気管支細胞学およびメタゲノムシーケンスによるがん治療関連および感染性肺損傷の区別

サマリー

ここでは、気管支鏡誘導による統合的収集、細胞学的解析、メタゲノム次世代シーケンシング(mNGS)を通じて気管支胞洗浄液(BALF)を評価するプロトコルを提示します。この包括的なワークフローは、がん治療に関連する肺損傷と肺感染症を正確に区別し、正確かつタイムリーな臨床判断を可能にします。

要約

がん治療関連肺損傷(CTLI)患者は、非特異的な呼吸器症状や感染性肺炎や腫瘍進行に非常に似た放射線学的変化を呈し、確定診断に大きな課題をもたらします。従来の診断プロセスは主に血液バイオマーカーや標準的な微生物培養を通じて評価されますが、明確な診断はできず、時間がかかりすぎます。ここでは、気管支肺胞洗浄液(BALF)細胞学的解析とメタゲノム次世代シーケンシング(mNGS)を組み合わせてCTLIを診断する包括的なプロトコルを提示します。手続きのワークフローは主に3つの段階で構成されています。まず、高品質なBALFサンプルを得るために標準化された気管支鏡検査が行われます。次に、得られたBALFサンプルの細胞学的解析を行うことで、肺の微小環境のスナップショットが得られます。これにより炎症の特徴の特定や悪性細胞のスクリーニングが可能となり、腫瘍の進行を排除できます。最後に、mNGSは活動的な感染病因の特定または除外に利用されます。この高度なゲノム技術は、迅速かつ高感度かつ偏りのない病原体検出を実現し、伝統的な文化の限界を見事に克服します。この方法を用いた代表的な結果は、免疫性肺炎と活動性肺感染症や腫瘍進行を効果的に区別できることを示しています。従来の診断法と比較して、このプロトコルはCTLIを感染性病因や隠匿悪性腫瘍と迅速かつ正確に区別できる利点があります。最終的に、この標準化されたワークフローは臨床診断の明確化、重要な治療の意思決定の指針、患者の転後の向上につながります。

概要

免疫チェックポイント阻害薬や標的治療などの抗腫瘍治療の進歩により、患者の生存率は大幅に向上しましたが、同時に非感染性肺毒性、いわゆるがん治療関連の肺損傷(CTLI)の発生率も増加させました。1,2,3,4,5,6,7 .特に、チェックポイント阻害性肺炎(CIP)は致命的な免疫関連有害事象として浮上しており、全体の発生率は2〜19%、死亡率は最大35^%に達します^8,9,10。CTLIの診断は大きな臨床的課題^{です。なぜ}なら、その非特異的な呼吸器症状や放射線学的症状(例えば、すりすんだガラスの混血、固結、網様状の混濁など)は、感染性肺炎や腫瘍進行の症状に非常によく似ているからです。

現在、CTLIの診断は他の病因を慎重に除外して決定^{する必要があります。}従来の診断ワークフローは血液バイオマーカーや標準的な微生物培養に大きく依存しており、これらは時間がかかり、しばしば確定診断に失敗します。16,17,18,19,20,21,22,23。外科的肺生検は明確な組織病理学的証拠を提供しますが、その侵襲性から重症のがん患者には適していません。したがって、効果的で低侵襲の診断アプローチが極めて必要とされています。臨床現場では、ここで述べたプロトコルは、過去に抗腫瘍治療(例:免疫療法や標的治療)を受けている、または現在受けているがん患者に適用され、新たな呼吸器症状や肺の画像診断の変化を呈するべきです。特に、CTLIが臨床的に疑われている場合、標準的な非侵襲的検査では明確な診断が得られず、患者が侵襲的な外科的検査に耐えられない場合に推奨されます。

