Name: 春雨とカッペリーニの処理試験：ラットとマウスの器用な前足の機能の簡単な定量的指標 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-21T17:24:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: 学ぶ、ラットとマウスの前足器用さを定量化する春雨・カッペリーニ処理試験の手法。脳損傷や加齢による運動機能変化を評価し、神経科学研究における標準的な行動解析法として活用できます。

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著者は、カッペリーニの開発の支援のために博士はディアナアドキンス、博士マーティウッドリー、コールの夫、モニカA.マルドナド、ジャッキーケイン、と博士はティムSchallert春雨処理のテストを開発の支援のため、およびLuチョウに感謝しますテストの処理。 NIH - NINDS（NS05689）とNIH - NIA（1F31AG034032 - 01）からの補助金によって支え。

1。テストの開始の準備<ol><li>未調理のパスタの部分は、カミソリの刃を使用して長さに切断されています。ラットの場合は、スキナーブランドビーフンパスタ（1.5 mmの直径）は7cmの長さにカットされます。マウスの場合は、DeCeccoブランドカペッリーニパスタ（1.0 mmの直径が）2.6 cmの長さ（図1C）にカットされます。パスタのブランドは取り扱い方法に影響を与える可能性テクスチャと直径、それぞれに異なるため、それがパスタの単一のソースが繰り返しテストに使用することをお勧めします。 </li><li>新しいもの嫌いの応答を克服し、ハンドリングのスキルを確立するために、動物は、試験前に自分のホームケージでのパスタの部分に数週間で数回公開されています。 （通常は、露出の5〜10日、約4枚ずつ時間は、十分です。） </li><li>テストはホームケージ以外のチャンバー内に投与される場合、または自宅のケージがテストのために移動した場合、テスト環境で食べることに慣れが提供されています。 （動物はすぐにこの環境でパスタを食べれるまでには通常、3〜5セッションを取ります。） </li><li>動物が熱心にパスタを受け入れるした後でも、大きなカメラは、テストエリアの隣に移動されたとき、彼らは急に寡黙になることができます。馴化セッションのいずれかまたは複数のテスト環境の前にカメラを配置しておくと便利です。 </li><li>ほとんどの動物が行動するので、パスタが非常に嗜好性であるかのように、それは食品試験前にそれらを制限することは必須ではありません。しかし、食品の除去は、数時間前、または一晩実験者とカメラの前で食べやすく、それらがテストの時に補償されないことを保証することができる。 </li><li>食べる時にパスタの部分を分割すると裁判が無効になります。私達は動物を試験に用いたものよりも長いピースを与えれない場合は、この習慣が大幅に回避される発見した。 </li><li>テストセッションのため、パスタの部分は厚紙のテンプレート（春雨とカペッリーニ鎖で0.86センチメートル刻みで1.75センチメートルの刻み）を使用して特定の間隔で微細先端のマーカーでマークされています。これは、食べる時にパスタの鎖の動きの可視化を容易にします。 </li></ol> 2。設定したテスト<ol><li>動物は、ホームケージまたは無傷の、透明な壁を持つ別の装置のいずれかでテストされるべきである、と、テストセッション中にそれらのcagematesから分離する必要があります。 </li><li>ラットを実践実験（アラリら 、2008）によってリアルタイムにテストすることができるものの、定量データがスローモーションビデオの再生中に収集できるように、ビデオ録画によって促進される。我々は彼らの足と速い動きの小さいサイズのため、スローモーションのビデオを再生することなくマウスの前足の動きを確実に定量化することが可能見つかっていない。 </li><li>高フレームレートと十分なズーム付きビデオカメラが使用されます。