酵素被覆微小電極アレイを用いたin vivoリアルタイムグルタミン酸モニタリング

頭

蓋骨を露出させた状態で、麻酔をかけたマウスを定位固定フレームに固定することから始めます。

頭蓋骨の基準点を特定し、ターゲット座標をマークします。

マークの周りにドリルで穴を開け、骨弁を取り外して脳組織を露出させ、表面をきれいにします。

グルタミン酸オキシダーゼ酵素でコーティングされた多電極アレイまたはMEAとマイクロピペットを定位固定フレームに取り付けます。

参照電極をMEAから離し、脳との液体接触を維持しながら、回路を完成させます。

マイクロピペットにグルタミン酸溶液を入れます。

次に、MEAとマイクロピペットをニューロンとアストロサイトが豊富な脳組織に下げます。MEAからのベースライン電気信号を記録します。

グルタミン酸溶液を注入して、MEAを含む細胞外空間のグルタミン酸レベルを急速に上昇させます。

MEA上のグルタミン酸オキシダーゼはグルタミン酸を酸化し、電気信号を生成します。

星状細胞がグルタミン酸を取り込むと、細胞外グルタミン酸レベルが低下し、シグナルが減少し、リアルタイムのグルタミン酸モニタリングが可能になります。

この手順では、動物を定位固定装置に入れ、エアバーを使用して頭を安定させます。動物が固定され、頭が動かないことを確認してください。次に、滅菌コットンアプリケーターを使用して眼軟膏を塗布します。その後、トリマーで頭を剃り、小さな手術用ハサミで耳の近くの毛皮を取り除きます。その後、ヨウ素とアルコールを頭皮に交互に3回塗布します。この後、頭皮の真ん中を切開し、皮膚を広げます。

滅菌綿の先端で血液を吸収し、過酸化水素を塗布してブレグマとラムダの出現を促進します。ブレグマとラムダの背腹座標と内側外側座標を測定して、頭が適切な位置にあることを確認します。bregma の座標をゼロに設定し、ターゲット座標をマークします。次に、マークの周りにドリルで穴を開けます。その後、MEAをヘッドステージに取り付けます。ピペットに最初の目的の溶液を埋め戻します。排出される溶液を検査できるように、溶液なしでピペットに隙間を残してください。

次に、チューブをガラス製マイクロピペットに取り付けます。MEAが付着したブレグマを探し、座標をゼロに設定します。MEAを希望の座標に移動し、先端が脳に触れるまでMEAをゆっくりと下げます。次に、背腹座標をゼロにし、MEAをゆっくりと脳内に下げます。参照電極をMEAから離れた場所に配置し、回路を完成させるために脳と液体接触しているようにします。記録プログラムで、目的の校正された電極をクリックし、[実験の実行]をクリックして記録を開始します。

安定したベースラインを取得したら、圧力エジェクターを0.6秒と0.5PSIに設定し、圧力エジェクターの赤いボタンを押して排出します。射出シート上で移動した時間と圧力、および体積目盛を記録し、必