Name: ヒト臍帯静脈内皮細胞の単離（HUVEC） (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: 学ぶヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）の単離法。コラゲナーゼ処理と培養技術を用いて血管生物学研究に活用可能な細胞を調製する方法を解説します。

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手順<ol><li>過剰な血液オフクリーンパッドとDABにコードを置く。コー​​ドの両端で新鮮なカットを行います。 </li><li>静脈に、ONプラスチック針のシースで21 1 / 2 Gの針を挿入します 。 （静脈の最大の開口部である、2小さいものが動脈です。） </li><li>止血剤で固定針をクランプし、針にハンクスの20ccシリンジを取り付けます。 </li><li>適度な圧力で静脈を通してハンクスを押してください 。漂白剤とビーカー内で廃棄物を収集する。 （押しながら片手で針とコードを保持する静脈から飛び出る針を妨げる。）静脈内の血液の多くがある場合は、もう一度洗う。 </li><li>パッドの上にコードを置くと静脈のもう一方の端をクランプ。脊髄に沿ってリークをチェックするハンクスの数mLで埋める。 5 mLを撤回し、底部のクランプを外してください。 </li><li> 20ccシリンジを外します。 10ccのシリンジからプランジャーを外します。 10mlのコラゲナーゼを投入し、プランジャーを交換、針に10ccの注射器を取り付けます。あなたが開放端を終了する最初の量が表示されるまで、静脈内にコラゲナーゼを押し込みます。開放端を再度クランプし、 静脈の中程度の膨満があるまでコラゲナーゼを詰めます。平滑筋の汚染でも多くの膨満結果。 </li><li> 軽くコードをマッサージ 。 </li><li> 37 DPBSでインキュベートするコード（接続されている止血、注射針や注射器付き）℃で15分間。 </li><li>インキュベートしながら、第2のコードと手順1-8を続ける。 </li><li>インキュベーション後、50mLのチューブを介して電源コードを保持しながらビーカーからコードを取り出しては、ボトムクランプ上記の端をカット。 チューブ内のすべてのものを収集してください 。コー​​ドを通して、残りのコラゲナーゼを押し、その後20ccシリンジを接続し、適度な圧力で通過ハンクスを押してください。 </li><li>は平滑筋細胞が必要とされていない場合、この時点でコードを破棄。それ以外の場合、37℃〜5ミリリットルコラゲナーゼとインキュベートで2 50mLのチューブに同じコードを配置° Cを30〜60分間。 </li><li>すべてのコードが終了するまでチューブを保管してください。 </li><li> 5分間〜1200 rpmでチューブを回転させる 。 </li><li>上清を吸引しますが（1〜2 mLを除く）。T25で5mls PHECの+とプレートでペレットを再懸濁します 。 </li><li> ° Cで5％CO 2で一晩37℃でインキュベートする 。 </li><li>翌日上清を除去し、新鮮な培地と交換してください。多くの赤血球がある場合は、M199で一度洗い、その後PHEC +を追加。プレートはコンフルエントになるまで（1-4日）いつものようにインキュベートし続ける。糊化T75に分割。 </li><li>一度T75は3つのT75sに分割、合流です。フラスコごとに2つのバイアルを凍結する。 </li></ol> 注：内皮細胞（不活性）石畳の外観を持っている。のカップルは、彼らが通常unactive状態に戻す通過した後に内皮細胞は時々 、右の分離後（長くて先のとがった）活性化される。 クリーン<ol><li>非常に慎重に、鋭利物容器の中に針を処分する。 </li><li>ビッグバイオハザード容器に注射器を廃棄してください。 </li><li>小さなバイオハザードバッグにすべての組織を置く。 -20閉じる袋と凍結°焼却時まで。 </li><li>少なくとも10分間ヴァイラサイドゥですべての楽器を浸す。 </li><li>廃棄物/漂白剤をビーカーにインキュベーションのメディアを追加します。少なくとも10分間放置します。 </li><li>バイオハザード廃棄物にベンチパッドを捨てる。 </li><li>ビーカー、ベンチトップとvircideで水浴の蓋の内側と外側を下にスプレーしてください。 10分を座らせて、その後拭いてください。 </li><li>暖かい水でビーカーや楽器をすすぎ、（彼らが錆びていないので、楽器をオフブロット）乾燥してラックにハングアップする。 </li><li>シンク下除染廃棄物を処分。 </li><li>冷蔵庫に未使用のメディアを返します。 </li><li>バイオハザード廃棄物の手袋を廃棄してください。 </li></ol>

