腺房から乳管への化生誘導:3D ex vivo培養における腺房細胞から管細胞への分化を研究する方法

- 膵臓の外分泌部分は、腺房細胞と乳管細胞を構成します。腺房細胞は消化酵素を合成し、その内腔に分泌します。管細胞は、これらの酵素を小腸に送達するチューブを裏打ちします。遺伝的および環境的ストレスに適応するために、腺房細胞は、腺房間化生(ADM)と呼ばれる管状細胞への形態学的および機能的変換を受けます。

時には、ADMは膵臓がんの発症につながることがあります。ex vivoでADMを誘導するには、初代腺房細胞と氷上に保持されたコラーゲンゲルを組み合わせて冷却したコラーゲン細胞懸濁液を調製し、マトリックスの固化を防ぎます。懸濁液を試験用のADM刺激剤または目的の阻害剤で処理します。.

懸濁液を培養プレートに分配し、インキュベートしてコラーゲンの固化を促進し、細胞を内部に埋め込みます。次に、試験ADM刺激剤または目的の阻害剤を含む追加容量の培地を、固化したコラーゲン細胞層上にピペットで移します。

プレートを適切な時間インキュベートします。腺房から乳管への化生誘導により、錐体型の初代腺房細胞は分化転換して、管細胞様の形態を持つ細胞を形成します。次のプロトコルでは、TGF アルファを覚醒剤として使用して、初代マウス腺房細胞における腺房から乳管への化生の ex vivo 誘導を実証します。

- コラーゲンジェルを作るには、7ミリリットルの1型ラットテールコラーゲン、700マイクロリットルのウェイマウス培地の10倍、466.6マイクロリットルの0.34モルの水酸化ナトリウムを氷上の50ミリリットルのチューブに混ぜ合わせてコラーゲンジェルを作ります。50ミリリットルのチューブに、3時間のインキュベーション後に等量の細胞懸濁液とコラーゲンゲルを混ぜ合わせ、穏やかに混合します。2,000マイクロリットルを6ウェルプレートに1ウェルずつプレート化し、プレートを氷上に保ったまま、コラーゲン細胞層を均一に分布させるように渦巻く。

培地を固めるには、プレートを細胞培養インキュベーターで摂氏37度、二酸化炭素5%で30分間インキュベートします。次に、Waymouthの完全培地の1倍のウェルあたり1.5ミリリットルを、所望の刺激または阻害剤と共に加えます。

翌日に媒体を交換し、その後は一日おきに交換します。使用する刺激にもよりますが、腺房から乳管への化生 (ADM) は 3 日目から 5 日目の間に観察できます。