蛍光同所性マウスモデル:がん細胞を発現するGFPをマウスに移植し、腫瘍の進行をin vivoで評価する

- 緑色蛍光タンパク質またはGFPを発現するがん細胞は、非侵襲的な光学イメージングにより腫瘍の増殖と転移をモニタリングすることができます。通常、これらの細胞を同所性モデルに移植することで、腫瘍微小環境を再現し、腫瘍細胞とその周囲との相互作用を模倣します。

まず、麻酔をかけたマウスを温かい加熱パッドの上に置きます。次に、鼻を鼻マスクに挿入して、酸素と麻酔薬であるイソフルランを供給します。ハサミを使って小さな切開をし、ティッシュをカットします。膵臓と一緒に脾臓をそっと引き出し、膵臓の尾を見つけます。

蛍光がん細胞懸濁液をシリンジに装填し、膵臓の尾部に静かに注入します。注入部位に表面的な気泡が現れ、移植が成功したことを確認します。臓器を体腔に戻し、滅菌縫合糸を使用して切開部を閉じます。次に、マウスをケージに戻し、回復するまで監視します。

所望の期間が経過した後、マウスをイメージングチャンバーに入れ、画像を撮影する。光線はがん細胞に当たり、GFPを励起し、GFPは緑色の蛍光を発します。以下のプロトコールでは、同所性マウスモデルにGFP発現膵臓がん細胞の外科的移植を行います。

細胞を移植するには、まず、麻酔をかけたマウスの目に軟膏を塗布し、滅菌ドレープで覆われた加熱パッドの上に動物を置きます。次に、3つのヨウ素スクラブで動物の側面を優しく消毒し、続いて3つの70%エタノールリンスを洗います。つま先の挟み込みに対する反応がないことを確認した後、調製した細胞を約200マイクロリットルを、18ゲージの針を備えた予冷済みの1ミリリットルTBシリンジにロードします。

18ゲージの針を27ゲージの針に交換し、細胞を氷上に戻します。次に、腹部の左上の象限にある脾臓の一般的な領域を見つけます。鉗子を使って脾臓の上の皮膚をつまみ、約1cm切開してポケットを作ります。次に、脾臓の上で平滑筋をつまみ、組織を切開して腹腔にアクセスします。

次に、脾臓の尾側端をそっとつかみ、体腔から引き出します。湿った滅菌綿棒を使用して、脾臓の端に付着した膵臓を広げて、膵臓の尾を見つけます。50マイクロリットルの細胞を膵臓の尾部に送達します。次に、針をゆっくりと膵臓から回転させます。

成功した移植は、漏れのない表面的な泡のように見えます。臓器を腹腔に戻し、すべてを筋肉と皮膚で囲みます。次に、6-0縫合糸を使用して切開部を閉じます。その後、動物にケトプロフェンを注射し、完全に回復するまで監視します。適切な実験時点で、市販の小動物画像システムを使用して、麻酔下での生きた動物の腫瘍増殖を画像化し、適切な励起フィルターと蛍光フィルターを選択します。

次に、白色光のみを使用して初期画像を取得します。動物を同じ位置に保持し、GFPフィルターに切り替えて2番目の画像を取得します。腫瘍の成長を解析するには、白色画像と蛍光画像を重ね合わせて、腫瘍細胞の蛍光領域と強度を評価します。