ウェスタンブロット解析を用いたマウス脳サンプル中のリン酸化タウタンパク質の検出

まず、マウスの脳組織をプロテアーゼ阻害剤と界面活性剤を含む抽出バッファーに入れます。

組織をホモジナイズして、タンパク質をバッファーに放出します。プロテアーゼ阻害剤はプロテアーゼ活性を阻害し、タンパク質の分解を防ぎます。

遠心分離機にかけ、上清をタンパク質とともに回収します。

界面活性剤と還元剤を含むローディングバッファーを添加して、タンパク質を変性させます。

コントロールとサンプルからタンパク質をSDS-PAGEゲルにロードします。電場を印加して、タンパク質を異なるバンドに分離します。

電気泳動後、タンパク質バンドをメンブレンに移します。

無脂肪乳を含むバッファーでメンブレンを処理し、非特異的相互作用部位をブロックします。

リン酸化タウタンパク質に特異的に結合する一次抗体とインキュベートします。

酵素標識二次抗体と洗浄し、インキュベートします。

酵素と反応して光シグナルを生成する基質を添加し、リン酸化タウタンパク質を確認します。

対照群と比較したサンプル中の強い光帯は、神経変性の病理を示唆しています。