狂犬病ウイルス感染マウス脳組織におけるウイルスタンパク質の検出

脳内狂犬病ウイルス感染マウスから、定義された死後間隔で固定脳切片を収集します。

このウイルスは大脳皮質の錐体ニューロンに感染し、発現したウイルスタンパク質は封入体として知られる細胞質内顆粒構造内に局在します。

切片を塩化アンモニウムで処理して、固定誘導反応性基を中和し、バックグラウンド染色を最小限に抑えます。

切片を過酸化水素に浸して内因性ペルオキシダーゼを不活性化し、非特異的シグナルを減らします。

界面活性剤を含むブロッキング溶液を塗布して、細胞膜を透過処理し、非特異的結合部位をマスクします。

ウイルスタンパク質に特異的な一次抗体とインキュベートします。

一次抗体に結合するビオチン標識二次抗体と洗浄し、インキュベー

トします。

再度洗浄し、ビオチンに結合するペルオキシダーゼ酵素結合アビジンを導入し、続いて酵素が着色物に変換する発色基質を導入します。

ウイルスタンパク質を含む免疫反応性封入体を顕微鏡で可視化します。

死後時間が長くなると、ニューロンの劣化と封入体の消失が明らかになります。