Name: 慢性のためのマイクロドライブアレイ in vivoで録音：四極管アセンブリ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 19 s
Description: 学ぶテトロード製作とマイクロドライブアレイ組み立てによるラットの慢性in vivo電気生理学的記録法。高解像度神経活動モニタリングのための実験手法を解説します。

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我々は、ビデオに示されている自動、電動テトロードツイスター装置の彼の設計と建設じゅんfor山本に感謝します。さらに、我々はマイクロドライブやラボでのテトロードの技術開発への貢献のためにすべての過去および現在のウィルソンの研究室のメンバーに感謝します。

1。 tetrodesの作製<ol><li>長さ50センチメートルを取得して、1つ四極管の建設を開始、12.5ミクロンの直径のコアと絶縁、NI -クロム線をポリイミド。半分に線を折る。それらがくっつきようにペアに沿って指を実行します。ワイヤのペアがその全長にわたって良好な接触を持っていることを確認してください。 </li><li>一緒に両端を保持することによって再びペアを折る。一端に形成されるループがねじれていないことを確認してください。 4つのヒントが合うように非ループの端の4本の線をカット。 </li><li>次のステップでは、修正されたワニ口クリップ、電動回転装置、旋回装置上の水平バーが必要になります。ワニ口クリップを接着することにより、クリップのベースにプラスチック製のバーが変更されます。ワイヤの先端が露出している場合には、修正されたワニ口クリップと一緒に4本の線をクランプする。水平バーの上にワイヤーのループをハングアップする。電動ステージにワニ口クリップを置きます。 </li><li>約3分かけてワイヤの束〜40カウンタークロックワイズねじれが続く80クロック単位でひねりを適用します。これらのパラメータは、必要に応じて変化させることができる。 </li><li>テトロードのねじれが完了すると、中低フローを使用して、ヒートガン（420 ° Cまたは790 ° F）で3つの異なる形から加熱して一緒にワイヤーを融合する。それぞれの角度の場合、約5秒間の配線から2cmの距離で、電線束が分割下記1〜2センチメートルを始めるヒートガンを駆け降りるとまで。高温で完全に断熱材を溶融し、短絡につながるとして、十分に注意してください。 </li><li>今すぐワイヤが一緒に融合していることを、そっと四極管の緊張を緩和するために、ワニ口クリップを持ち上げて、ねじれ装置からテトロードを削除し、ワニ口クリップの近くに四極管をカット。もう一方の端で、同じ長さのワイヤの4つの非結合ストランドが存在するようなループをカット。 </li><li>次に、柔らかい先端がピンセットで線を曲げることにより上部の個々のストランドを分離する。 </li><li>テトロードは現在のマイクロドライブの配列にロードするための準備ができています。 21から25以上のtetrodesを作成し、それがテトロードのロードプロセスのための時間になるまで、埃のないボックスに格納します。 </li></ol> 2。マイクロドライブアレイにtetrodesとアース線をロード<ol><li>続行するには、完全なマイクロドライブアレイが必要になります。あなたがまだ一つを構築していない場合、ビデオを参照してください&quot;慢性的なin vivoでの録音のためのマイクロドライブアレイ：。ドライブの製造&quot;私たちの設計計画では、四極管は、コネクタハードウェアの一端に装着され、電極チップは、マイクロドライブアレイのベースの下に延びるように、マイクロドライブにポリイミドキャリアの管を通って実行されます。 </li><li>開始する前に、一端にコネクタボードに取り付けることができる、そしてもう一方の端に、panaviseによってクランプすることができるドライブのホルダーを構築する。この例では、ドライブのホルダーは、X - ACTOのナイフのハンドル（図1c）の一方の端に接着ミル- maxのコネクタです。 </li><li>マイクロドライブのいずれかのキャリアのチューブをポリイミドに柔らかい先端がピンセットで四極管を保持し、ステレオスコープを用いて、四極管の先端を押してください。個々の電極ワイヤは、ドライブアレイの最上部にあるコネクタボードに近いようになるまでチューブに四極管を押し込みます。