我々は、通常の部屋の照明条件で少なくとも420 S - 1のシャッタースピードに設定されて16倍ズームレンズをキヤノンXL1Sのカメラを使用してください。パンチルト頭と車輪三脚の使用は、カメラの位置決めを容易にします。 </li><li>ラットは一般的にパスタを食べるために彼らのふんぞり返っていられるほど背筋を伸ばして座ると足が最も簡単に軽く上向きの角度（図1A）で約チャンバーの床のレベルに位置づけカメラで表示されています。削りくずとケージにテストする場合、いくつかの削りくずの除去は、ビューを最適化するために役に立つかもしれません。 </li><li>マウスはラットに比べ角度の多くで一部を保持し、パスタを食べる時に前方に曲げる傾向がある。このように、オープンフロアでテストチャンバーは、ミラーの上に配置されます。カメラが床面よりわずかに高いレベルに配置され、ミラーの足（図の1B）の反射に焦点を下向きに傾斜している。一面のミラーを使用することは、ビデオ再生のための足の明瞭度を改善。 </li><li>パスタピースのそれぞれの一口は、このように、オーディオの録音が食べることを検証するために便利です、音です。 </li></ol> 3。パスタ処理試験の管理<ol><li>テストセッションは、試験ごとに食べoneパスタ片と、シーケンシャル試験で構成されています。我々は通常、ラットとマウスの3〜4試験4〜5の試験からのデータを記録する。 </li><li>ビデオ撮影の前に、パスタの部分は食べることを開始し、適切なカメラビューに動物を移動するためにチャンバ内に配置されます。 </li><li>動物がカメラに直面すると集中し、前肢と、すべての数字の両方で離散的な調整結果を表示する（〜10 - 12X）十分にズームすることが必要です。両方の足の指の関節は表示可能でなければなりません。このカメラで、少なくとも、我々は、関心領域上に狭めるために、唯一の前に裁判の開始にオートフォーカス機能を使用すると便利です。私たちは、その後、マニュアルフォーカスに切り替える。 </li><li>とすぐに動物とカメラが位置しているとして、一審が開始されます。作品は、直接動物とレコーディングの前にドロップまたはdangledれる前に食べて発症に開始されます。 </li><li>その後、試験は即座に連続して与えられます。動物が離れて移動しないようにそれは、試験間の遅延を最小限にすることをお勧め最適な視聴位置から。 </li><li>足がサイドに表示されているか、フォーカスが失われている試験は採点されていません。 </li><li>テストセッションは、事前と事後治療的パターン（。。アラリら 、2008など、中枢神経損傷後の回復）を文書化する、例えば、日間で繰り返すことができます。 </li><li>課題は、カメラに対して相対的な好みの位置に食べるために動物を得てすることができます。それは試験前に数分間、カメラの存在にカメラ嫌いの動物を慣らすことが必要な場合があります。動物は、しばしば理想的な地域でパスタを落としたり、ダングリングによって所定の位置になだめすることができます。与えられた要素の数が満腹感を避けるために最小化されるべきであるけれども、それは、この目的の位置を達成するためにいくつかの部分が必要になる場合があります。 </li><li>いくつかのラットのシーケンシャルテストのために、我々は真ん中の輪三脚のカメラで、円の中に一度に彼らのケージの数を設定すると便利な発見した。作品は、それぞれのケージの理想的な領域にドロップされ、カメラは、最初の適切な位置で食べ始まるラットに移動。これは、低速（位置に食べて）ラットのためのより多くの時間は、カメラと実験者の存在に慣れになることができますし、それらはまた、より高速なラットの痛烈な音で食べるために刺激されることがあります。 </li></ol> 4。前足の調整の定量的なビデオ分析と食べる時間<ol><li>食べる時に前足の調整の分析では、ラットの中枢神経系の損傷後の片側に障害の影響を受けやすいシンプルな定量的な指標です（。アラリら 、2008; Whishaw＆コールズ、1996; Whishaw ら、1997。）