膵島移植:In vivoイメージングのためのマウス眼の前房に膵島を移植する方法

- 膵島には、インスリンを分泌するベータ細胞が含まれています。1型糖尿病患者では、インスリン産生ベータ細胞が機能不全に陥ります。そのような患者における膵島の移植は、血糖コントロールを提供する可能性を提供します。移植効率の評価には、前眼房が移植やin vivoイメージングに最適な部位であるマウスなどの動物モデルを使用します。

膵島移植の場合は、麻酔をかけたマウスを温かい温熱パッドに置き、マウスの背部に痛みを和らげる鎮痛剤であるブプレノルフィンを皮下注射します。次に、マウスの鼻を鼻マスクに挿入して、酸素と麻酔薬イソフルランを連続的に供給します。

マウスの頭をヘッドホルダーに固定して目を露出させ、鈍い鉗子を使用してまぶたをそっと引っ込めて目を浮かせます。蛍光標識された膵島をカニューレにロードします。カニューレの半分の先端を角膜に挿入します。角膜を持ち上げ、膵島をやさしく分注し、カニューレを取り外し、アイジェルを塗布します。

所望の期間が経過した後、マウスを2光子顕微鏡の下に置き、画像を撮影する。移植片全体で微小血管ネットワークを形成する血管を観察できます。次のプロトコルでは、マウスの前眼房にヒト膵島移植を行います。

まず、マウスを温かい加熱パッドの上に置き、ヘッドホルダーに配置して、ノーズマスクを装着します。親指と人差し指を使って頭を少し持ち上げます。側面の金属片で固定し、イヤピースが頭を耳の真下に固定していることを確認します。皮下的に、ブプレノルフィン溶液をマウスの背面に注入します。移植する目のまぶたを鈍い鉗子を使用してそっと引っ込めます。目を飛び出して、ポリエチレンチューブで覆われたピンセットでゆるく固定します。

膵島をPBS付きのペトリ皿に移した後、アイカニューレで約20〜30個の膵島をピックアップします。25ゲージの針を使用して、上向きに面取りし、先端を角膜に慎重に挿入し、横方向に1回切開します。膵島があらかじめ装填されたカニューレで角膜を慎重に持ち上げ、膵島をゆっくりと目に放出します。カニューレをゆっくりと引っ込め、アイジェルを目に塗ります。

10分後、まぶたを固定している鉗子を取り外し、目を通常の位置に戻します。2光子顕微鏡で移植されたヒト膵島のイメージングでは、ヘッドホルダープラットフォームを顕微鏡の下に置き、角膜とレンズの間の浸漬液としてアイゲルを眼に投与します。対物レンズの下に目を置き、テキスト原稿に記載されているように、埋め込まれた人間の島を画像化します。