気管支鏡検査と気管支肺泡洗浄(BAL)の組み合わせは、下気道の低侵襲「液体生検」として機能^します。BAL流体(BALF)細胞解析とメタゲノム次世代シーケンシング(mNGS)を統合することで、このアプローチは既存の診断ワークフローを大幅に改善します。第一に、BALF細胞学は肺微小環境の直接的なスナップショットを提供します。リンパ球増殖やCIPにおける逆CD4/CD8比率などの特徴的な炎症特徴²⁵を識別し、同時に悪性細胞のスクリーニングを行い腫瘍進行を除外します^。第二に、mNGSは迅速かつ高感度かつ偏りのない病原体検出を実現し、特に細かい細菌や非定型病原体に対する従来の培養の低い検出率や遅延を克服します(^{31,32,33,34,35})。これらのモダリティの組み合わせは、混合感染症の検出を大幅に向上させ、正確な治療を導き、患者の死亡率を大幅に減少させることが示されています^4,5。

この臨床的可能性にもかかわらず、CTLIの文脈における包括的なBALF収集および分析のための標準化されたプロトコルは現時点で存在しません。ここでは、細胞学的評価とmNGSを明示的に組み合わせた、気管支鏡検査によるBALFの取得および処理のための標準化されたプロトコルを紹介します。このワークフローの方法論的な新規性は、二本柱の診断能力にあります。細胞学を活用して免疫微小環境をマッピングし悪性腫瘍を排除し、mNGSを用いて活動性感染を確定的に除外します。従来の診断法と比較して、この統合プロトコルはCTLIを感染性病因や隠匿腫瘍進行から迅速かつ正確に区別するという明確な利点を提供します。最終的に、この標準化されたワークフローは診断のタイムラインを加速し、タイムリーで的を絞った臨床介入を導きます (図1)。

