Name: トランスジェニックゼブラフィッシュの多色タイムラプスイメージング：標的神経細胞のアブレーションによって活性化を可視化網膜幹細胞 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-20T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: 学ぶ多色共焦点タイムラプスイメージングと標的神経細胞アブレーションを用いたトランスジェニックゼブラフィッシュの神経回路機能と細胞特異的再生メカニズムの解析手法。

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我々は、博士に感謝します。原稿上で有益なコメントをメーラセナとジョナサンマティアス。我々は、博士に感謝する。トランスジェニック系統を提供するためのマイケルパーソンズ、パメラレイモンド、そしてレイチェルウォン。動物実験はプロトコル07-12-003を承認MCG IACUCによって定められたガイドラインおよび規制に準拠して行った* B.この作品は、JSMにNIH R21 MH083614とダイムバジルOコナースターターScholarの賞の月によってサポートされていました

<ol><li>Köster, R. W., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-lapse+microscopy+of+brain+development%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Time-lapse microscopy of brain development.</a> Methods Cell Biol. 76, 207-235 (2004).</li>
<li>Mumm, J. S., Williams, P. R., Godinho, L., Koerber, A., Pittman, A. J., Roeser, T., Chien, C. B., Baier, H., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+reveals+dendritic+targeting+of+laminated+afferents+by+zebrafish+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging reveals dendritic targeting of laminated afferents by zebrafish retinal ganglion cells.</a> Neuron. 52, 609-621 (2006).</li>
<li>Curado, S., Anderson, R. M., Jungblut, B., Mumm, J., Schroeter, E., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+targeted+cell+ablation+in+zebrafish%3A+a+new+tool+for+regeneration+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Conditional targeted cell ablation in zebrafish: a new tool for regeneration studies.</a> Dev Dyn. 236, 1025-1035 (2007).</li>
<li>Ren, J. Q., McCarthy, W. R., Zhang, H., Adolph, A. R., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+visual+responses+of+wild-type+and+hypopigmented+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral visual responses of wild-type and hypopigmented zebrafish.</a> Vision Res. 42, 293-299 (2002).</li>
<li>Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+ablation+of+beta+cells+in+the+embryonic+zebrafish+pancreas+using+E.+Coli+nitroreductase%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. Coli nitroreductase.</a> Mech Dev. 124, 218-229 (2007).</li>
<li>Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+cell+motility+and+actin+cytoskeleton+of+individual+neurons+and+neural+crest+cells+in%0A++zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Live imaging of cell motility and actin cytoskeleton of individual neurons and neural crest cells in
 zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>O'Brien, G. S., Rieger, S., Martin, S. M., Cavanaugh, A. M., Portera-Cailliau, C., Sagasti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+axotomy+and+time-lapse+confocal+imaging+in+live+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
<li>Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+the+zebrafish+embryonic+brain+by%0A++confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Live imaging of the zebrafish embryonic brain by
 confocal microscopy.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
</ol>

JSMは、ゼブラフィッシュの細胞のアブレーション（マムJS、とシュレーター、ゼブラフィッシュ&quot;米国特許7514595のEHターゲットと地域アブレーション携帯アブレーション。2009年4月7日）のニトロベースのシステムの使用に関する特許を授与されている。この手法は、さツールとJSMはステークホルダーインチ設立し、残っているサービスのバイオテクノロジー企業、Luminomics、（株）、のための一般的なプラットフォームとして使用さ