及び加齢関連の変更にマウスで（テナントら 、2009）。 </li><li>試験の定量化部分は、パスタの部分が最初に口の中に置かれるときに始まり、パスタの最後は足から放出され、口の中に消えているときに終了します。 </li><li>ビデオ再生は、（リアルタイムの〜50％）鈍化され、または必要に応じてコマ送りを調整を識別するために、使用されています。 </li><li>調整するたびに足リリースと再コンタクトパスタピース、改革が一部で足のホールドがある場合、または数字の拡張子、屈曲または外転、内転（図2）があるかを数えている。各調整は左右の足のために別々に記録されます。 </li><li>足は足のホールドの数字または再配置のない動きとパスタの部分全体にスライドするときの調整はカウントされません 。足の動きはそれがパスタの部分（すなわち、作品の横の動き）と接触していないときにもカウントされません。 </li><li>食べる時間も発症を食べるとパスタが口の中に消えると終わるで始まる、各試験のために記録されます。我々は、ビデオ再生の表示機能を使用して時間を記録するが、それはまた、通常速度の再生中にストップウォッチで記録することができます。 </li><li>動物が食べることで一時停止しますが、一部のホールドを保持している場合、一時停止時間は合計時間から減算されます。食べるのポーズは、可聴痛烈に口または中止の外部分のどちらかの動きによって明らかです。 </li><li>短い断片は、パターンを扱う変更するための試験は、射精の任意の部分の間に、足のビューが隠されている場合の分析から除外、または動物の一部を破るとされる。 </li><li>一部のラットとマウスは一貫して他の複数の足でより多くの調整を行います。怪我は、事前に傷害試験でより多くの調整を行った足（アラリら 、2008）に影響を与える場合一方的な中枢神経系の傷害モデルでは、片側に障害がより敏感に検出されます。 </li><li>マウスは時々食べるの途中でパスタの部分を削除し、そして、短い休憩の後、それを拾うと食べ続ける。これは、一日の最後の裁判で食べる上で部分的な満腹感とフォーカスの喪失が原因の可能性が最も一般的です。これはさらにそのままマウスで共通なので、我々はこれらの試験を省略しないでください。しかし、作品が削除されている時間は合計食べる時間から減算されます。 </li><li>無傷のラットでは、作品をドロップすると、しばしば非常に遅れたり、欠席さを食べるの非定型と再開です。そのような試験は、調整や食事時間の分析から除外されています。 </li><li>前に食べて発症への調整はカウントされません。プリ食い処理の動作は、CNSの損傷に影響されます（例えば、Whishaw ら 、1992;。Whishaw ら 、1986。）、しかし、我々はまだこの時期に前足の調整のための定量的な方法を拡張していない。 </li><li>これらのデータは、以下のようにまとめることができる：（a）個あたり足あたりの調整、個につき（b）の平均摂食時間との調整（調整/時間を食べる）の（c）の速度の平均数。 </li></ol> 5。非定型処理のパターンのビデオ分析<ol><li>非定型処理のパターンは異なる中枢神経系損傷ラットの種類（アラリら 、2008）とrecordiを区別することができますngのこれらの行動は、補足的な分析として有用である。 </li><li>彼らが頻繁に無傷の動物で認められた場合の処理​​パターンが非定型とみなされます。インタクトな動物は通常、1つの足で食べ始める、"把握の足は"、パスタに低く置かれ、"ガイドの足は、"次に口（図3A、C）の近くに配置されます。同じ足では通常、すべての試験で把握の足です。ラットは多くの場合、最初はパスタの長さに沿って遠く離れて足を置き、作品が短くとして、それらを一緒に移動する。マウスは、通常、両方の足を把握し、ガイドの手足さえ食べるの冒頭で、お互いに近い関係に開催されたと、口に近い位置。両方の種において、足はより対称的な位置、横に並べたり、ピースが非常に短い場合、介在する数字がある（図3B、D）に移動します。両方の足を食べる時に、指針となる保有またはパスタを推進するために継続的に使用されています。 </li><li>ラットとマウスの足の位置における非定型パターンは、次のとおりです。パスタの部分が長い場合（A.）は、対称ホールドで、一緒に足を置くこと（半分以上元の長さ）、（B.）に足を移動する失敗作品は完全に消費し、（c）とする前に、対称の位置は、食べるの真っ只中にガイドと把握の手足の位置を切り替える。 </li><li>ラットとマウスの二つの追加の非定型的な動作は以下のとおりです（A.）食べる（"通信に失敗した"）と（B.）を介してパスタを引っ張って口を使用中に長時間用の足とパスタの部分を連絡する失敗前足（"口が引っ張って"）、それらを再配置する。 </li><li>二つの動作は、ラットに対する非定型と考えられるが、マウスのための典型的なものされています：（A.）猫背の姿勢と（B.）始まるを食べた後にパスタの部分を落とす。しかし、マウスのドロップの頻度は、中枢神経系の損傷後に増加する可能性があります。従って、我々は両方の種でドロップ周波数を記録。 </li><li>他の非定型行動はラット片側線条体ドーパミンの枯渇のモデルで確認されています：把握の肢が食べる時に動かない、堅い位置に保持されている（A.）"鉄のグリップ"、、（B.）は、ガイドの足の動きを繰り返す堅い把握の足、および（℃）とパスタが口の中に傾いていると頭の極端な傾斜の周りに（。アラリら 、2008; Whishaw らも参照してください1997年）。 </li><li>我々は、老齢マウスで頻繁に口の中にパスタを移動するための非効果的な調整を行うことを観察した。このように、口の中にパスタピースの目に見える動きでは発生しないの調整が別々に記録されます。 </li><li>他のすべての非定型行動は試験ごとに一度記録されている間、スイッチングガイドと把握手足、お問い合わせに失敗、ドロップ、および引っ張り口は、発生ごとに記録されます。 </li></ol> 6。代表的な結果ビデオ分析の結果は、試験ごとに各足の調整の数とそれぞれのパスタの部分を食べるために時間を含める必要があります。感覚運動皮質病変や脳虚血によるラットの結果から、動物が障害（コントラへの病変）肢、傷害後の1か月間だけ耐える効果がより少ない調整を​​行うことを示している。対側肢との調整の減少と同側の肢（アラリら 、2008）との調整の増加の両方の一方的なドーパミンの枯渇の結果。マウスからの結果は、高齢の動物は、若い成体マウス（テナントら 、2009）と比較して、パスタの部分を食べるのに時間がかかる、と口の中にパスタの発展につながるしないより多くの調整を行うことを示している。これらのテストの分析はまた、非定型処理の動作の観察を含めることができます。線条体損傷と中大脳動脈の閉塞はさらに、異常な食行動（アラリら 、2008）の頻度の増加をもたらした。 <img src="/files/ftp_upload/2076/2076fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1（A）ラット及び（B）マウスのパスタの取り扱い姿勢。ラットは、足の動きを表示するためにマウスの下の鏡の配置を必要と、パスタの上のマウスの予感しながら、ふんぞり返っていられるほど後ろに座ることに注意してください。 （C）パスタの部分の例としては、テストのために準備。 <img src="/files/ftp_upload/2076/2076fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2（AC）ラット及び（DF）マウスの例の前足の調整。最初のパネルは調整前の動物を示し、中央のパネルには、調整足（s）を示すアスタリスク（*）で、前足の調整を示して、そして最後のパネルは、パスタピースの交換を示しています。 <img src="/files/ftp_upload/2076/2076fig3.jpg" alt="図3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"> 図3。ガイドとパスタが（、C）の長と（B、D）短い場合、ラットとマウスの四肢の位置を把握する。