プロトコル

このプロトコルはヘルシンキ宣言の原則に準拠しており、当病院の機関審査委員会によって承認されました。処置前に全参加者からインフォームドコンセントが取得されました。

1. 事前準備

1. 患者評価(気管支鏡検査から1週間以内)
   1. 侵襲的処置の安全性を確保するため、完全な血液検査数と凝固プロファイルを含む最近の検査結果を取得してください (補足ファイル1)。
   2. 12誘導心電図を行ってください。
   3. バイタルサインを評価し、血行動態の安定性を確保しましょう。
   4. 患者の安静時酸素飽和度を室内空気で測定し、肺機能を評価します。
      注意:SpO₂が低い場合や呼吸機能障害がある場合は、基礎的なPaO₂/PaCO₂の動脈血ガス解析を検討してください。
   5. すべての禁忌をスクリーニングしてください。
   6. 誤嚥リスクを減らすために、検査前は少なくとも6時間の断食と2時間の水の摂取控えを指示してください。
   7. 処置直前に口腔および鼻の吸引および洗浄を行い、上気道の汚染を最小限に抑えてください。
2. 装備と人員の準備
   1. 必要な気管支鏡装置とモニタリング機器をすべて準備してください。患者の気道解剖学に基づいて適切な気管支鏡のサイズを選択します。気管支鏡の吸引機能を確認してください。
      注意:呼吸道の合併症を管理するため、補助酸素供給装置や吸引装置を含む緊急蘇生機器を処置室にすぐに備えてください。標準的な訓練を受けた認定気管支鏡専門医であれば、専門的な資格なしでこの処置を独立して行うことができます。
   2. 洗浄用の無菌生理用塩水(0.9% NaCl)を37°Cまで温めてください。
   3. 温めた無菌生理食塩水を100〜150mLを複数の20mLシリンジに抽出し、迅速な滴入を容易にします。
3. 患者の位置づけとモニタリングのセットアップ
   1. 患者を仰向けに気管支鏡検査台に置いてください。
   2. 手術開始前に患者に継続的なモニタリング機器を設置してください。
      1. 心電図(ECG)を直接患者の胸部に照射し、継続的な心活動モニタリングを行います。
      2. パルスオキシメータープローブを患者の指に接続し、血中酸素飽和度と脈拍を継続的にモニタリングします。
      3. 患者の上腕に非侵襲的な血圧カフを装着し、静脈血圧を継続的に検出します。
4. 酸素サポート装置の設置と術後の離乳
   1. 患者の基礎呼吸状態に基づいて適切な酸素サポート装置を準備・設定してください。この構成は気管支鏡検査を開始する前に完了してください。
   2. 高流量鼻カニューレ(HFNC)セットアップ
      1. _SpO2≥90%が室空気で、高炭酸血症がない患者にはHFNCシステムを選択してください。カニューレを患者に繋ぎ、初期ガス流量を≥60 L/min、FiO₂ 1.0に設定します。手順中は_FiO2を継続的に調整し、_SpO2≥90%に保ちます。
   3. 非侵襲的人工呼吸(NIV)患者への移行戦略
      1. 気管支鏡挿入直前にNIVマスクを外し、患者をHFNCシステムに移行させます。HFNCガス流量を≥60 L/minに設定し、FiO₂ は1.0にします。マスクを外している間は能動的な気道吸引を行い、分泌物をクリアし気道通位を最適化します。
      2. NIVからHFNCへの一時的な移行期間中の不飽和度を注意深く監視してください。SpO₂が90%を下回り、吸引や最大HFNC設定に抵抗しない場合は、直ちに気管支鏡検査を中止してください。NIVマスクを直ちに再装着して陽圧を回復するか、呼吸状態が悪化した場合は侵襲的な気管挿管へとエスカレートしてください。
   4. 侵襲的機械換気(IMV)装置
      1. 潮汐量を予測体重6–8 mL/kg、FiO₂1.0、正呼気圧(PEEP)5–8 cmH₂O、呼吸数12–16 m/minに設定します。気管支鏡は既存の気管内チューブから直接挿入します。
   5. 気管支肺胞洗浄(BAL)終了後は継続的なバイタルサインモニタリングを継続してください。_SpO2 を維持するための補助酸素を92%から96%(慢性高炭酸血症患者では88%から92%)維持します。
   6. 酸素サポートを減らす前に、患者が以下の基準をすべて満たしていることを確認してください:鎮静からの完全な覚醒、保護気道反射の回復、血行動態の安定性、活動性出血や重度の気管支痙縮の不在。
   7. HFNCの離脱では、まず濃度を下げ、その後流量を下げます。FiO₂は5%から10%ずつ減らし、≤40%まで減らします。その後、流量を5%から10%ずつ減らします。患者が目標SpO₂をFiO₂≤35%、流量20 L/min≤維持した場合、HFNCを完全に中止してください。
   8. NIVの離脱では、低酸素血症が改善しバイタルサインが安定していることを確認し、その後、以下の2つの方法のいずれかを用いてください。
      1. 調整ごとにIPAPを2〜3 cmH₂O減らし、PEEPを4〜5 cmH₂Oに減らし、FiO₂を≤40%に減らします。
      2. 断続的離脱については、患者をHFNCに移行させて自然呼吸の持続時間を徐々に長くします。患者が頻呼吸(>30回/分)、頻脈(>140拍/分)、呼吸筋疲労、精神状態の変化、またはSpO₂<90%を示す場合は、直ちに完全なNIVサポートを再開してください。
   9. IMVの離脱には、自然呼吸試験やカフ漏れ検査を行うと良いでしょう。患者が試験に合格し、十分な自然咳の強さを示し、気道分泌物が最小限に抑えられた場合のみ、挿管を進めてください。
5. 鎮静と麻酔
   1. 2%リドカイン15mLを鼻粘膜と口咽頭に2〜5回に分けて注射します。
   2. 気管支鏡の作業チャネルを通じて2%リドカイン10mLを分割投与します。これらの投与量を段階的に投与しながら、気管支鏡を気道内に進めて気管粘膜、カリナ、気管支を覆いましょう。
      注:局所用リドカインの絶対最大安全用量は不確定です。毒性は通常、血清濃度が5 μg/mLを超えると発生しますが、低濃度では主観的な副作用が現れることがあります。投与された麻酔の総量を注意深く記録してください。
   3. 患者の好み、不安度、期待される手技耐性に応じて全身鎮静を施し、十分な麻酔を確保し、患者の快適さを最大化し、咳を減らします。ミダゾラムは2〜2.5mgをゆっくりとした静脈注射で投与するか、虚弱または高^{齢者の場合は}0.5〜1mgに減量してください。
   4. SpO₂、心電図、非侵襲的血圧(NIBP)は^{継続的に採用されています}。
      注意:全身鎮静は難治性低酸素血症、気道虚脱、緊急気管挿管のリスクを大幅に増加させます。手術中は患者を注意深く観察してください。