キンクたり、曲げたり電線を、それが四極管の角度で、脳ではなく、垂直に入るの原因となります、と四極管の整合性を弱体化するように注意してください。 </li><li>柔らかい先端がピンセットを用いて電極のインタフェースボードのそれぞれの穴に4本のワイヤーのもう一方の端をフィード。もう一度、配線をよじれたり、曲げないように。場所内のすべての4本のワイヤで、短縮下顎を持っているプラ​​イヤーでその穴に金色のピンを押してください。ピンが穴に押し込まれている場合、彼らは、銅線の絶縁被覆と電気的に接続を作成します。 </li><li>後で参照するために、マイクロドライブ、電極インタフェースボード上のピン位置との間のマッピングを追跡します。 </li><li> 18 tetrodesの合計のロードを続行。アレイ上の残りの3つのマイクロドライブは、参照電極を収容するために使用されます。各参照電極は、4つのアンボンドワイヤの端の一方のみを使用する四極管で作られています。参照電極を取り付けるために、ローディングの手順に従いますが、コネクタの基板上のそれぞれの参照電極のピンに4つの電極の一方のみを添付する。 </li><li>あなたがマルチサイト録音を計画している場合、それはtetrodesから事前にコネクタボードへの接続を計画する価値があるかもしれない。これは、実験中に間違って四極管の調整の可能性を最小限にする必要があります。 </li><li>テトロードのローディングが完了すると、2つの接地線、動物用と保護コーンのための1つを行います。 1つの6&quot;長い絶縁鋼線（テキスト：0.005&quot;直径）をカットし、ワイヤの両端から、金属製のピンセットを使用して、絶縁体の周囲3mmを削除します。次に4をカット&quot;長い間絶縁鋼線（テキスト：0.005&quot;直径）。一端と反対側で1 cmの絶縁体の周囲3mmを削除します。 </li><li>インタフェースボードに向かってマイクロドライブアレイと、最大の側面の穴に通します6&#39;アース線を。指定された地面の穴でゴールドピンと電極界面のボードへの導線が接続してください。この線は、動物の頭蓋骨に接続します。 </li><li>以前にインストールされているアース線への経路4&#39;アース線に平行。別の指定された地面の穴に金のピンを使用して電極のインタフェースボードから3mm被覆をはぎとった端を接続します。この線は、後でノイズのピックアップを減らすために小さなファラデーケージとして機能する保護コーン、に接続されます。我々は現在、接続ワイヤを終了していると私たちのtetrodesを精製に進むことができます。 </li></ol> 3。 tetrodesの長さを設定する<ol><li>この過程で私たちの目標は、彼らが少し長くターゲットの脳の構造の深さよりもされるように、すべてのtetrodesをカットすることです。この例では、マイクロドライブは、多くの新皮質の領域と成体ラットの背側海馬に到達するのに十分な5〜6ミリメートル、最大旅行のために設計されています。最初に、tetrodesが最大限に露出するようにすべてのマイクロドライブを下げる。同時に鋭い細かいハサミを用いて所望の最終的な長さより約5mm長い長さにすべてのtetrodesをカット。 </li><li>最後のカット​​の場合は、panaviseで鋸歯はさみのペアを用意。わずかな角度の下方で、ダングリング他のハンドルを残したまま、上向きセレーション付つのハンドルをクランプする。 </li><li>今すぐ完全にマイクロドライブを上向きにすることで、彼らのガイドカニューレにすべてtetrodesを撤回。 </li><li>ステレオスコープを使用して、完全にそのカニューレから一テトロードを引き出さない。ガイドカニューレから所望の距離で定規、位置ギザギザハサミを使用する。ゆっくりとゆっくりとの滑らかな動きとの四極管をカット。この四極管が切断された後、3〜4ミリメートルで、最大のマイクロドライブ撤回。すべてが切断されるまで、各テトロードに、このプロセスを繰り返します。この時点で、金めっきのための準備が整いました。 </li></ol> 4。 tetrodesと品質チェックの金めっきニクロムテトロード線をメッキゴールドは、長期安定的な録音のための非常に重要です。それは腐食し、改善する生体適合性を防ぎます。 <ol><li>外部モードでのインピーダンスメータとオーディオ出力（図1d）とDCのチェックモードでの電流発生器をセットアップします。