ラット胚性ニューロンにおけるα-シヌクレイン毒性に対する試験化合物の神経保護効果の評価

変異したα-シヌクレインを過剰発現するドーパミン作動性ニューロンを含むラット胚からの一次中脳培養から始めます。

処理ウェルの培地を試験化合物を含む新鮮な培地に交換し、コントロールウェルの培地をプレーン培地に置き換えます。その後、インキュベートします。

対照では、α-シヌクレインがドーパミン作動性ニューロンに有毒な凝集体を形成し、神経突起の収縮を引き起こし、ニューロン死を引き起こします。

治療では、試験化合物はα-シヌクレインと相互作用し、その凝集を防ぎ、神経突起構造を維持し、神経保護を提供します。

細胞を固定して透過処理し、非特異的結合部位をブロックします。

一次抗体とインキュベートしてすべてのニューロンを標識し、ドーパミン作動性ニューロンをさらに標識します。

細胞を洗浄し、一次抗体に特異的な蛍光色素タグ付き二次抗体を追加します。

倒立蛍光顕微鏡を使用して、差次標識されたドーパミン作動性ニューロンをカウントし、共焦点顕微鏡に切り替えて神経突起の長さを測定します。

対照と比較して、

治療中の無傷の神経突起を持つドーパミン作動性ニューロンの数が多いことは、試験化合物の神経保護能力を裏付けています。