2. BAL手続き

注意:BALFの収集手順は、標準プロトコルおよび臨床実践ガイドラインに厳密に従って実施してください。

1. 標的肺セグメントの選択 (図2)
   1. 手術前に患者の最新の高解像度胸部断層撮影(HRCT)スキャンを確認し、肺疾患の正確な解剖学的分布を把握してください。
   2. HRCTスキャンで特定された特定の疾患分布に基づいて、BALの対象肺セグメントを選択します。
   3. 気管支鏡は、最も放射線的に影響を受けたセグメントか、局所的または著しく非対称な疾患の進行が最も速いセグメントに洗浄を行うよう指示します。
   4. 気管支鏡は、広まっているか対称性疾患の場合は右中葉または左上葉の舌頭のいずれかを洗浄します。これらの解剖部位は通常十分な体液の回流をもたらします。
2. プリラバージュとサンプル廃棄
   1. 気管支鏡を通して20〜30mLの温まった生理食塩水をくさび形の部分に注入します。20〜30秒待ってください。
   2. 液体を吸引するために、負圧50〜100 mmHgの優しい吸引を加えます。この最初のアリコートをトラップに集め、粘液や気管支の破片が含まれている可能性があるため、分析に出さずに廃棄してください。
3. 主な洗浄手順
   1. 0.9%の生理食塩水を含む無菌注射器を気管支鏡の作業チャネルポートにしっかり接続します。
   2. 作業チャネルから生理食塩水20mLを3〜5秒間注射します。注射後すぐに5〜10秒間停止し、液体が完全に分散して重力によって遠位歯槽に沈殿するのを待ちます。
   3. 優しく吸引して注入された液体を滅菌の集水トラップに回収します。気道の崩壊や粘膜の損傷を防ぐために、吸引圧を100 mmHg未満に保ちましょう。
   4. 下気道サンプルが十分かつ代表的なものになるまで、注入、停止、吸引のシーケンスを厳密に繰り返します。
      注意:処置中は患者のバイタルサイン、酸素飽和度、快適さを継続的に監視してください。激しい咳や酸素飽和度低下が起きた場合は直ちに処置を中断し、患者が安定してから再開してください。
4. 流体回収技術
   1. 気道の崩壊を防ぐために、低圧(≤100 mmHg)を使いましょう。
   2. 連続吸引の代わりに「パルス吸引」技術を用いてください。吸引チューブを断続的に閉塞し、解放して空気を混ぜ、液体を動員し、気管支がスコープに押し付けられるのを防ぎます。
   3. 少なくとも40〜60 mLのBALFを抽出することを目標にします。
      注意:患者が合併症(例:気管支痙攣、耐え難い低酸素血症)を発症した場合、たとえ全容量が回復していなくても洗浄を中止してください。BAL挿入と吸引の全手術時間を2〜3分以内に抑え、低酸素症リスクを最小限に抑えてください。
5. 洗剤後のケア
   1. BALを完了したら気管支鏡を慎重に取り出してください。
   2. 中央気道から残った分泌物を吸引します。
      注意:患者が回復が安定するまで、HFNCまたはNIVの支援を利用し続けてください。出血や気胸などの術後の合併症を患者に監視してください。