各四極管内のチャネルの6つのペアに現在の発電機の2本のリード線をタッチし、ショートパンツがペア間に存在するかどうかを判断するために、オーディオフィードバックを使用してください。短絡が存在する場合は、もう一度鋸歯状のはさみとテストと四極管を再カット。問題が解決しない場合は、四極管を破棄し、それを交換してください。 </li><li>ショートパンツはすべてtetrodes内に存在しない場合、のような遠いできるだけすべてtetrodesを拡張し、すべてのマイクロドライブを下に移動。 </li><li>電極のインピーダンス（図1e）チェックするための機器構成を変更します。今すぐすべてのtetrodesのヒントは、標準の金めっき液の浴に手をつける。金浴を電気的インピーダンスの電圧計の正側に接続されている。コネクタボード上の対応する端子にインピーダンスメーターの負のリード線に触れることにより、電極のインピーダンスを確認してください。 </li><li>マイクロドライブのアレイ上のすべてのワイヤのインピーダンスを測定し記録する。正常値は1-3 Mohmをからの範囲。 </li><li>現在の発電機では、1〜3μAの間に電流を設定します。次に、しっかりとコネクタ基板上の端子にインピーダンスメーターの負のリード線を取り付けます。電気めっきの構成（図1F）に機器を置きます。インピーダンスメータでは、すぐにバックモードをバイパスするために、通常モードから切り替えて、と。バイパスモードでは、現在では、四極管と金溶液を通過する、とゴールドは、電極の先端上にプレーティングされます。メッキの各ラウンド後のインピーダンスは、以前よりも小さくする必要があります。インピーダンスは1MΩを上回るの下にドロップしなかった場合の電流パルスを繰り返します。許容インピーダンスの保守的な範囲は350キロオームに250kOhmです。インピーダンスが200キロオームを下回った場合、これは短絡している可能性があります。 </li><li>繰り返しパルスの後のインピーダンスが十分に低下しない場合、電極の先端が詰まっされることがあります。テトロードを再カット、ショートパンツをチェックし、金メッキ処理を繰り返します。再加工で効果がない場合は、四極管を交換し、再度起動してください。 </li><li>すべてtetrodesをメッキした後、エタノールで簡単にテトロードのヒントを浸し、そして、それらが3〜5分間乾燥させます。 </li><li>空気にさらさテトロードのヒントを、現在のジェネレータを使用してtetrodes内で短絡回路のテスト。 DC接続は、四極管の二つ以上の電極の間に存在する場合は、再び金で四極管、そしてプレートを再カット。 </li><li>すべてtetrodesの金メッキが完了したら、各tetrod間のインタフェースに中厚シアノアクリレート接着剤のドロップを追加eとそのはチューブポリイミド。これは、マイクロドライブに四極管を固定し、四極管の長さを維持します。 </li><li>最後のステップとして、すべてのネジを回して、ドライブにすべてのtetrodesを移動する。 </li></ol> 5。保護コーンの取り付け保護コーンの目的は、環境からのマイクロドライブと露出テトロードのワイヤーを保護することです。また、実験中に処理するためのサポートを提供し、電気的なノイズを低減します。我々は3次元印刷プラスチックコーン（：ドライブの製造リファレンスパートI）を使用してください。しかし、それは缶ソーダの曲がった部分のように、他の材料から円錐を作ることは可能です。 <ol><li>プラスチック製のコーンに乗り、内側または外側の表面にいくつかのアルミ箔テープを修正。 </li><li>次に、コーンを通して小さな穴（直径1.5 mm）をドリルダウンして、ゆるく円錐内部にワッシャーとナットでネジを取り付けます。これは、アース線の電気の通路として機能します。我々は00から80サイズのネジとワッシャーの組み合わせを使用することをお勧めします。 </li><li>最初に、挿入と部分的に円錐の側面に3つ1〜72サイズのネジを（長さの3 / 16インチ）にします。ドライブアレイは一時停止して、ドライブ上のコーンを挿入します。両方のアース線は、ドライブアレイの底から伸びることを確認してください。何回か1から72のネジを1本の周りに4&#39;アース線の露出部分をラップし、しっかりとネジを締めます。残りの二つの円錐のネジを締めて、ドライブのベースにコーンを固定します。 </li><li>最後に、1cmの短いアース線の被覆のない部分を取ると箔テープと座金との間で、ネジの周りにそれを巻き。