このビデオでは、我々は多色共焦点タイムラプスイメージングと標的細胞のアブレーションのために使用するテクニックの概要が提供されています。標的細胞のアブレーションが神経回路の機能および細胞特異的神経再生のパラダイムを研究するために使用されている間我々は、 生体内での関心の複数の細胞型の動作を監視するためのタイムラプスイメージング法を用いています。の例では、これらのアプローチから収集することができますいくつかの利点を強調示した。おそらく最も重要なのは、タイムラプスイメージングは​​、内部で制御パラダイムを提供し、観察されたとすべての現象は、以前の状態に戻って関連付けることができます。これは直接ではなく、推測の比較は定量化が容易に相対的な変更を加えると、集団内のばらつきに関連する実験的な&quot;ノイズ&quot;を減らし、実験的なタイムポイント間を行うことができます。多色イメージングの利点は、相互作用および/または隣接する細胞の種類の変化を視覚化する機能です。例えば、ミュラーグリアにラベルを付けるトランスジェニックラインを使用して、我々は今、離散網膜細胞の亜集団の損失にこれらの潜在的な損傷によって誘発された幹細胞の応答を予想されています。我々はまた、神経回路形成2の新たなメカニズムを定義するには、このアプローチを使用している。最後に、細胞再生の研究に加えて、我々は最近、様々な行動パラダイムと電気生理学的アッセイを用いて神経細胞サブタイプこのように離散的な神経回路の機能的役割を調査するためにNTRベースのアブレーションシステムを使用し始めている。このような研究にゼブラフィッシュを用いてのユニークな利点は、彼らの再生能力のために、誘導の赤字は一時的なもの、ということです。このように、タイムラプスイメージングアッセイと相関させることによって我々は、神経再支配につながるメカニズム、ならびに、機能回復のために必要な神経再生の程度を象徴化することができます。 提供されるメソッドは、多くの異なる質問に適合させることができます。例えば、アブレーションと再生の同様の分析は、どのトランスジェニック定義可能な細胞のサブタイプに適用することができます。総称して、このような研究は、個々の細胞型のレベルと離散的幹細胞のニッチ内の再生の我々の理解を拡大する可能性があります。

1。試薬： Danieauのソリューション： <ul><li>塩化ナトリウム（フィッシャー、S271 1） </li><li>塩化カリウム（フィッシャー、P217 500） </li><li> HEPES（フィッシャー、BP310500） </li><li>硫酸マグネシウム（フィッシャー、M65 500） </li><li>硝酸カルシウム（フィッシャー、C109500） </li><li>ペニシリン - ストレプトマイシン（フィッシャー、ICN1670049） </li></ul>その他の試薬： <ul><li>低融点アガロース（フィッシャー、BP165 - 25） </li><li> Tricaneメタン（フィッシャー、NC9435281） </li><li> N -フェニルチオ尿素（フィッシャー、NC9968868） </li><li>メトロニダゾール（フィッシャー、AC21034 - 1000） </li></ul> 2。消耗品： <ul><li>深いペトリ皿（フィッシャーサイエンティフィック/コーニング、08-772-32） </li><li>デュモン＃5微細な鉗子（フィッシャー、NC9404145） </li></ul> 3。設備： <ul><li>ズームステレオスコープ（オリンパス、SZ51） </li><li>蛍光のズームステレオスコープ（オリンパス、SZX16） </li><li>共焦点顕微鏡（オリンパスFV1000） </li><li>デジタルブロックヒーター - Isotemp（フィッシャー、11 - 715 - 125DQ） </li><li>バーンズテッド/ Thermolyneベンチトップインキュベータ（フィッシャー、11-702-4）。 </li></ul>

