排卵を阻害するための覚醒雌ラットの脳へのテトロドトキシンのマイクロインジェクション

蒸留水で満たされたマイクロシリンジを取り、マイクロインジェクターに接続されたチューブに接続します。

マイクロシリンジのプランジャーをマイクロインジェクターの先端に水滴が現れるまで押し、プランジャーを少し引っ込めてチューブにエアポケットを作ります。

毒素不活化物質とパラフィンフィルムを染み込ませたパッドをその上に置きます。

テトロドトキシンをパラフィルムにピペットで取り、マイクロインジェクターに吸引します。

マイクロシリンジをマイクロインジェクションポンプに取り付け、マイクロインジェクターの先端に液滴が現れるまでプランジャーを進めます。ドロップを捨てます。

視床下部にガイドカニューレを埋め込んだ目覚めた雌ラットを抱きかかえます。

マイクロインジェクターをガイドカニューレに挿入します。

マイクロインジェクションを実行します。

テトロドトキシンは視床下部ニューロンのナトリウムチャネルを遮断し、ニューロンの発火を防ぎます。

この阻害は、ゴナドトロピン放出ホルモンを分泌するニューロンを抑制し、それによって排卵を阻害します。

逆流を防ぐためにマイクロインジェクターはそのままにしておきます。次に、それらを取り外し、ガイドカニューレのキャップを元に戻します。

マイクロインジェクションポンプを注入速度と総注入時間で構成します。次に、2 つの 10 マイクロリットルのハミルトン注射器に滅菌蒸留水を入れ、PTFE チューブを各マイクロインジェクターのチューブ コネクタに挿入し、チューブの長さがラットの動きを妨げないようにします。

チューブをハミルトンシリンジに接続し、マイクロインジェクターの先端に水滴が見えるまでプランジャーを押します。プランジャーを引っ込めて、チューブに2センチメートルのエアポケットを作成します。不活化物質を染み込ませたパッドとその上に2×2センチメートル四方のパラフィンフィルムを置きます。インジェクターの針とフィルムの上のチューブの1センチメートルを満たすのに十分な量のTTXをピペットで移動します。

プランジャーをゆっくりと引っ込めてTTXドロップを吸収します。シリンジをマイクロインジェクションポンプに取り付け、各マイクロインジェクターの先端にTTXの滴が見えるまで、そのコントロールを使用してプランジャーを操作します。手術後に少なくとも3サイクル連続したラットのみを使用し、サイクルの段階と時間帯を考慮して使用してください。

ネズミをしっかりと握ります。カニューレからキャップとオブチュレーターを取り外します。マイクロインジェクターをガイドカニューレに挿入し、動物をケージに戻します。ポンプの電源を入れ、マイクロインジェクションが完了するまで待ちます。溶液の逆流を避けるために、マイクロインジェクターをさらに2分間所定の位置に置いてから、それらを取り外します。オブチュレーターを交換します。キャッ