JoVE 実験百科事典
神経科学
0 回視聴 • 2:30 分 • August 29th, 2025
骨神経が露出した状態で加熱パッドの上に置かれた麻酔をかけた新生児ラットから始めます。
神経の遠位部位を持ち上げ、色素と混合したプラスミドDNA溶液を注入します。色素はプラスミド送達の追跡に役立ちます。
神経の周りにピンセットタイプの電極を置き、電極アーム間の隙間を小さく保ちます。
電流伝導のためにこのギャップに生理食塩水を導入します。
神経線維の周囲に電気パルスを印加し、シュワン細胞に一過性の膜孔を作成します。次に、電極の位置を反転させ、2 番目の電気パルスを印加します。これにより、細孔からのプラスミドDNAの侵入が促進されます。
エレクトロポレーション後、細胞膜は再密閉され、プラスミドを捕捉します。
部位をきれいにし、皮膚切開部を密閉し、消毒し、ラットを回復させます。
その後、プラスミドDNAは核に転座し、シュワン細胞DNAに組み込まれ、遺伝子導入の成功を可能にします。
針を使用して神経の遠位側をそっと引っ張り、露出した神経を持ち上げます。ガラス製マイクロピペットを神経の遠位部位に挿入し、神経が緑色に見えるまでわずかな陽圧を加えてDNA溶液を注入します。次に、神経から約1〜2ミリメートルのところにピンセットタイプの白金電極を配置します。
電極と神経の間の隙間を0.9%塩化ナトリウム溶液で埋めます。エレクトロポレーターを使用して注射部位に電気パルスを適用します。最初のパルスセットの後、電極を反転させ、別のパルスセットを印加します。
その後、エレクトロポレーション部位を0.9%塩化ナトリウム溶液で洗浄します。エレクトロポレーション後、シアノアクリレート接着剤で切開部を閉じます。次に、ポビドンヨードで傷をきれいにします。
動物からフェイスマスクを外し、麻酔から完全に回復できるように、少なくとも1時間電気ウォーマーの上に置いてください