マイクロスフェアデリバリーシステムによるバイオプリント骨格筋構築物における神経突起成長の評価

バイオプリントされた骨格筋構造を取ります。

これらのコンストラクトには、筋線維とマイクロスフェアが埋め込まれたフィブリンハイドロゲル柱が含まれています。

ミクロスフェアは、神経栄養因子を囲む多孔質ポリマー構造です。

ニワトリ胚から単離された後根神経節を取ります。

各コンストラクトに1つの神経節を置き、インキュベートします。

神経栄養因子は、制御された生理学的濃度で微小球から放出され、神経突起と呼ばれるニューロンからの突起の発芽を促進します。

固定剤を追加して、コンストラクトを固定します。

バッファーで洗浄し、ブロッキング溶液を加えて非特異的抗体結合を防ぎます。

神経突起に特異的に結合する一次抗体とインキュベートします。

バッファーですすぎ、結合していない抗体を除去します。

一次抗体に結合する蛍光タグ付き二次抗体を追加します。

余分な抗体を除去するためにバッファーで洗浄します。

核色素とカバーガラスを含む封入媒体を使用してコンストラクトをマウントします。

共焦点顕微鏡下で、神経突起の成長を視覚化します。