トランスジェニックゼブラフィッシュの多色タイムラプスイメージング：標的神経細胞のアブレーションによって活性化を可視化網膜幹細胞

Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation

生きているゼブラフィッシュの幼虫の高解像度のタイムラプスイメージングは、生物学的プロセスは、（レビュー用の1を参照）展開を視覚的に利用することができます。隣接セルの種類に異なる蛍光レポーターを表現する化合物トランスジェニック魚は時間をかけて実験操作する細胞間相互作用2および/ ​​または組織レベルの応答を以下の手段を提供します。このビデオでは、我々は数日間に数分からまたがることができる時間のコース上の個々の魚に連載イメージング複数の遺伝子導入によって標識された細胞のタイプに使用できるメソッドを示しています。 ）を分離するための簡略化のアプローチ1）シリアル&quot;キャッチ＆リリース&quot;イメージングのための方法を連続する日、2以上の魚の数が多い：記載された技術は含めて、時間をかけて隣接セルのタイプの&quot;振る舞い&quot;を関連付けるために求めるあらゆる試験に適用可能である重複する励起/発光プロファイル（例えば、GFPおよびYFP）と蛍光体、3）開発の後期幼生の段階に高分解能イメージングのための利用できる時間のウィンドウを拡張するために脱色素の突然変異系統の利用、4）明らかにするために膜を対象と蛍光レポーターの使用個々の細胞だけでなく、細胞の大きな集団での携帯電話の詳細、およびトランスジェニック標的細胞型の化学的に誘導アブレーションのための5）前述の方法の細かい形態学的な詳細、などメトロニダゾールとして、すなわち、プロドラッグ基質のニトロレダクターゼ（NTR）を介した変換、 （MTZ）、細胞傷害性誘導体の3,5へ。 これらのアプローチの例として、我々は数日間にわたって個々の魚内網膜双極ニューロンのサブタイプのアブレーションと再生を見ることができます。同時に我々は、隣接する非標的双極細胞や潜在的な変性刺激による網膜幹細胞（すなわち、Mϋllerのグリア）を含むいくつかの他の網膜細胞の種類を、監視します。この戦略は、標的神経細胞の種類の選択的喪失と再生するために、細胞や組織レベル（例えば、幹細胞ニッチ）の応答を特徴づけるために私たちの研究室で応用されている。

このビデオでは、多色共焦点タイムラプスイメージングと標的細胞のアブレーションのための技術が提供される。タイムラプスイメージングは​​、関心の複数の細胞型の動作を監視するために使用されます<em&gt; in vivoで</em&gt;。標的細胞のアブレーションでは、研究神経回路の機能および細胞特異的神経再生のパラダイムを容易にします。

生きたゼブラフィッシュ幼魚の高解像度タイムラプスイメージングを利用することで、生物学的プロセスがどのように展開するかを視覚化できる（レビューは1を参照）。化合物...

