Cisterna Magna注射によるマウスモデルにおける標的薬物送達

蛍光マーカー遺伝子を発現する麻酔マウスから始めて、定位フレームに固定します。

頭は下向きに傾いており、大脳槽、脳脊髄液、または小脳と脳幹の間のCSFで満たされた空間へのアクセスを容易にします。

眼軟膏を塗り、首を剃り、殺菌します。

正中線を切開して、大貯槽を覆う膜を露出させます。

パレーターで組織を引っ込めて、貯水槽マグナにアクセスします。

誘導剤を充填し、曲がった針を取り付けたマイクロシリンジを取ります。

針を挿入し、膜に穴を開けて、大槽に到達します。

CSF内に均一に分散するために、薬物をゆっくりと注入します。

この薬剤は脳表面細胞に入り、マーカー遺伝子の発現を引き起こし、赤色蛍光タンパク質を生成します。

CSFの流れは、脳のより深い領域への薬物の拡散を防ぎます。

蛍光イメージングは、表面細胞の選択的標識を確認し、CSF曝露領域への標的薬物送達を実証します。

イソフルランチャンバーで動物を麻酔します。

次に、マウスピースが手術台の表面から約30度の角度になるようにマウスヘッドホルダーを調整し、動物の頭をホルダーに固定します。マグナ貯水槽へのアクセスを改善するには、頭を下に傾けてテーブルの表面から約30度の位置に配置し、体の他の部分と120度の角度を確立し、首の後ろを伸ばしてマグナ貯水槽へのアクセスを容易にします。動物が適切な位置に配置されたら、眼科用軟膏を塗り、首の後ろを剃り、アルコールワイプとベタジンでその部分を消毒します。

外科用ハサミを使用して、後頭骨のレベルから後方に伸びる正中線切開を行います。浅いピンセットで正中線から横に引っ張って、表層結合組織と首の筋肉をそっと分離し、大槽を覆う硬膜を露出させます。小さな外科用セパレーターを配置して、手順全体を通して大槽を視覚化できるようにします。

後頭骨の尾端を特定し、以前に曲げた針をすぐ下に挿入します。硬膜に穴が開いたら、注射器を動物の体と平行に上向きにゆっくりと引っ張って、針の曲がった先端を表面の下に浸透させると、安定性が向上します。脳脊髄液の自然な流れの妨げを避けるために、化合物をゆっくりと注入してください。

注射後、針を1分間内側に置いてから、先端の細い鉗子を使って慎重に取り除きます。