3. サンプル取り扱いと品質管理

1. BALFの測定、輸送、初期評価
   1. 検査中に注入された液体の量と、戻った体積を記録してください。
   2. 以下の式で回収率を計算します:
      回復率 = (回収した体量 / 注入された体量) × 100%
      注:≥30%の回収率は一般的に良好なBALFサンプルとみなされます。
   3. 集めたBALFはすぐに氷に保管してください。BALFを速やかに研究所へ輸送しろ。
      注意:ヒトBALFサンプルは感染力を持つ可能性があります。すべてのサンプルは適切な標準的な注意をもって取り扱いましょう。
   4. 処理前にBALF試料のマクロな色と濁度を観察し記録してください。
      注:透明または淡い黄色の液体で濁りが目に見えないのは、感染性のない状態に典型的です。濁ったまたは乳白色の外観は肺肺胞タンパク症(PAP)と関連しています³⁸。膿性液体は細菌感染の可能性があることを示します。血液を帯びた液体は出血またはびまいぶた肺胞出血の可能性があること^{を示します。}
2. 細胞生存可能性評価
   1. BALFを無菌生理食塩水で約1×10⁶ cells/mLの濃度に希釈します。
   2. 希釈したBALFをトライパンブルーと1:1の体積比で混ぜると、20μLの反応混合物が得られます。
      注意:トリパンブルーは有毒な化学物質であり、発がん性の可能性があると考えられています。
   3. 反応混合物を室温(約25°C)で3分間培養します。
   4. 混合物を血球計に置きます。低倍率の光顕微鏡で細胞を調べます。
   5. 細胞の生存可能性を体系的に判断するために最低200個の細胞を数えます。
      注:生存可能な細胞は染色されず、透明で形態的にも完全なままですが、生存できない細胞は青色染料を取り込みます。信頼できる下流細胞計数を確保するためには、初期細胞生存率が>90%〜95%であることが必要です。
3. アリコート分布
   1. BALFを洗浄作業中に異なる分析を行うための指定されたチューブに分けてください。
   2. チューブ1を最初の返還アリコートのために「廃棄」として指定してください。
   3. チューブ2を微生物学用に指定し、病原体解析(例:mNGS)にはBALFを10〜20 mL割り当てます。
      注意:臨床現場では、定期的な細菌グラム染色/培養、真菌染色/培養、酸断食菌(AFB)塗抹標針、PCRを同時に実施してください。
   4. チューブ3は細胞検査用に指定し、全細胞数および差異細胞数のために少なくとも10 mLを予約してください。
   5. チューブ4をオプションの予備として指定し、残った液体は(短期は4°C、長期は-80°C)を追加の試験用に保管してください。
      注意:すぐに検査が開始できない場合は、mNGSサンプルを-80°Cで直ちに冷凍してください。細胞学サンプルの処理は新鮮です。遅延が予想される場合は、細胞形態を保存するために4°Cで最大24時間冷蔵します。