遺伝子組換え動物における蛍光リポーターの発現により、生体内の疾患モデルにおいて実験的な操作に対する細胞応答を追跡することが可能になります。本手法では、ゼブラフィッシュにおいて薬理学的に選択的な細胞喪失を誘導し、標的細胞およびその近接細胞を高解像度の多色共焦点画像で取得します。薬剤投与直前、直後、およびその後一定の間隔を置いて撮影し、画像解析を行うことで、回復期における内因性幹細胞集団の活性化と、それに続く標的細胞の置換を実証します。この手法は、「個別の細胞タイプを再生するためにどのような細胞的・分子的なメカニズムが用いられているのか」といった、再生生物学分野における重要な疑問への回答に役立ちます。まず、交配によって得られたトランスジェニック卵を、受精後16時間の時点で0.3 x danio solutionを含むペトリ皿に移します。目的組織に色素沈着が現れる前に、チロシンase活性を抑制するためにPTUを添加してください。胚がアルビノでない場合は、胚を28.5 °Cでインキュベートします。レポーターの発現が確認されたら、ペトリ皿を蛍光立体ズーム顕微鏡下に置き、目的のトランスジェーン発現に基づいて選別します。イメージングの前に、胚用培地を用いて0.5%低融点アガロース封入剤を調製し、40 °Cで保持しておきます。必要に応じてtricaおよびPTUを添加します。静かに混ぜ合わせ、40°Cに戻します。tricaを含む胚培地に魚を入れ、麻酔をかけます。約3分間で、魚は反応しなくなります。マイクロピペットを使用して移動させるには、約30 µLの麻酔液とともに個々の魚をカットしたピペットチップ内に吸い込みます。次に、ピペットを反転させ、魚を底に沈ませます。チップを封入液に触れさせ、重力によって液が転移するようにします。アガロースが希釈されないように注意し、再利用できるようにしてください。マイクロピペットに残った麻酔溶液は廃棄します。次に、同じチップを使用して、魚をペトリ皿に移します。約30 µLのマウント液の中で、目的の領域がaeros液滴の中心に来るように、魚を慎重に方向付けします。aerosが凝固するまで、魚が目的の向きに保持されていることを確認してください。必要に応じて、1つのペトリ皿に複数の魚を固定することができます。アエロスが凝固した後、魚を共焦点顕微鏡のステージに運び、魚が完全に浸るまで、Trica（PTUを含むか含まないか）を含む胚培地を皿に静かに加えます。イメージングソフトウェアを起動し、細胞および／または分子レベルの詳細を最適にイメージングするために、関心領域にフォーカスを合わせます。ソフトウェア内で、開口数が高く作動距離の長い対物レンズを使用してください。ダイアルリストから適切な蛍光を選択します。スペクトル設定（spectral setting）をクリックし、放出波長範囲を調整してください。レポーター信号を明確に分離し、信号対雑音比を最大化します。ソフトウェアで定義されたプリセットが適切に調整されるよう、ドロップダウンメニューから適切な対物レンズを選択してください。レーザーのフォーカス合わせおよび出力レベルの設定を行うには、各チャネルでピクセル飽和が確認できる出力をルックアップテーブルから選択してください。次に、希望する画質が得られるように検出器の感度を設定し、画像強度が許容範囲になるまでレーザー出力を徐々に上げます。関心領域でのピクセルの飽和を避け、光退色および光毒性の問題を軽減するため、レーザーレベルは可能な限り低く維持してください。すべてのイメージングチャンネルをモニタリングしながら、レーザーを手動でオン・オフにし、各レーザーラインが適切なチャンネルでのみ検出可能な信号を生成することを確認してください。クロストークが見られない場合は、すべてのチャンネルを同時に取得できます。次に、ズームおよび回転機能を使用して、関心領域をフレーミングしてください。次に、スキャン速度と画像サイズを設定します。スキャン速度を速くすることで、レーザーの滞留時間が最小限に抑えられ、時間分解能が向上します。Z方向のステップサイズは、実験上の必要に応じて設定してください。ここでは、網膜組織の7つの光学切片を画像化するために、10 micronsのステップサイズを使用しています。適切な設定が決定したら、Zack画像を撮影して保存します。その後、次の魚に移動します。付属の文書の指示に従い、数日間にわたる細胞変化を追跡するために、連続的なキャッチ・アンド・リリース撮影を行うことができます。マルチレポーターイメージング実験を行う際は、十分に分離した蛍光色素を使用するのが最適ですが、実際にはそれが常に可能であるとは限りません。ここでは、励起および蛍光スペクトルが重複する蛍光色素（今回の例ではGFPとYFP）を分離するために、オープンソースソフトウェアであるImageJを用いた簡便な画像減算法を紹介します。このビデオで説明しているタイムラプスイメージング技術は、網膜双極細胞の除去および再生過程におけるGFP標識網膜幹細胞のモニタリングに使用されています。