<table><tbody><tr><td>0.1% コラゲナーゼ</td><td></td><td></td><td>1臍帯あたり10 mL、37 &amp;deg;Cに加温</td></tr><tr><td>組織培養フラスコ</td><td></td><td></td><td>T75、1臍帯につき1個</td></tr><tr><td>ハンクス平衡塩類溶液（Hanks medium）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>はさみ</td><td></td><td></td><td>滅菌済み</td></tr><tr><td>ビーカー</td><td></td><td></td><td>滅菌済み</td></tr><tr><td>50 mLチューブ</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ヒト臍帯静脈内皮細胞の単離（huvec）

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)

血管新生は血管新生の刺激に応答して、新しい血管が既存の血管系から作成される複雑なマルチステップのプロセスです。これらの手順は、次のとおりコード、管腔形成、吻合、および新たな基底膜の形成に細胞外マトリックス、ECの整列への内皮細胞の基底膜、増殖と移動（萌芽）（EC）の低下。 in vitroアッセイの多くは、このプロセスを研究するために開発が、ほとんど唯一の血管新生の特定の段階を模倣し、形態学的に血管が多くの場合、in vivoで血管似ていないされています。ここでは、ヒト臍帯静脈ECと線維芽細胞を利用したin vitroでの血管新生アッセイに最適化を示しています。このモデルは、反復する血管新生の重要な初期段階のすべてを、そして重要な血管が偏ECに囲まれた特許細胞間ルーメンを表示します。血管は容易に位相コントラストとタイムラプス顕微鏡で観察し、下流のアプリケーション用に純粋な形で回収することができます。

このビデオプロトコルは、ヒト臍帯からヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）の単離と文化を示しています。一旦単離さこれらの細胞はまた、ヒューズの研究室で実証最適化されたフィブリンゲルビーズアッセイなどのin vitroでの血管新生アッセイに使用することができます。

ヒト臍帯静脈内皮細胞の単離（HUVEC）

血管新生は複雑な多段階のプロセスであり、血管新生刺激に反応して、既存の血管系から新しい血管が形成される。これらの段階は...

こんにちは、Jager Davisです。本日は、HUVECとしても知られるヒト臍帯静脈内皮細胞の単離方法を説明します。今回はさまざまな培地を使用します。まず、静脈内に含まれる赤血球やその他の不純物を取り除き、細胞を洗浄するためにハンクス平衡塩類溶液を使用します。次に、DPBSで再懸濁したコラゲナーゼを使用し、これを用いて静脈からHUVECを遊離させます。最後に、熱不活化FBSおよびペニシリン・ストレプトマイジン溶液を添加したM199ベースの20% EGM-2培地で播種を行います。また、Resus懸濁液にBD Biosciences社の血管内皮細胞増殖サプリメントを添加します。それでは、解剖用ハサミを用意しました。このように、臍帯を真っ直ぐに切断します。次に、臍帯のクリーニングを行います。まず、動脈と静脈を識別します。動脈が2本と静脈が1本あります。通常、私はこの2本で動脈を識別します。こちらに向かって伸びています。ここに1本の動脈があり、そしてここにもう1本の動脈があります。ご覧のように、静脈が実際に臍帯へと繋がっています。ここにバタフライ針を刺入します。使用するのは21ゲージ、3/4インチのAccutaneバタフライ針です。それでは、開封してください。そのまま進めます。改めて、動脈を特定します。こちらに1本目の動脈、そして2本目の動脈があり、さらに静脈があります。次に、バタフライ針を静脈に非常にゆっくりと挿入します。この際、多少の抵抗を感じることがあります。そのため、コードを少しひねりながら同時に針を押し込むという動作を繰り返し、バタフライ針の翼部分がコードに密着するまで挿入し続けます。これで準備が整いましたので、クランプで固定します。それでは、まず20 µLのシリンジ2本にインクを20 µLずつ充填します。次に、50 µLのコニカルチューブに20% effectを5 µL充填します。続いて、15 µLのコニカルチューブの1本にDPBSを10 µLピペットで分注します。15 mLのDPBSに、天秤で計量した10 mgのコラゲナーゼ粉末を加えます。次に、チューブの壁面に付着した粉末がなくなるまで、チューブを数回転倒混和させてコラゲナーゼを再懸濁させます。5、6回ほど転倒させた後、10 mLシリンジを用いてコラゲナーゼを滅菌ろ過します。それでは、これらの培地をコードに通す準備をしましょう。残りのDPPSをこの1Lのビーカーに注ぎ、37°Cのウォーターバスに入れて温めておきます。これを使用して、コードを約15分間インキュベートします。これがろ過済みのコラゲナーゼ溶液です。この円錐形のバイアルを37 °Cのウォーターバスに入れ、温めておきます。これは、後の手順で静脈内部からuveを剥離させるために使用します。次に、バタフライ針の箇所でコードをクランプし、20 mL