ネジを締めて、地面を固定します。今、私たちは最後に外科的移植の準備ができているマイクロドライブアレイを持っている。 </li></ol> 6。代表的な結果<ol><li>マイクロドライブアレイの生産はこれで完了です。あなたのマイクロドライブアレイは、18 tetrodesと3つの参照チャネルがロードされます。それは耐久性の保護コーンとキャップに収められています。保護コーンと終了のマイクロドライブアレイは、平均で25gまで20グラム重量を量る。 </li><li>終了ドライブアレイは、標準的な外科的処置を用いて注入される。ご覧のように、ドライブはプリアンプのチップとデータ集録ハードウェアとソフトウェアに信号を伝送する線の束に取り付けられています。 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1098/CompositeFigure1_highqualityn.jpg" alt="図1" /> 図1：テトロードねじれ設定の）回路図。水平バーは自動化されたテトロード式ツイスト装置上記の四極管の未結合電極ワイヤを中断。テトロードのインピーダンスの測定と電極メッキ用B）のセットアップ。短絡をチェックするときに、回路が異なっている：。黒いワイヤがコネクタの基板上の別の電極のチャネルに接続されているC）クローズアップカスタムのマイクロドライブアレイホルダーのツールが作ら。円筒形のバーは、X - Actoのナイフの柄です。コネクタは26ピン、二列、ミル- maxのコネクタです。短いチェックのための2つの部分が歯のアクリルを使用して互いに結合している。D）の構成。チャンネルXとチャンネルYは4テトロードチャネルの任意の2つの異なったチャネルである。E）電極インピーダンスを測定するための構成。電流源は、&#39;off&#39;です。インピーダンスメーターが&#39;on&#39;と&#39;試験&#39;に設定されています。F）は、電極チップの金めっきの構成は、。電流源が&#39;on&#39;の場合、オーディオが&#39;on&#39;であるために設定され、モードは&quot;ユニポーラ&quot;であり、DCテストが&#39;on&#39;である、現在は2マイクロアンペアに設定されています。

<ol><li>Gray, C. M., Maldonado, P. E., Wilson, M., McNaughton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrodes+markedly+improve+the+reliability+and+yield+of+multiple+single-unit+isolation+from+multi-unit+recordings+in+cat+striate+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Tetrodes markedly improve the reliability and yield of multiple single-unit isolation from multi-unit recordings in cat striate cortex.</a> J. Neurosci. Methods. 63 (1-2), 43-54 (1995).</li>
</ol>

このプロトコルは、2つの部分のプロトコルの第2回目です：&quot;​​in vivoで録音慢性用マイクロドライブアレイ。&quot;マイクロドライブアレイと四極管の組み合わせが目を覚ましに多くのニューロンの同時録画を取得するための強力なツールである、動物の準備を振る舞っ。うまくいけば、我々はあなたがあなた自身の研究室で電気生理学的記録を開始または改善するために必要となるために必要なすべての情報を提供している。 電動テトロードツイスターのデバイスは、カスタム設計と作製した。我々はあなたが同様の機能を持つデバイスを注文できるようになりますベンダーと部品番号を提供している。また、電動旋回装置は、単にワニ口クリップに接続されている磁化攪拌棒を電動回転棒磁石を組み合わせることにより、社内で構築することができ、この構成は、ほとんどの回転、回転方向の手動反転のカウントマニュアルが必要になります、と開始/停止マニュアル。 いくつかの電極のインタフェースボードは、電極のワイヤを接続するためのピンとホールのメカニズムを持っていない。代わりに、コ...

