生物発光性同所性膵臓癌モデルマウス:マウスの癌進行をモニターするための非侵襲的技術

- 生物発光イメージングにより、がん細胞を非侵襲的に追跡し、動物腫瘍モデル内でのがん細胞の分布を研究することができます。マウスモデルを生成するには、麻酔をかけたマウスを採取し、腹部を滅菌します。脾臓を見つけるために外科的切開を行います。腹腔から引き出し、下にある膵臓を露出させます。

次に、適切なヒドロゲルマトリックスに混合した形質導入膵臓癌細胞の冷却懸濁液をマウスの膵臓に注入する。これらの遺伝子改変細胞は、ルシフェラーゼ酵素を発現します。シリンジを所定の位置に保持して、細胞マトリックス懸濁液を固化させ、漏れを最小限に抑えます。

臓器を腹腔に戻し、切開部を縫合します。マウスが回復するのを待ちます。腫瘍が発生したら、マウスに麻酔をかけ、その尾静脈に生物発光基質溶液を注入します。分子がルシフェラーゼ発現細胞を含む腫瘍部位に到達するのを待ちます。

細胞内では、ルシフェラーゼ酵素が基質分子の酸化を触媒し、発光をもたらします。マウスを生物発光イメージングチャンバーに入れて腫瘍の画像を撮影し、腫瘍の成長ダイナミクスを研究します。以下のプロトコールでは、ルシフェラーゼ発現膵臓がん細胞を注入することにより、生物発光同所性膵臓がんマウスモデルの生成を示します。

- 滅菌手術器具を使用して、正中線から横方向に左に約2ミリメートルの皮膚を1.5センチメートル切開します。次に、下にある腹筋に1.5センチの切開を行います。次に、滅菌鉗子を使用して脾臓の位置を特定し、腹腔から静かに取り出します。滅菌綿棒に沿って脾臓を固定し、下にある膵臓を露出させます。次に、脾臓に隣接する膵臓の尾を見つけます。

マトリゲル細胞懸濁液を再懸濁し、膵臓の尾部に20マイクロリットルを注入します。注射後、マトリゲルが固まるまでシリンジを30〜60秒間所定の位置に保持します。.この重要なステップにより、セルの漏れが最小限に抑えられます。

針を抜いた後、注入部位を検査して漏れが発生していないことを確認します。次に、脾臓と膵臓を腹腔に戻します。マウスの腹部の筋肉組織を、連続縫合を使用して丸い針で吸収性の編組4-0縫合

糸で閉じます。

次に、非吸収性のモノフィラメント、6-0縫合糸で外部皮膚を連続縫合糸を使用して切断針で閉じ、ベタジンを塗布します。次に、マウスを吸入麻酔薬から取り出し、術後鎮痛薬として、1キログラムあたり0.05〜0.1ミリグラムのブプレノルフィンを皮下に注射します。マウスが摂氏37度の加熱パッドに置かれたケージで回復し、食べ物と水に自由にアクセスできるようにします。

手術後の最初の数日間は、マウスを注意深く監視し続けます。マウスが猫背や運動能力の低下などの痛みの兆候を示した場合、ブプレノルフィンは36時間にわたって12時間ごとに皮下投与することができます。.手術部位が7〜10日で治癒した後、マウスに麻酔を