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</ol>

利害の衝突は宣言されません。

このビデオでは、我々はそれぞれ、春雨とカッペリーニ処理試験がラットとマウスで行われている方法を示します。これらのテストは、脳の運動系の損傷後、またはエージング中、通常の動物で足と桁の機能を研究するために、単純な、定量的な方法です。足と研究者がそれぞれの足で行った調整だけでなく、実験的に誘発中枢神経系の損傷後の見られる異常な行動を観察し定量化するための調理パスタの小さな断片を処理するために使用される数字の動きのスローモーションビデオ分析。テストセッションは、異なる日に繰り返し行われ、ほとんどの動物は、数分以内にセッションのすべての試験を完了することができます。したがって、テストは、大規模なテストのバッテリーや実験計画への組み込みに適しています。テストはまた（Xu ら 、2009）運動技能の学習の研究に使用されるが、ここでは、時間をかけて確立されたスキルのアッセイの変化へのプロトコルを提示することができます。 現在、熟練した広範囲のテストは、ラットの器用な前肢の機能の最も一般的に使用されるテストです（例えば、Whishaw ら 、1986;。Ballermann ら 、2001;。。モントーヤら 、1991）およびマウス（ファー＆Whishaw、2002;テナント＆ジョーンズ、2009;ベアードら 、2001）。。パスタの処理は両手作業であるのに対し、到達テストは、各肢の隔離されたテストを許可する。それにもかかわらず、テストでは、両方のテストのために熟練した前足の機能とスキルの獲得の障害に対する感受性に類似している運動野（Xu ら 、2009）の前肢表現の可塑性を伴います。我々の経験では、到達テストはより複雑で実行するために骨の折れるであり、いくつかの実験的な質問については、本試験では、より効率的な代替手段を提供することがあります。しかし、ここで説明したテストとは異なり、熟練到達テストは数十年の使用（ピーターソン、1934）にされていると、彼らは今非常に敏感な対策とテストパラメータ（Ballermann ら 、2001の多目的なセットを含んでいる;。ファー＆Whishaw、2002;モントーヤら、1991;。Whishawら、1992）。。対照的に、春雨とカッペリーニ処理試験は、ラットの巧みな食品の処理動作（Whishawとコールズ、1996）の比較的最近の特徴付けから延びる。管理と分析の両方で、これらのテストは間違いなく、より正確に細かい数字と両手の動きのパターンを定量化し、舌、口や顎の協調運動を定量化する、など、さらに洗練された、拡張可能性があります。

春雨とカッペリーニの処理試験：ラットとマウスの器用な前足の機能の簡単な定量的指標

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

行動を食べる齧歯類の前の特徴付けは、食品のピースを操作するための協調前足の動きを使用することを明らかにした。我々は、片側に障害と年齢依存性の変化に敏感な前足の器用さの単純な定量的尺度を開発するには、この作業によって拡張されています。げっ歯類は、熟練した前足と彼らは熱心に消費する細いパスタの部分を、管理するための数字の動きを学びます。我々は以前、ラットでは春雨の取り扱いを定量化するための方法を記載し、措置は一方的な虚血性病変、中大脳動脈の閉塞および片側線条体ドーパミンの枯渇[アルレッド、RP、アドキンス、DL、ウッドリー、MTから生じる前肢障害に対して非常に敏感であることが示されている夫、LC、マルドナドMA、ケイン、JR、Schallert、T.＆ジョーンズ、TA春雨処理試験：ラットの器用な前足の機能の簡単な定量的尺度。<em&gt; J. Neurosci。の方法</em&gt; 170、229〜244（2008）]。ここでは、ラットでのこのテストのためのより詳細なプロトコールを提示し、マウス、カッペリーニ処理テストのための新開発のバージョンと比較します。ラットとマウスは、足の動きのビューを最適化するために置かカメラで、それぞれ、未調理麺やカッペリーニパスタの短い長さを処理しながら録画しています。スローモーションビデオの再生が開始さを食べた後のパスタの部分で、足の、または任意の桁数の任意の明確な取り外しおよび交換のように定義されている前足の調整の識別、することができます。個あたり前足の調整は、各テストセッションあたりの試行の平均値です。繰り返されたテストは、時間をかけて前足の器用さの変化に敏感な定量分析を可能にします。事前テスト慣れとハンドリングの練習のためのプロトコルだけでなく、非定型処理のパターンを特徴づけるための手順は、記載されています。ラットとマウスが若干異なるパスタ処理テストを実行するので、これらのテストの管理および採点の種特異的な違いが強調表示されます。すべての動物の使用は、オースティンの動物実験委員会のテキサス州立大学によって承認されたプロトコールに従った。

春雨と前足の器用さのカッペリーニ処理テストは、巧みな前足と数字の動きを使って食料品を操作するための齧歯類の自然な傾斜を利用しています。未調理の乾燥パスタの短い鎖を処理している動物はビデオ撮影されています。スローモーションビデオの再生には、前足の調整の定量化が可能になります。