<table><tbody><tr><td>Panavise</td><td>ツール</td><td>Panavise</td><td>Model 301</td><td>マイクロドライブアレイまたはギザ刃のハサミを固定するために使用</td></tr><tr><td>改造Xcelite 378M プライヤー</td><td>ツール</td><td>Newark Inc</td><td>96F8903</td><td>コネクタボードのピンを挿入するため。作製するには、プライヤーの先端から2mmを切り落とす。</td></tr><tr><td>緩慢硬化型接着剤</td><td>材料</td><td>Great Planes (Champaign, IL)</td><td>GPMR6015</td><td>テトロードをマイクロドライブに接着するため</td></tr><tr><td>金メッキ溶液</td><td>材料</td><td>Neuralynx Inc.</td><td>Sifco Selectron Gold NC</td><td>電気メッキ用の金粒子を含む</td></tr><tr><td>電流発生器</td><td>ツール</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>A365D-B</td><td>別名：刺激アイソレータ。電極先端への金溶液の電気メッキに使用</td></tr><tr><td>インピーダンスメーター</td><td>ツール</td><td>BAK Electronics</td><td>IMP-1 / 6662 / 2788</td><td>電極のインピーダンスを確認するため</td></tr><tr><td>ホットエアガン</td><td>ツール</td><td>Steinel (Germany)</td><td>HG 3002 LCD</td><td>電極同士を融着させてテトロードを作製するため</td></tr><tr><td>Accu-Tek カーボンファイバー製チップピンセット</td><td>ツール</td><td>Aven</td><td>18768 (Pattern 304)</td><td>テトロードのハンドリング用</td></tr><tr><td>アリゲータークリップ</td><td>ツール</td><td>Fine Science Tools</td><td>18050-35</td><td>別名：Bulldog serrefine。ねじり工程中にテトロードをまとめて固定するため</td></tr><tr><td>マイクロ解剖用ハサミ</td><td>ツール</td><td>Biomedical Research Instruments</td><td>25-1000</td><td>テトロード/電極ワイヤーの一般的な切断用</td></tr><tr><td>アイリス Toughcut ギザ刃ハサミ</td><td>ツール</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td>テトロードの最終切断用</td></tr><tr><td>テフロンコーティングステンレスワイヤー</td><td>材料</td><td>A-M Systems</td><td>790500</td><td>接地線</td></tr><tr><td>12.5 micron ニクロム線</td><td>材料</td><td>Kanthal Palm Coast</td><td>Rediohm-800 1/4 HARD PAC COATING</td><td>テトロード作製用のポリイミドコーティングマイクロワイヤー</td></tr><tr><td>テトロードツイスター</td><td>ツール</td><td>Neuralynx Inc.</td><td>Tetrode Assembly Station</td><td>テトロード作製の速度と一貫性を向上させる</td></tr><tr><td>銀ペイント</td><td>材料</td><td>GC International</td><td>22-023</td><td>テトロードのマイクロ電極ワイヤーをコネクタピンに接続するため（「考察」を参照）</td></tr><tr><td>X-Acto ナイフハンドル</td><td>材料</td><td>MSC Direct</td><td>X3001</td><td>マイクロドライブ保持装置を構築するため</td></tr><tr><td>26ピン 2列コネクタ</td><td>材料</td><td>Mill-Max</td><td>852-10-026-30-001000</td><td>マイクロドライブ保持装置を構築するため</td></tr></tbody></table>

慢性のためのマイクロドライブアレイ in vivoで録音：四極管アセンブリ

Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly

テトロード、4つの電極の束は、生体内で複数のニューロンの同時記録のための貴重なツールであることが実証されています。テトロードのチャネルを介した活動電位署名の差動振幅は、マルチユニットの信号から単一ユニットの活性を分離することができます。正確に四極管の定位位置と深さを制御する能力は、脳の領域全体で整合性のとれた神経活動を研究するために重要です。マイクロドライブアレイと組み合わせることで、それは数日から数週間の経過を正確に配置し、多くのtetrodesの安定した制御を達成することが可能である。このプロトコルでは、我々は、ラットにおける慢性的なin vivoでの録音のためのマルチドライブテトロード配列にtetrodesをインストール、基本的なツールや材料を使用してtetrodesを作製し、条件にする方法、マイクロドライブのアレイへのアース線の接続を確立し実証する、と環境との物理的な接触からtetrodesを保護するために、マイクロドライブのアレイ上に保護用のコーンを取り付けます。

このプロトコルでは、ラットの慢性的な電気生理学的記録のために設計されたマイクロドライブアレイで使用するためのtetrodesを作製し、条件する方法を示しています。さらに、我々は、インストールのアース線と保護円錐を含むマイクロドライブアレイの建設、最終段階を示しています。

4本の電極を束ねたテトラードは、生体内で複数のニューロンを同時に記録するための有用なツールであることが証明されています。差動...

