抽出と定量リアルタイムPCR(qRT-PCR)
RNA組織/細胞キットを用いて細胞から総RNAを抽出しました。ゲノムDNAは除去され、cDNAはgDNA RTキットを用いて合成されました。定量PCRはqPCRキットを用いてリアルタイムPCR検出システム上で実施されました。遺伝子特異的なプライマー配列は 表1に示されています。

ウェスタンブロット解析
肝臓組織からのタンパク質抽出には、約50〜200mgの組織が計量され、ペトリ皿でミンチカットされ、ホモジナイザーに移されました。タンパク質分解を防ぐために、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を補足した予冷却溶解バッファー(RIPAバッファー)が添加されました。組織の完全な破壊を確保するために氷上で徹底的に均質化を行い、ホモジネートは遠心分離機チューブに移され、タンパク質溶解を促進するために氷上で30分間培養されました。その後、ホモジネートは4°C、12,000 x g で10〜30分間遠心分離され、上澄液はペレットによる汚染を避けるように全タンパク質抽出物として慎重に回収されました。細胞タンパク質抽出のために、予冷却された溶解バッファー(トリトンX-100およびプロテアーゼ阻害剤を含むRIPAバッファー)を細胞に加え、その後15〜30分間氷上で培養して完全な溶解を実現しました。細胞破壊は、細胞スクレーパーによる繰り返しのこすり上げや激しいピペッティングによって確実に行われました。溶解液は遠心分離機チューブに移され、4°C、14,000 x g で30分間遠心分離され、上澄液は総タンパク質抽出物として採取されました。タンパク質濃度はBCAタンパク質アッセイキットを用いて定量化され、アリコートは将来のウェスタンブロット分析のために-80°Cで保存されるか、直接サンプル調製に使用されました。タンパク質サンプルは100°Cのレームリバッファーで10分間変性され、SDS-PAGEで分離され、PVDF膜に移されました。膜は室温で5%無脂肪ミルクで2時間封じ、その後4°Cで特異的一次抗体で一晩培養しました。 洗浄後、膜はHRP結合二次抗体で室温で1時間インキュベートされました。タンパク質バンドは、強化化学発光(ECL)基質を用いて可視化されました。化学発光信号は捕捉され、バンド強度はImageJソフトウェアを用いた密度分析で定量されました。生のウエスタンブロットは 補足ファイル1に掲載されています。

統計解析
すべてのデータは平均±標準誤差(SEM)として表されます。2つのグループ間の統計比較は、ペアなしの学生のt検定を用いて実施されました。3群以上の比較には一方向分散解析(ANOVA)を適用し、その後多重比較にはTukeyの事後検定を用いました。すべての統計解析はGraphPad Prismソフトウェア(バージョン9.5.0)を使用して実施されました。p値が0.05未満であれば統計的に有意とされました。

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結果

GZRGはHFD誘発性T2DMマウスにおけるインスリン抵抗性と糖新生を改善しました
インスリン抵抗性、高血糖、脂質異常を特徴とするHFD誘発性2型糖尿病(T2DM)マウスモデルは、疾患の病因性の調査や治療的介入の評価に広く用いられています。本研究では、Gzrgの有効性と基礎メカニズムを評価するために、C57BL/6Jマウスを対象にHFD誘発T2DMモデルを確立しました。

対照群と比較して、HFD給餌マウスは体重および肝指数に有意な増加を示し、これらはGZRG処理によって改善されました(図1A,B)。GZRGはまた、FBG(図1C)およびHbA1cのレベルを効果的に低下させ、血糖コントロールの改善を示しました(図1D)。さらに、GZRGはHFDによるインスリン値上昇(

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ディスカッション

本研究は、GZRGが主にSIRT3-MPC1-PC/PDH軸の調節による肝腫瘍新生の抑制を通じて、 in vivo および in vitro モデルの両方で、T2DMの抗高血糖およびインスリン感作効果を有意に示していることを示しています。実験データによると、GZRG投与はHFD誘発性糖尿病マウスにおいて空腹時の高血糖を緩和し、血糖およびインスリン耐性を改善し、脂質恒常性を回復し、肝ステアトーシスを減少させました。並行して、GZRG治療により、FFA誘導インスリン抵抗性HepG2細胞におけるグルコース利用促進、グリコーゲン合成の増加、脂質蓄積の緩和が見られました。これらの発見は、GZRGが肝臓のグルコース分泌を調節するSIRT3依存性ミトコンドリア経路を標的にすることで代謝機能障害を緩和することを示唆しています。

この研究からの重要な機構的洞察は、GZRGがSIRT3発現およびMPC1およびPCを含む下流標的を大幅にダウンレギュレーションし、PDH-E2をアップレギュレーションした...

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開示事項

すべての著者は、本論文で報告された研究に影響を与えた可能性のある既知の競合する財政的利害関係や個人的な関係はないと述べています。

謝辞

この研究は、吉林省科学技術開発計画(助成金番号20210101199、JC、YDZJ202301ZYTS454)によって資金提供されました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
FastKing gDNA Dispelling RT SuperMix   天源バイオテック有限公司(中国)およびnbsp;KR118-02
グルコース-6-ホスファターゼ(G6Pase)抗体武漢霊傑社バイオテクノロジー有限公司(中国)LJS-D-12610
グリセラルデヒド-3-リン酸脱水素酵素(GAPDH)抗体武漢霊傑社バイオテクノロジー有限公司(中国)LJS-T-0004
グリコシル化ヘモグロビンELISAキット   江蘇美面工業有限公司(中国)。MM-0159M2
GZRG長春中医薬大学付属病院(中国、吉林市)26210483
高密度リポタンパク質(HDL)コレステロールアッセイキット南京建成生物工学研究所(中国)A112-1-1
インスリンELISAキット江蘇美面工業有限公司(中国)。MM-0579M2
リポフェクタミン2000 インビトロジェン、アメリカ合衆国11668-019
低密度リポタンパク質(LDL)コレステロールアッセイキット南京建成生物工学研究所(中国)A113-1-1
血糖測定キット南京建成生物工学研究所(中国)F006-1-1
ミトコンドリアピルビン酸キャリア1(MPC1)抗体武漢霊傑社バイオテクノロジー有限公司(中国)LJS-D-3852
非エステル化脂肪酸(NEFA)アッセイキット南京建成生物工学研究所(中国)A042-2-1
PC抗体武漢霊傑社バイオテクノロジー有限公司(中国)LJS-D-4364
PDH-E2抗体武漢霊傑社バイオテクノロジー有限公司(中国)LJS-D-14046
ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ1(PCK1)抗体武漢霊傑社バイオテクノロジー有限公司(中国)LJS-D-6770
ピルビン酸カルボキシラーゼ(PC)ELISAキット 武漢霊傑社バイオテクノロジー有限公司(中国)LJS-160408H
ピルビン酸脱水素酵素(PDH)ELISAキットおよびnbsp; 武漢霊傑社バイオテクノロジー有限公司(中国)LJS-160300H
RNAイージーファスト組織/細胞キット  天源バイオテック有限公司(中国)およびnbsp;DP451
SIRT3抗体武漢霊傑社バイオテクノロジー有限公司(中国)LJS-A-5135
タレント:SYBR Green qPCR PreMix  天源バイオテック有限公司(中国)およびnbsp;FP209-02
総コレステロール(TC)アッセイキット南京建成生物工学研究所(中国)A110-1-1
トリグリセリド(TG)アッセイキット南京建成生物工学研究所(中国)A111-1-1

参考文献

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