げっ歯類の摂食行動に関するこれまでの特性解析により、彼らが食物片を操作するために前肢を協調的に動かすことが明らかになっています。我々はこれを拡張し……

このビデオでは、食品取り扱い時における巧緻性の低下を定量化する手順を実演します。げっgoed動物に対し、まずホームケージ内で、次に試験環境下で、短い長さの生パスタを提示します。試験環境では、動物の前肢の動きをビデオ撮影します。パスタを食べている間の各前肢による調整動作を特定し、スローモーションビデオ再生を用いてカウントします。ビデオ解析を通じて、非定型なハンドリング行動を特定します。特定された結果から、摂食時に食物を操作する動作を定量化することで、脳損傷後または加齢に伴う巧緻性の低下という4つの変化が示されます。テキサス大学オースティン校心理学部のTeresa Jones研究室のKelly Tenetです。そして、同じくJones研究室のRNAiです。本日は、ラットにおけるVermicelliハンドリングテストと、マウスにおけるCAPIハンドリングテストの手順について解説します。当研究室では、脳損傷後や加齢に伴い、食物を扱う際の巧緻性がどのように変化するかを研究するために、これらの手法を用いています。それでは、始めていきましょう。テスト用のパスタを準備するために、極細ペンを用い、カードストックのテンプレートを使用して、DeChecoブランドおよびSkinnerブランドのカペッリーニ（CAPI）とヴェルミチェッリに、特定の等間隔で印を付けます。カペッリーニには0.86 centimeter間隔で、ヴェルミチェッリには1.75 centimeter間隔で印を付けます。これにより、パスタのストランドの動きを視覚的に確認しやすくなります。給餌の際、カッペリーニはカミソリで2.6 cmの長さに切り、マウスに使用します。ラットに使用する場合は、春雨を7 cmの長さに切ります。パスタのブランドによって質感や直径が異なり、ハンドリングの方法に影響を与える可能性があるため、繰り返し試験を行う場合は単一のパスタを使用することが推奨されます。ネオフォビア（新奇恐怖）反応を克服し、ハンドリングの習熟度を高めるため、試験の数週間前からホームケージ内で動物にパスタ片を提示してください。1回につき動物1匹あたり約4片を提示し、5〜10日間行うことで十分です。馴化させた動物であっても、カメラの前では摂食をためらうことがあります。そのため、1回以上の馴化セッションの間に、テストエリアの前にカメラを設置してください。動物にパスタ片を提示した後、動物をテスト環境に入れ、そこで摂食することに馴化させます。一般的に、この環境下で動物はパスタを容易に摂食します。準備を整え、3回から5回の摂食セッションを行った後、ラットおよびマウスにおけるパスタハンドリング試験の実施方法を確認しましょう。テストセッションは、1回につき1本のパスタを摂食させる連続したトライアルで構成されます。1セッションは通常、ラット1匹につき4〜5回、マウス1匹につき3〜4回の試行で構成されます。ラットは通常、後肢で体を起こした状態でパスタを食べるため、牽引動作を最も容易に観察できます。カメラをチャンバーの床面とほぼ同じ高さに設置し、わずかに上向きの角度に調整すると、マウスは前方に身をかがめ、パスタを斜めに保持する傾向があります。このように、底面が開いたテストチャンバーを鏡の上に設置します。カメラは底面よりもわずかに高い位置に配置し、鏡に映る足の反射に焦点を合わせるように下向きに角度を調整します。ビデオ撮影を開始する前に、パスタを1片テストチャンバーの中に入れます。摂食を開始させ、動物を適切なカメラの視野に入れるには、動物をカメラに向かせ、カメラを10から12倍に十分にズームする必要があります。4つの足およびすべての指の個々の調整を確認するためには、動物とカメラの位置を合わせて最初の試行を開始する時点で、両足の指関節が見えている必要があります。または、パスタの一片を動物の目の前に直接ぶら下げて記録を開始します。摂食が始まる前、パスタを噛む音が聞こえます。したがって、摂食を確認するためには音声録音が有用です。残りの試行を継続してください。同様に、動物が最適な観察位置から離れないよう、試行間の時間を最小限にすることが最善です。次に、4つの不適切な調整（poor adjustments）と摂食時間の定量的ビデオ解析方法について説明します。