不可逆エレクトロポレーション:マウスの膵臓腫瘍を切除するための技術

- 不可逆的エレクトロポレーション(IRE)は、腫瘍に短い高電圧パルスの電流を流すことにより膵臓腫瘍を切除し、腫瘍細胞に永久的な損傷を引き起こす技術です。IREは、標的腫瘍領域に対して高い選択性とアクセス性を備えています。近くの健康な細胞に熱による損傷を引き起こさないため、有望な抗腫瘍療法となっています。

麻酔をかけたマウスを横に置き、腹腔を解剖して膵臓の表面に腫瘍を見つけます。次に、電極を使用して腫瘍部位を囲み、目的の時間だけ目的の電流パルスを投与します。特定の閾値を超える電流は、腫瘍細胞の細胞膜に永久的な細孔を引き起こし、細胞が恒常性の状態に戻るのを防ぎます。

これらの細孔により、細胞内の内容物が外部に出て、アポトーシスによる細胞死が徐々に進みます。次に、腹腔を閉じ、マウスをホームケージで回復させます。最後に、エレクトロポレーション後の腫瘍のサイズの縮小について膵臓を監視します。次のプロトコルでは、マウスの膵臓腫瘍を破壊するために不可逆的なエレクトロポレーションを行う方法を示します。

- 腫瘍が直径6ミリメートルに達する前に、麻酔をかけた動物を右側に置き、腫瘍にアクセスできるようにし、バリカンとアルコール綿棒を使用して腫瘍部位を清掃します。鉗子を使用して、腫瘍の真下の皮膚を持ち上げ、電極が腹腔を貫通しないように注意しながら、体と平行に皮膚に2つのニードルアレイ電極を挿入して腫瘍を囲みます。

エレクトロポレーターを100マイクロ秒のパルスを1ヘルツの周波数で1,500ボルト/センチメートルで合計150パルス供給するように設定し、フットペダルを使用してパルスを供給します。10パルスの各セットを10秒ずつ離して、各パルスセット間の熱放散を可能にします。

- 筋肉のけいれんはIRE送達中に発生し、最初のパルスセット中により顕著になるため、電極がまだ目的の位置に存在し、各パルスセットの後に動物がまだ鎮静されていることを確認してください。

- 200秒以内の投与後、電極を取り外し、エレクトロポレーターに表示されているように実際に供給される電圧を記録します。次に、マウスをケージに戻します。同所性腫瘍のIREの場合、腫瘍移植後8〜10日で、鈍い鼻鉗子を使用して鉗子で腫瘍を外部化し、ピンセットトロードのプラチナ電極で腫瘍をしっかりと捕捉します。

示したようにエレクトロポレーションパルスを送達し、最後のパルスセットで腫瘍を外部化したままにして、出血の兆候がないか監視します。次に、腫瘍を腹腔に戻し、示されているように切開部を閉じ、動物が完全に回復するまで動物を監視します。