マウスモデルにおける非侵襲的神経調節のための眼科薬物送達

海

馬ニューロンがデザイナードラッグまたはDREADDによってのみ活性化されるデザイナー受容体を発現する遺伝子組み換えマウスから始めます。

これらの操作された受容体は、内因性分子には反応しないまま、合成試験薬に選択的に反応します。

ストレスを最小限に抑え、手順に慣れるために、マウスを定期的に首筋をか

ぶせてください。

次に、マウスの体重を量って、正しい薬剤投与量を計算します。

マウスの取り扱い中は、概日リズムの乱れを防ぐために、薄暗い赤色ライトを使用してください。

マウスをそっと首筋で叩いて固定します。

ピペットを使用して、試験薬溶液を取り、先端に液滴を形成します。次に、目に近づ

き、液滴をその表面に放出します。

マウスをホームケージに戻します。薬物送達を数回繰り返します。

薬は目から吸収され、脳に入ります。

その後、血液脳関門を通過して海馬領域に到達します。その後、DREADD 受容体に結合してニューロンを活性化し、正確で非侵襲的な神経調節を可能にします。

反

復的なCNO送達の場合、注射後4週間から開始し、点眼薬の投与前の3〜4日間、各マウスを毎日3分間首筋にすることにより、動物を取り扱いに順応させます。マウスが取り扱いに慣れたら、各マウスの体重を量り、体重濃度1キログラムあたり1ミリグラムのCNOを達成するために送達するCNOの適切な量を決定します。

非活性段階で消灯する2時間前に、調製したCNO溶液の1〜3マイクロリットルをP10マイクロピペットにロードし、首筋でマウスを固定します。ピペットチップに安定した液滴が形成されるまで溶液をゆっくりと排出し、ピペットチップをマウスの目に触れずに溶液が送達されるまで液滴を角膜に注意深く近づけます。次に、次の動物の目にCNO点眼薬を塗布する前に、マウスをホームケージに戻します。

マウスの活動期に CNO を送達する必要がある場合は、動物の適切な取り扱いと CNO 送達のために、薄暗い赤色ライトが存在することを確認してください。