4. BALFの実験室処理

1. 総細胞数
   1. チューブを逆さにしてBALFを優しく混ぜ、セルを再懸浮させます。
   2. サンプルに巨視的な粘液栓やゴミが含まれている場合は、適切な量の無菌生理食塩水でBALFを希釈してください。
   3. ろ過前に滅菌医療用ガーゼを無菌生理食塩水で十分に湿らせてください。希釈したサンプルを、事前に湿らせた滅菌医療用ガーゼを2層に通します。
   4. ろ過液を滅菌の収集管に集めてください。血液学分析装置を使って核細胞の総数を数えます。
      注:上皮細胞の汚染率が低い(細胞の<5%)と赤血球の割合がごくわずか(<10%)であることは、高品質な肺胞サンプルを示しています。
2. 細胞数の差分
   1. よく混合されたBALFサンプル1 mLを1.5 mLのマイクロチューブに移します。マイクロチューブを211× g で5分間遠心分離して細胞を濃縮します。
   2. 上清液を除去し、マイクロチューブ内に正確に50〜100μLの液体を残します。細胞ペレットを残った上清液にしっかりと再懸浮させます。
   3. 再懸濁したセル懸濁液を10〜20μLピペットで、すりつき縁付近のきれいなガラススライドの表面に置きます。
   4. 2枚目のクリーンなガラススライドを最初のスライドに対して30〜45度の角度で持ってください。2枚目のスライドを優しくくさび塗りで押し出し、薄く均一な細胞塗りつけを作ります。
   5. ステップ4.2.3から4.2.4を繰り返し、2〜3枚の同一スライドを準備します。
   6. 塗りついたスライドは室温で完全に自然乾燥させます。
   7. スライドはライト・ギームサ法で染色します。
   8. 高倍率の油浸け物レンズ(1,000×倍率)を用いて、光学顕微鏡で染色スライドを観察します。
   9. 少なくとも400個の細胞を特定し分類して、細胞数の差異を決定してください。
      注意:悪性腫瘍の臨床疑いが高いBALF標本は4°Cで維持し、サンプル採取後2時間以内に中央病理検査室に標準化された細胞遠心分離のために提出してください。
3. mNGSパイプライン
   1. 気管支肺胞洗浄液(BALF)サンプルは65°Cで30分間培養して不活化します。
   2. 不活化BALFサンプル0.5 mLを、0.5 mmガラスビーズ1gを含む1.5 mLのマイクロ遠心分離機チューブに移します。
   3. マイクロ遠心分離管をボルテックスミキサーの水平プラットフォームに固定します。混合物を2,800〜3,200 rpmで30分間攪拌し、機械的な微生物細胞壁の破壊とその後のDNA放出を促進します。
   4. チューブを短時間遠心分離してビーズを沈殿させ、その後0.3 mLの上清液を新しい1.5 mLのマイクロ遠心分離機チューブに慎重に移します。
   5. 製造元の指示に厳守し、マイクロボリュームDNA抽出キットを用いて上清液から全核酸を抽出します。
   6. 抽出したDNAの濃度を蛍光計で測定します。
   7. [間合い]抽出したDNAは短期使用時は-20°C、ライブラリー準備がすぐに行われない場合は長期保存時は-80°Cで保存してください。
   8. 抽出したDNAから超低入力ライブラリーを用いてメタゲノミクスライブラリを構築します。
   9. 適切な断片サイズと十分な濃度を確保するために、構築されたライブラリを点検してください。
   10. 適格ライブラリを高スループットのシーケンスプラットフォーム上でシーケンスします。
4. シーケンスデータの解析
   1. シーケンス処理ソフトウェアを用いて、低品質のリードやアダプターシーケンスを生のシーケンスデータから除去します。
   2. 捨てられは35塩基対(bp)未満の長さの読み取り値、複雑度が低い読み取り値、およびPhred品質スコア(Qスコア)が20未満の読み取り。
   3. 高品質リードをヒト参照ゲノム(バージョンhg38)にアラインメントし、バローズ・ウィーラーアラインメントアルゴリズムを用いてヒトDNA配列を特定します。
   4. 非宿主の配列データを分離するために、アライントされたヒト宿主配列を破棄します。
   5. 残りの非宿主シーケンシングリードを分類基準データベースと照合し、種レベルで微生物情報を得ます。国立バイオテクノロジー情報センター(NCBI)の参照配列データベースなど、公開されている微生物ゲノムデータベースに基づいてデータベースを構築します。包括的な病原体データ(例:25,863の病原体、うち12,142種の細菌、2,680種の真菌、10,061種類のウイルス、654種の寄生虫、206種のマイコプラズマ/クラミジアを含む)を必ず含めてください。
   6. 同じ抽出、ライブラリ調製、バイオインフォマティクス解析手順で処理し、陰(「テンプレートなし」対照、NTC)と陽性対照を確立します。
   7. 診断評価のために厳密にマッピングされたリード数(SMRN)とゲノムカバレッジを調べます。
      注:SMRNは種レベルで微生物と正確に一致する配列の数を示します。
   8. 細菌、真菌、マイコプラズマ、またはクラミジアのmNGS結果は、その微生物がNTCで検出されず、かつ同属微生物の中でゲノムカバレッジがトップ10に入る場合、またはSMRN_sampleとSMRN_NTCの比率が>10(SMRN_NTC ≠0の場合)であれば陽性と分類します。
   9. SMRN_sampleが陽性反応の最低基準を満たしているか確認してください:細菌、真菌、マイコプラズマ、クラミジアは≥3;寄生虫は≥100;そして結 核菌の≥1です。
   10. ウイルスのmNGS結果は、ウイルスがNTCで検出されない場合、またはSMRN_sampleとSMRN_NTCの比率が>5(SMRN_NTC ≠0の場合)であれば陽性と分類します。
   11. ウイルスのSMRN_sampleが≥1であることを確認しましょう。
   12. 候補病原体のリストと、そのリード数や相対的な存在比をまとめてください。
   13. バイオインフォマティクスのパイプラインで特定された抗生物質耐性遺伝子や病原性因子を記録してください。
   14. リード数、対照群との統計的比較、臨床的関連性を組み合わせて有意なヒットを定義します。
   15. 特定された各病原体が臨床状況を説明できるかどうかを評価します。