摂食中の4つの不適切な調整の解析は、ラットにおける中枢神経系（CNS）損傷後の側性機能障害や、マウスにおける加齢に伴う変化に敏感な簡便な定量的指標です。解析中、ビデオ再生は実時間の約50%に低速化されるか、必要に応じてフレーム単位の送りが行われ、調整動作を特定します。定量化の対象となる試行期間は、ペーストが最初に口に入れられた時点から始まり、ペーストの最後の一部が孔から離れて口の中に消失した時点で終了します。孔が過去の破片を離し、再び接触するたびに、1回の調整としてカウントします。孔のホールドが再形成された場合、または指の伸展・屈曲や外転が発生した場合は、左右それぞれの孔について個別に調整を記録します。指の動きやハンドホールドの再配置を伴わず、孔がマスターピース上を滑った場合は、調整としてカウントしません。ペレットがペースト部分に接触していない時の貧困層の動きはカウントしません。摂食時間は、開始時からペーストが口の中に消えるまでを各試行について記録します。動物が摂食を一時停止してもペレットを保持し続けている場合は、その停止時間を合計時間から差し引きます。なお、そのような試行は解析から除外されます。摂食のどの段階においても、一時停止した様子が見えなくなった場合、または動物が破片を壊した場合（破片が短くなると取り扱いパターンが変わるため）、マウスは摂食中にパスタを落とし、短い休止時間の後にそれを拾い上げて摂食を再開することがあります。これは、注意散漫や部分的な飽食によるものである可能性があります。速やかに摂食が再開された場合、これらの試行は除外しませんが、破片を落としていた時間を総摂食時間から差し引きます。ビデオ解析から得られる測定値は、孔1つあたりおよび個体1つあたりの平均調整回数、個体1つあたりの平均摂食時間、および調整率です。次に、いくつかの非定型的なハンドリングパターンについて見ていきましょう。非定型的なハンドリングパターンは、異なる中枢神経系（CNS）損傷の種類を区別し、加齢に伴う変化を明らかにすることができます。また、これらの行動を記録することは、補完的な解析として有用です。通常、健常動物は、パスタの一方の端を下に、もう一方の端を口の近くに配置して摂食を開始します。POSは、通常、すべての試行において同様の位置を取ります。非定型的な行動として、動物が2本の肢の位置を入れ替えることがあります。正常な動物が食事をしている最中には、餌の断片が非常に短い場合、孔はより対称的な位置に並ぶか、あるいは指が間に挟まった状態で移動します。中枢神経系（CNS）に損傷がある一部の動物では、この動作ができず、餌の断片が長い場合でも、両方の極を対称的に保持して合わせて置く傾向があります。ラットおよびマウスにおけるその他の非定型的な行動として、摂食中に長時間にわたってパスタ片を一方の穴に接触させないことや、口を使ってパスタを穴から引き抜き、位置を調整させることが挙げられます。前傾姿勢や摂食開始後のパスタの脱落など、ラットでは非定型とされるがマウスでは一般的とされる行動もあります。しかし、中枢神経系（CNS）損傷後にマウスの脱落頻度が増加する可能性があるため、両種において脱落頻度を記録することが有用です。高齢のマウスは、パスタの前進につながらない調整動作を行うことがよくあります。これは、調整によってパスタが口の中に移動したことが明確に認められない場合に、その都度カウントされます。それでは、ハンドリングテストの結果をいくつか示します。感覚運動皮質に病変のあるラットを用いた解析では、病変側（対側）の牽引に対しては、健常側（同側）よりも調整回数が少なくなることが示されています。片側の中大脳動脈閉塞は、対側肢による調整の減少と、非定型的な操作行動の増加の両方を引き起こします。マウスを用いたビデオ解析では、若年成体マウスと比較して、高齢マウスはパスタ片を食べるのに時間がかかり、パスタを口に運ぶことにつながらない調整回数が多いことが示されています。ラットおよびマウスにおけるパスタ操作行動の定量化方法について説明しました。この手順を行う際は、パスタの調整が正確に識別されているかを確認するために、評価者間信頼性をチェックすることが重要です。以上になります。ご視聴ありがとうございました。実験の成功をお祈りいたします。

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神経科学

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