スペクトル分離を行うには、シーケンシャルイメージングモードと可変バリアフィルター設定を用いて画像を収集します。これにより、重複する蛍光をそれぞれ独立して、あるいは部分的に分離して取得することが可能になります。画像の取得後、ImageJのloci bioフォーマットインポートを使用して画像ファイルを開き、インポートツールを起動します。対象のファイルをImageJウィンドウにドラッグしてください。Align Three TPプラグインを開始する際、インポートウィンドウの「Split Channels」チェックボックスを使用して、チャンネルを個別のスタックに分割します。「Plugins」をクリックし、「Align Stacks」を選択してから、「Align Three TP」をクリックしてください。適切な減算を行うために、スタックを整列させる必要があります。最初のドロップダウンボックスでリファレンススタックを選択し、2番目で位置がずれているスタックを選択します。「use XY relative origin」と「use Z relative origin」のボックスにチェックを入れ、「okay」をクリックします。アライメント処理を開始するには、ボリュームレジストレーションボタンをクリックします。アライメントパラメータを含む新しいウィンドウが表示されます。「OK」をクリックしてください。このセクションはプラグインのディストリビューターによって最適化されているため、修正は不要です。完了すると、アライメント済みスタックウィンドウが表示されます。出力ウィンドウを開くには、アライメント済みウィンドウから出力（output）を選択してください。このウィンドウも最適化されており、変更は不要です。「OK」をクリックしてください。ファイル名の末尾に「aligned」が付加された新しいスタックがワークスペースに表示されます。Image Calculatorを使用してクロストークを除去するには、[Process]から[Image Calculator]をクリックします。[Image 1]のドロップダウンボックスで差し引かれるスタックを選択し、[Image 2]のドロップダウンボックスで差し引くために使用するスタックを選択します。[Operation]のドロップダウンボックスで[Subtract]を選択し、[OK]をクリックします。Image Jでスタックを処理するか確認されるので、「はい」を選択します。これにより、重複するチャンネル間のクロストークが除去された新しいスタックが表示されます。アライメントおよび減算前の画像構造を再現するために、スタックを統合します。チャンネルツールウィンドウで統合するチャンネルを選択することで、最大4つのスタックをハイパースタックに統合できます。最後に、各チャンネルに色を付け、明るさとコントラストを調整し、ファイルをtiffs形式で保存して、ニトロレダクターゼの標的的な消失と再生を解析します。M cherryを発現する網膜双極細胞。処理前に、個々のゼブラフィッシュにおいて共焦点画像のタイムシリーズ撮影が行われた。黄色で示されているのは、制御された双極細胞における膜タグ付きYFPリポーターのモザイク発現であり、赤色で示されているのは、標的とした双極細胞におけるニトロレダクターゼ・cherry融合タンパク質である。シアン色で示された膜標識CFP導入遺伝子は、明瞭さを高めるために他のほとんどの網膜細胞に関するコンテキスト情報を提供しています。メトロニダゾール処理後の同じ画像では、CFP信号が消失しています。赤色のニトロレダクターゼ発現バイポーラ細胞は消失していますが、黄色のコントロールバイポーラ細胞は維持されています。これは、このアブレーション手法の極めて高い特異性を示すものです。分かりやすくするため、再びCFPのない同じ画像を示します。metro NIAZを除去すると、NTR発現細胞がここに回帰します。G-F-P-Y-F-P減算法の例をこの図（GFP標識されたMüller細胞）に示します。GL細胞は緑色で、YFP標識された双極細胞は紫色で示されています。これら2つの重なり部分が白色となり、これにより減算が行われます。まず、GFP画像とYFP画像の位置合わせを行う必要があります。次に、減算処理によってYFPで標識された双極細胞をGFP画像から除去することで、GFPで標識されたミュラー細胞を鮮明に表示し、より暗いミュラー細胞を検出できるようにします。これにより、暗いミュラー細胞、ggl、および赤色で示されるmCherry標識双極細胞の重複を確認することができます。ここで示されたデータは、双極細胞の除去がミュラー glia を刺激し、失われた細胞を補充させることを示唆しています。この解釈は、哺乳類と魚類の両方においてミュラー glia が傷害誘発性の前駆細胞として関与しているとする、網膜再生に関する最近の研究結果と一致しています。この手法により、ゼブラフィッシュにおける幹細胞の可視化を通じて、特定の細胞型の再生を制御するメカニズムを探索することが可能になります。

