同所性ホモグラフト腫瘍移植:膵臓腫瘍マウスモデル作製技術

- 同所性同種腫瘍移植では、がん性ドナーからの腫瘍細胞または腫瘍断片が、腫瘍の組織型に一致する臓器または部位で同じ種に属するレシピエントに移植されます。まず、膵臓起源の細胞を含む腫瘍を有する麻酔ドナーマウスを採取することから始めます。その領域を滅菌し、腫瘍を外科的に採取します。ティッシュを洗って血液を取り除き、細かく刻みます。次に、麻酔を施したレシピエントマウスを右横位置に配置し、腹部を滅菌します。脾臓を外科的に露出させます。

次に、脾臓の下から膵臓の一部をそっと引き出します。腫瘍の断片を膵臓に置き、それらを一緒に縫合します。腹部を閉じ、マウスがケージ内で回復するのを待ちます。レシピエントマウスを毎日観察して、同所性膵臓腫瘍の成長を観察します。次のプロトコルでは、C57 black 6 ドナー マウスからの膵管腺癌ホモグラフトの同所性移植を C57 black 6 レシピエント マウスの膵臓に示します。

●C57黒6マウスの体重を天秤を用いてモニターします。また、担がんドナーマウスの腫瘍体積をキャリパー測定によりモニターします。プロトコルに従ってバイオハザードフードで動物を安楽死させた後、ヨードフォア綿棒を使用して腫瘍の周囲の皮膚を滅菌します。テキストプロトコルに詳述されているように腫瘍を外科的に切除した後、摂氏4度に予冷された20ミリリットルのPBSを含むシャーレに腫瘍を置きます。汚染された血液がある場合は、腫瘍を別のペトリ皿に移し、PBSで腫瘍を洗浄します。

腫瘍を半分に切ります。余分な皮膚、血管、石灰化、および/または壊死を取り除きます。.腫瘍の無傷の部分のみを選択し、滅菌済みの50ミリリットルの遠心分離チューブに入れます。薬理学研究のためにチューブを別の動物室に輸送する前に、20ミリリットルのPBSを追加してください。同所性移植の準備として、完全に麻酔をかけたマウスを実験ボード上の正しい横位置に固定します。脾臓の周りの皮膚をヨウ素で消毒し、次に75%エチルアルコールで脱ヨウ素化します。

脾臓の中点を見つけ、腹部に1センチメートルの垂直切開を行って脾臓を露出させます。先端が平らなピンセットを使用して脾臓の下の膵臓組織の一部を優しく引き出し、シードマウスからマウスホモグラフト腫瘍片を9-0吸収性外科用縫合糸でレシピエントマウスの膵臓に縫合します。ダブルシームによる6-0シルク縫合糸で腹部を閉じます。圧縮によってホメオスタシスを達成します。

腫瘍移植が終了した後、出血や腫瘍組織の漏出が発生しない限り、動物を暖かいケージに保管してください。動物が胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、動物を監視します。麻酔から完全に回復した後、動物を動物室に戻します。脾臓近くの腹部を触診して腫瘍発生マウスをモニターし、同所性腫瘍を有するマウスを選択します。