このプロトコルでは、覚醒状態のげっ歯類における慢性的なin vivo記録のために、4本の電極からなるTetrosバンドルの作製と留置について説明します。まず、テトロの作製を開始します。マイクロ電極線のストランドを2回折り畳み、4本の平行なワイヤの束にします。その後、これらのワイヤをまとめてねじり、ホットエアガンで加熱処理します。完成した各teroを保管ボックスに入れます。さらにteroを作製しながら、各teroをリニアアクチュエータの開口部から導入し、マイクロドライブアレイの底面から出る専用のパスに挿入します。teroの4本のワイヤをそれぞれ、マイクロドライブアレイの上部に固定された出力コネクタボードの個別のピンに接続します。金電解メッキプロセスを用いて、Teroの各チャネルのインピーダンスを低下させます。すべてのTeroの設置および電解メッキが完了したら、2本の接地線をコネクタボードの respective pins に接続し、接地した保護コーンをマイクロドライブアレイのフレームに固定して保護します。これで、植え込み準備が整った機能的なTeroマイクロドライブアレイが完成しました。こんにちは、Pickout Institute for Learning and MemoryのNat Wilson研究室のDave Nianです。本日はMITにて、テロス（teros）の作製、テロスへの充填、およびマイクロドライブ再構築の最終段階の手順について解説します。当研究室ではこの手法を用いて、覚醒し行動している動物の個体において、大規模な神経細胞集団と個々のニューロン間の協調的な神経活動を研究しています。それでは始めましょう。標準的なマイクロドライブアレイ用のテロを構築するために、まず絶縁された12 micronのマイクロメWireを50 centimeter分用意します。Wireを半分に折り、指で2本のWireに沿ってなぞり、密着させます。2本のWireが全長のいたる所で十分に接触していることを確認してください。両端を合わせて、ペアを再度折り曲げます。このとき、片端にできたループにねじれがないように注意してください。ループのない側の4本のワイヤーを、4つの先端が揃うように切断します。次のステップでは、改造したワニ口クリップ、電動回転装置、および回転装置の上の水平バーが必要になります。ワニ口クリップは、クリップのベースにプラスチックバーを接着して改造します。先端が露出している状態で、4本のワイヤーを改造したワニ口クリップで一緒に固定してください。ワイヤーのループを水平バーに掛けます。アリゲータークリップを電動ステージに設置します。約3分かけて、ワイヤー束に時計回りに80回、続いて反時計回りに40回のねじりを加えます。これらのパラメータは必要に応じて変更可能です。テロツイスト（tero twisting）が完了した後、ヒートガンを用いて3つの異なる角度から加熱し、ワイヤー同士を融合させます。各角度で中から低流量の風量を設定し、ワイヤー束が分かれる箇所の1〜2 cm下から加熱を開始してください。その後、ワイヤーから2 cmの距離を保ちながら、ヒートガンを上下に約5秒間動かします。高温になると絶縁体が完全に溶けて短絡の原因となるため、注意してください。電線が融合したところで、アリゲータークリップをそっと持ち上げてteroへの張力を緩め、ねじり装置からteroを取り外し、アリゲータークリップ付近でteroを切断します。もう一方の端では、ブランド表示のない4本の電線が等長になるようにループを切断します。次に、先端の柔らかいピンセットで電線をそっと曲げ、個々のストランドを分離させます。これでteroをマイクロドライブアレイにロードする準備が整いました。Tet roadをさらに21〜25個作成し、teroのロード工程に進むまで防塵ボックスに保管してください。まだ作成していない場合は、完全なマイクロドライブアレイが必要になります。設計プランにおける慢性in vivo記録用マイクロ電極駆動アレイの作製について、ビデオを参照してください。テロの一端をコネクタハードウェアに取り付け、マイクロドライブのポリミドキャリアチューブの中に通すことで、電極チップがマイクロドライブアレイの底部より下に突き出るようにします。それでは、1本のテロに対するこのロード工程を実演します。開始する前に、一方の端をコネクタボードに取り付け可能で、もう一方の端を氷盤で固定できるドライブホルダーを製作します。この例では、ドライブホルダーとして、X-Actoナイフのハンドルの一端にMilaxコネクタを接着したものが使用されています。テトロード（tetrode）をソフトチップピンセットで保持し、実体顕微鏡を用いて、テトロードの先端をマイクロドライブのポリミッド（polyimide）キャリアチューブに挿入します。