ラットモデルにおける脊髄修復のための自己組織化ペプチドと神経前駆細胞の注入

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頸髄損傷を負った麻酔ラットを定位フレームに固定します。

病変部位は、損傷した軸索と、浸潤した免疫細胞、グリア細胞、線維芽細胞に囲まれた液体で満たされた空洞で構成されており、軸索の再成長と機能回復を妨げます。

背骨の上の皮膚を消毒して切開します。筋肉を解剖して、脊髄の外側の覆いである硬膜を露出させます。

硬膜から瘢痕組織を切除して、脊髄病変部位を明らかにします。

自己組織化ペプチド(SAP)を含むマイクロシリンジを病変の上に配置し、

正中線の片側の病変コアに注入します。

一に分布するために反対側で注入を繰り返します。

次に、炎症を起こした病変コアを避けて、病変周囲の部位に神経前駆細胞 (NPC) を注入して、NPC の生存率を高めます。

注入

されると、SAPは細胞外マトリックスを模倣し、空洞を橋渡しする足場に自己組織化します。足場は、NPCの生存と組織リモデリングのための神経細胞への分化をサポートします。

注射は脊髄損傷の14日後に行われます。手術を開始する前に、SAPを体積あたり1重量%の濃度で滅菌水中に調製し、ハミルトンシリンジに取り付けられた100マイクロメートルのガラス毛細管に溶液を満たします。

ハミルトンシリンジを定位固定フレームに取り付けます。ラットを麻酔した後、定位固定フレームに頭を固定し、以前と同様にポビドンヨードと70%アルコールで手術部位を消毒します。もう一度、皮膚を開いた後、一対の椎骨の筋肉を注意深く解剖し、レトラクターを挿入します。

15番メスを使用して硬膜から瘢痕組織を取り除き、病変部位を再露出させます。次に、鋭利な針の先端を使用して硬膜を慎重に開きます。最後に、定位的に、ガラス毛細血管を外傷した脊髄に2ミリメートルの深さまで挿入し、SAPを注入します。

SAPを注入した後、毛細血管を注射部位に1分間留ましてから取り除き、注入された溶液に合わせて組織を伸ばします。次に、次の部位で注射を繰り返します。ここで、NPCは、成体のDS赤マウスの脳室傍ゾーンから単離され、以前に公開された手順に従って培養されました。

マイクロインジェクションの直前に、増殖培地中のNPCを50倍10の濃度に希釈し、細胞移植のために3番目の生細胞に10倍10の濃度に希釈し、ハミルトンシリンジのガラスキャピラリーにロードします。NPCはSAPを注入した直後に注入される。これを行うには、ハミルトン注射器のガラス毛細血管を損傷部位の吻側 0.2 ミリメートル、脊髄の背側表面から 1.5 ミリメートル下に挿入します。

毎分約0.5マイクロリットルの速度で2マイクロリットルの細胞懸濁液を注入します。最初の注射が完了したら、以前と同じように毛細血管を脊髄に1分間留めます。次に、毛細血管を引っ込め、隣接する部位に移動し、注射手順を繰り返します。前と同じように、1分間待った後、毛細血管を引っ込めて、2ミリメートルを傷ついた部位に甘やかします。

この位置で2マイクロリットルの注射を2回行います。

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Last updated: 25 July 2026