結果

上記の標準化されたプロトコルに従うことで、臨床医は高品質なBALFサンプルを再現性的に取得し、細胞解析およびゲノム解析の両方を活用してCTLIをその模倣株と区別することができます。以下に、私たちのケースの代表的な結果を示し、典型的な結果を示します。68歳の女性で、ステージIVの分化不良肺がん(右胸膜領域原発腫瘍)を用いてペムブロリズマブ免疫療法を受けており、BALF細胞学+mNGSアプローチを示すために紹介されています (図1)。彼女はペムブロリズマブと併用化学療法を6回受け、その後1回の維持療法ペムブロリズマブを受けました。7周期目から3週間後、彼女は乾いた咳と進行性の呼吸困難を発症しました。検査では、発熱(T: 36.6°C)であったが低酸素状態(SpO₂:室温86%、酸素補助で93%に改善)でした。検査では炎症マーカーの上昇が認められました(白血球:11.3 × 10⁹/L、好中球優勢;C反...

ディスカッション

現在のがん治療の時代において、免疫チェックポイント阻害剤(ICI)による治療関連の臓器損傷は依然として主要な臨床的懸念であり、治療の進行を妨げたり、生命を脅かすことさえあります^3,4。ICI誘発性免疫関連有害事象(irAEs)の中で、肺炎は致死的な転帰の主な原因として注目を集め^ており、ICI治療患者のirAE関連死亡の79%を占めています⁴⁹。したがって、CTLIを特定し、他の疾患と区別することは腫瘍学において極めて臨床的に重要です。BALF細胞学とmNGSを組み合わせた当プロトコルは、CTLI疑い患者の診断評価を大幅に向上させ、重要な臨床ニーズを満たしています。このアプローチは、気管支鏡検査を行わない従来の診断ワークフローや経験的治療に比べて大きな利点を提供します。

当プロトコルはBALF細胞学とmNG...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
2%リドカイン	湖南Kelun	該当なし	気道粘膜のための局所麻酔。
0.5mmガラスビーズ	シグマ	該当なし	微生物の機械的な細胞壁破壊に使用されます。
BF-260電子気管支鏡	オリンポス	該当なし	気管支鏡は肺胞洗浄液を採取するために使用されます。
バローズ・ウィーラー・アラインメント	オープンソース	0.7.17(RRID:SCR_010910)	配列をヒトゲノムにマッピングするアルゴリズム。
高流量加湿酸素療法装置	BMCメディカル	該当なし	自然呼吸の患者には、特定の流量で加熱・加湿された呼吸ガスを提供します。
ボルテックスミキサー	科学的および注。産業	該当なし	科学産業
ミダゾラム	江蘇恩華	該当なし	患者の快適さのための全身鎮静剤。
Nextseq 550プラットフォーム	イルミナ	該当なし	BALFにおけるゲノムの配列決定のための遺伝子配列
QIAseq ウルトラロー入力ライブラリキット	天恩	該当なし	メタゲノミックライブラリ構築キット
キュービット4.0	サーモフィッシャー・サイエンティフィック	該当なし	BALF核酸含有量検出用の計測装置
TIANamp マイクロDNAキット DP316	天恩	該当なし	BALFから総核酸を抽出するためのDNA抽出キット
トリパンブルー	バイオシャープ	該当なし	細胞の生存可能性評価に使われる染料。
水浴	ジョーン	該当なし	65 & CでのBALF試料不活化に使用されます。
ライト・ギームサ染色	元母	該当なし	差別細胞染色に使用されます。
XN-9000 血液学分析装置	シスメックス	SN-13699	BALFサンプルから核化細胞数を計数する血液学分析装置