テトロードをチューブに押し込み、個々の電極線がドライブアレイ上部のコネクタボードに近づくまで挿入してください。この際、電極線を曲げないように注意してください。曲がると、テトロードが脳に対して垂直ではなく角度を持って進入することになり、テトロードの完全性が損なわれます。次に、ソフトチップピンセットを使用して、4本のワイヤーのもう一方の端を電極インターフェースボードのそれぞれの穴にゆっくりと差し込みます。ここでも、ワイヤーを折ったり曲げたりしないように注意してください。4本のワイヤーがすべて所定の位置に収まったら、下顎を短く加工したプライヤーを使用して、ゴールドピンを穴に押し込みます。ピンを穴に押し込むと、電線の絶縁被覆が剥がれ、後の参照のための電気的接続が形成されます。マイクロドライブと電極インターフェースボード上のピン位置とのマッピングを記録しておいてください。合計18本のテトロードの装着を続けてください。アレイ上の残りの3つのマイクロドライブは、参照電極の保持に使用します。各参照電極は、未接合のynsのうち1つのみを使用するteroで構成されています。参照電極を取り付ける際は、ロード手順に従いますが、4つの電極のうち1つのみをコネクタボード上の対応する参照電極ピンに取り付けてください。多点記録を計画している場合は、テトロ（tetro）からコネクタボードへの接続をあらかじめ計画しておく価値があります。例えば、同一の解剖学的領域を標的とするテトロを電極インターフェースボード上でまとめて配置してください。これにより、実験中に誤ったテトロを調整してしまう可能性を最小限に抑えることができます。テロのロードが完了したら、動物用と保護コーン用の2本の接地線を作成します。6インチの長さの絶縁鋼線を1本切り、金属製ピンセットを使用して、電線の両端から3 mmの絶縁被覆を取り除きます。次に、4インチの長さの絶縁鋼線を1本切ります。片端から3 mm、もう一方の端から1 cmの絶縁材を取り除きます。6インチの接地線をマイクロドライブアレイ側面の穴に通し、インターフェースボード方向へ配線します。露出した線を、指定された接地穴にあるゴールドピンを用いて電極インターフェースボードに接続します。このワイヤーを動物の頭蓋骨に接続します。4インチの接地用ワイヤーを、先に設置した接地用ワイヤーと平行に配線します。3mm剥離した端端を、別の指定された接地穴にあるゴールドピンを用いて電極インターフェース基板に接続します。このワイヤーは後で保護コーンに接続されます。このコーンは小さなファラデーケージとして機能し、ノイズの混入を低減します。これでワイヤーの接続が完了しましたので、テロスの調整に進みます。この工程の目的は、すべてのテロスを、標的となる脳構造の深さ（および本例）よりもわずかに長い長さにカットすることです。マイクロドライブは、成体ラットの多くの新皮質領域および背側海馬に到達するのに十分な、最大5〜6 mmの移動距離に対応するように設計されています。まず、すべてのテトロードが同時に最大限に露出するように、すべてのマイクロドライブを下げます。次に、最終的な目標長よりも約5 mm長くなるようにすべてのテトロードを切断し、最後のカットには鋭い精密鋏を使用してください。ギザ刃のハサミを氷水を入れたパンの中に用意し、片方のハンドルをわずかに下向きに、ギザ刃を上向きにして固定し、もう片方のハンドルは吊り下げたままにします。マイクロドライブを回して、すべてのTET電極をガイドカニューレの中に完全に引き戻します。実体顕微鏡を使用して、1本のTET電極をカニューレから完全に伸長させます。定規を使用して、ガイドからカニューレまで、目的の距離にギザ刃のハサミを配置します。ゆっくりと慎重に、一度のスムーズな動作でteroを切断します。teroの切断後、マイクロドライブを3〜4mm上に引き上げます。すべてのteroをカットし終えるまで、この工程を繰り返します。これで金メッキの準備が整いました。金メッキ工程に移ります。長期的な安定記録には、ro terosが不可欠です。これにより腐食が防止され、生体適合性が向上します。インピーダンスメーターを、カレントジェネレーターの外部モード、およびオーディオ出力付きのDCチェックモードに設定してください。電流ジェネレーターの2本のリード線を、各tero内の6通りのチャンネルの組み合わせに接触させ、オーディオフィードバックを用いてペア間にショートがあるかを確認します。チャンネルペア間のショートは次のような音がします。ショートがある場合は、ギザ歯のハサミでteroを切り直し、再度テストしてください。問題が解決しない場合は、Tet roadを廃棄し、新しいものと交換してください。