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

臍帯は、異なる方法で平滑筋細胞を単離するために使用されています。本研究では孤立した平滑筋細胞への酵素処理を使用していました。...

ヒト臍帯動脈平滑筋細胞の単離（HUASMC）

我々は、心臓弁内皮細胞（VEC）の純粋な集団を分離して培養する方法を提供する。...

弁内皮細胞の単離

この記事は、最初の臍帯静脈からヒト内皮細胞を単離するための手順を説明した後、フロー条件下で好中球の遊出を調べるために、これらの細胞を使用する方法を示します。ガラスの光学特性を有するポリマーから作られた低容量のフローチャンバーを用いて、希少細胞集団の生細胞蛍光イメージングも可能です。...

フローの状況下で好中球移住研究におけるヒト臍帯静脈内皮細胞とそれらの使用の分離

好中球の接着を定量する方法が報告されている。この方法は、血管内に発生したものと同様の動的流れ環境を作成する。これは、せん断応力との生体内環境に似コンテキストで精製された接着分子（リガンド）のいずれかへの好中球の接着や内皮細胞基質（HUVEC）の調査を可能にする。...

ヒト好フローチャンバー接着アッセイ

このプロトコルは、イメージングや分子生物学的実験を行う目的でマウスの冠状細胞を分離する方法を共有するために準備されています。...

マウスの冠動脈内皮細胞の単離

ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)培養のためのプロトコール、蛍光標識された微小管増殖マーカーの一過性トランスフェクション、生細胞イメージング、および間期微小管成長ダイナミクスの自動分析が詳細に説明されています。...

リビングヒト臍帯静脈内皮細胞における高解像度タイムラプスイメージングと微小管ダイナミクスの自動解析

このプロトコルの目的は、臍帯血由来の血管内皮前駆細胞を分離することです。一部のアプリケーションは虚血性疾患の治療、心血管のリスクを持つ患者を識別するためのバイオ...

ひと臍帯血由来の血管内皮前駆細胞の分離

ここでは、単球 subpopulation の特定の表面マーカーと共焦点蛍光顕微鏡を用いて in vitro...

体外流れ球サブポピュレーションの募集の同時研究

挑戦的ですが、肺内皮細胞の単離は肺炎症の研究に不可欠です。本プロトコルは、大血管内皮細胞および微小血管内皮細胞の高収率、高純度単離のための手順を記載する。...

肺由来サンプルからの微小血管および大血管内皮細胞の単離および精製(英語)

現在の研究では、リアルタイム細胞解析(RTCA)システムを使用して、ウイルス感染中のヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)の変化を監視するプロトコルについて説明します。...

インピーダンスに基づくリアルタイム細胞解析を用いたウイルス感染時のヒト臍帯静脈内皮細胞の変化のモニタリング

ヒト伏在静脈内皮細胞(hSVEC)を単離および培養するためのプロトコルについて述べる。また、hSVECの機械的応力を研究するために、せん断応力と伸張を生成するための詳細な方法も提供しています。...

ヒト伏在静脈内皮細胞の単離と制御されたレベルのせん断応力および伸張への曝露

学ぶヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）の単離法。コラゲナーゼ処理と培養技術を用いて血管生物学研究に活用可能な細胞を調製する方法を解説します。

ヒト臍帯静脈内皮細胞の単離（HUVEC）

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