multicolor-time-lapse-imaging-transgenic-zebrafish-visualizing

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ここでは、長期的イメージング、二光子イメージングと組織損傷のテクニック、およびタイムラプス共焦点イメージングのためのゼブラフィッシュ胚を装着するための方法を説明します。...

ライブゼブラフィッシュの胚における二光子軸索切断とタイムラプス共焦点イメージング

現在のビデオは、開発ゼブラフィッシュの脳内の個々の神経前駆細胞のライブイメージングを実行するためのエレクトロポレーション、共焦点顕微鏡の組み合わせを活用する方法を示しています。...

開発ゼブラフィッシュ前脳におけるクローン関連の神経前駆細胞のタイムラプスライブイメージング

出典:武藤、A.、他.ゼブラフィッシュ幼生におけるカルシウムイメージングと行動記録を用いた2光子レーザーを用いた神経集団のアブレーションとその評価 J. Vis. Exp. (2018) }このビデオでは、...

ゼブラフィッシュララバにおける2光子顕微鏡を用いた標的ニューロンアブレーション

出典: Lahne, M., et.al.多光子顕微鏡による生細胞イメージングのための成体トランスジェニックゼブラフィッシュ網膜外植片の培養。J. Vis. Exp.

ゼブラフィッシュ網膜再生中のMuller Glial核遊走のライブセルイメージング

出典:Williams, A. L., et al.リアルタイムで発生を視覚化する多光子タイムラプスイメージング:ゼブラフィッシュ胚の移動する神経堤細胞の可視化。J. Vis. Exp.

マルチフォトンタイムラプスイメージングによるゼブラフィッシュ胚の神経堤細胞遊走の可視化

末梢神経系（PNS）は、損傷後の大幅な修理が可能ですが、少しは、この現象を支配する細胞および分子メカニズムについてはほとんど知られていない。ライブ、トランスジェニックゼブラフィッシュと再現神経切断アッセイを使用して、我々は、神経変性と再生の間ダイナミックグリア細胞の挙動を学ぶことができます。...

モーター神経切断とライブゼブラフィッシュにおけるグリア細胞の挙動のタイムラプスイメージング

ゼブラフィッシュ網膜再生は、主に固定した網膜を用いて研究されています。しかしながら、このようなinterkinetic核移行などの動的プロセスは、再生反応時に発生し、根底にあるメカニズムを調べるために生細胞イメージングを必要とします。ここでは、多光子顕微鏡を用いてリアルタイムにInterkinetic原子力移行（INM）を監視するために文化や撮影条件を説明します。...

多光子顕微鏡によるライブセルイメージングのための大人のトランスジェニックゼブラフィッシュ網膜外植片の文化

明確な遺伝的背景における個々のWT網膜前駆細胞のライブトラッキングは、神経発生時の細胞非自律的なシグナル伝達の寄与を評価することができます。ここでは、胚移植を介して、およびin vivoタイムラプス共焦点イメージングにおける遺伝子ノックダウン、キメラ世代の組み合わせは、この目的のために利用しました。...

細胞非自律影響を研究するためのキメラゼブラフィッシュ胚における個々の網膜前駆細胞におけるトランスジェニック遺伝子発現のin vivoイメージング

長い波長多光子蛍光励起顕微鏡レーザーの高度な光学技術の組み合わせは、Tg (sox10:EGFP) および Tg (foxd3:GFP)...

リアルタイムで開発を可視化する多光子タイムラプス イメージング: ゼブラフィッシュ胚の神経堤細胞の可視化

インビボイメージングは、神経系の発達の根底にある細胞メカニズムを調査するために使用できる強力なツールです。ここでは、開発中のゼブラフィッシュ神経系の中で、多色Brainbow標識細胞をリアルタイムに可視化するために、タイムラプス共焦点顕微鏡を用いる手法について説明する。...

Brainbowとタイムラプス共焦点イメージングを用いた生きているゼブラフィッシュの発達脳の可視化

ここでは、幼虫および若年期までの生体内でゼブラフィッシュ胚性脳を画像化する方法を提示する。この微侵襲的な手順は、電気生理学的アプローチから適応され、成熟したニューロンの細胞および細胞内の詳細へのアクセスを提供し、脳機能および薬物介入を特徴付けるための光遺伝学および神経薬理学的研究と組み合わせることができる。...

目覚めしたゼブラフィッシュ幼虫と頭蓋骨と皮膚除去による若年組織の完全に活性な脳組織のインビボイメージング

学ぶ多色共焦点タイムラプスイメージングと標的神経細胞アブレーションを用いたトランスジェニックゼブラフィッシュの神経回路機能と細胞特異的再生メカニズムの解析手法。

トランスジェニックゼブラフィッシュの多色タイムラプスイメージング：標的神経細胞のアブレーションによって活性化を可視化網膜幹細胞

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