すべてのマイクロドライブを下方へ移動させ、すべてのTet roadを可能な限り外側まで伸ばします。電極インピーダンスを確認するための装置構成を変更してください。次に、すべてのテロの先端を標準金メッキ溶液のバスに浸します。金メッキバスはインピーダンスメーターの負極リードに電気的に接続されています。インピーダンスメーターの正極リードをコネクターボードの対応するピンに接触させ、電極のインピーダンスを確認してください。マイクロドライブアレイのすべての電極線のインピーダンスを測定し、記録します。電流発生器における標準値は1から3MΩの範囲です。電流は1から3µAに設定してください。次に、確実に接続します。インピーダンスメーターの正極リードをコネクタボードのピンに取り付けます。インピーダンスメーター側で操作します。バイパスモード中に、通常モードからバイパスモードへ、そして再び通常モードへと迅速に切り替えます。これにより、電流がTet路および金溶液を通過し、電極チップに金がメッキされます。メッキを1回行うごとに、インピーダンスが前回よりも低下しているはずです。現在のパルスを繰り返します。インピーダンスが1 MΩまで低下しなかった場合、許容されるインピーダンスの保守的な範囲は250 kΩから350 kΩです。インピーダンスが200 kilo ohmsを下回った場合、短絡（ショート）している可能性があります。繰り返しパルスを印加してもインピーダンスが十分に低下しない場合は、電極先端が閉塞している可能性があります。その場合は再度カットを行い、短絡を確認した上で、金メッキ工程を繰り返してください。再研磨で改善しない場合は、teroを交換して最初からやり直してください。すべてのteroをプレートに配置した後、エタノールに浸し、3〜5分間乾燥させます。teroの先端を空気にさらした状態で、電流発生器を用いてtero内部のショートを確認してください。2本以上のtero電極間にDC接続がある場合は、teroを切り直し、再度金メッキを施してください。すべてのteroの金メッキが完了したら、すべてのteroをドライブに移動させます。最後の工程として、各マイクロドライブの上部にある、各teroとポリチューブの接合部に中粘度のシアノアクリレート接着剤を1滴塗布してください。これにより、teroをマイクロドライブに固定します。保護コネクタの目的は、マイクロドライブと露出したteroワイヤを外部環境から保護することです。また、実験中のハンドリングのサポートとなり、電気的ノイズを低減させます。ここでは3Dプリントされたプラスチック製のコーンを使用しています。ただし、曲げたアルミ缶などの他の材料でコーンを作製することも可能です。また、プラスチック製のコーンの内面または外面にアルミ箔テープを貼付して使用することもできます。まず、ドライブアレイを吊り下げた状態で、3 1 72サイズの長さ3/16インチのネジを3本、コーンの側面に挿入して部分的に回します。コーンをドライブに被せます。両方の接地線がドライブアレイの底部から伸びていることを確認してください。4インチの接地線の露出部分を1 72スクリューのいずれかに数回巻き付け、スクリューを固定します。残りの2本のコーンスクリューを締め付けて、コーンをドライブベースにしっかりと固定します。これでマイクロドライブアレイの製作は完了です。作成したマイクロドライブアレイには、3つのリファレンスに計18個のテロスがロードされています。耐久性を高めるため、保護用のコーンとキャップで覆われています。完成したドライブの重量は、平均して通常 20 to 25 grams です。完成したドライブアレイは、標準的な外科的手順を用いて植え込まれます。見ての通り、ドライブはプリアンプチップと、データ収集ハードウェアおよびソフトウェアに信号を伝達するワイヤー束に接続されています。以上で、terosの作製およびマイクロドライブアレイの構築手順の完了方法について説明しました。このビデオでは、terosの作製方法、および生体内で記録を行うためのterosへの充填とコンディショニング方法について解説しました。さらに、時間の経過に伴う堅牢性を高めるために、マイクロドライバーアレイにコーンを追加する方法についても示しました。マイクロドライバーアレイの構築には多くの工程があるため、根気強く、電極を丁寧に扱い、すべての途中工程が適切に完了していることを確認してください。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験が成功することを願っております。

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