集束イオンビーム走査型電子顕微鏡によるシナプス結合ニューロンの3D再構成

ニューロンの軸索と樹状突起を示すマウスの皮質脳組織の固定切片を取ります。樹状突起には、樹状突起棘と呼ばれる突起があり、軸索とシナプスを形成します。

脂質に結合するオスミウム-フェロシアン化物と組織をインキュベートし、続いてイメージングのための構造コントラストを強化する別のオスミウムアプリケーションを使用します。

高分子に結合してコントラストを高める重金属化合物で染色します。

樹脂の埋め込みのためにアルコール濃度を上げて脱水します。

ティッシュを樹脂に埋め込んでホルダーにマウントし、金でコーティングすることでイメージング品質を最適化します。

集束イオンビーム走査型電子顕微鏡を使用して、3次元イメージングを行います。

イオンビームを使用して、樹脂に埋め込まれた組織の薄層を除去し、イメージング面を露出させます。

露出した表面に電子ビームを集束させ、反射電子を検出して画像を生成します。

連続スライスとイメージングを行い、3次元画像を再構築して、シナプス的にリンクされた皮質ニューロンネットワークを明らかにします。