0 閲覧数 • 3:13 分 • August 29th, 2025
形質導入に必要な遺伝子を含むウイルスと追跡色素の混合物を緩衝液に取ります。
ウイルスと染料の混合物を先端の細い毛細管に吸引します。
腹部を剃った麻酔をかけた妊娠中のマウスを取ります。
皮膚をエタノールで消毒し、続いてベタジン溶液で
消毒します。正中線切開をして腹腔を露出させ、その上にパラフィンフィルムを貼ります。
子宮の角を露出させ、乾燥を防ぐために緩衝液を注ぎます。
胚の順序と位置に注意してください。子宮嚢内の胚の位置を調整して、注射部位にアクセスします。
ウイルスと染料の混合物を脊髄と脳室に注入します。
染料の分布を可視化することで、正確な注入を実現します。
子宮角を腹腔に戻し、緩衝液を注ぎます。
腹腔を縫合し、続いて皮膚を縫合します。
注入されたウイルスは宿主細胞に入り、標的遺伝子を放出し、その発現を可能にします。
まず、目的のターゲットに対してアデノ随伴ウイルス1型コーティングの4倍10〜11のウイルス粒子を含むカスタマイズされたキャピラリーチップをアスピレーターチューブにロードします。標識されたアデノ随伴ウイルス粒子を15マイクロリットルをキャピラリーに加えます。
次に、麻酔した胚妊娠14.5日目のマウスのつま先つまみに対する反応の欠如を確認し、皮膚を消毒します。湾曲した鋸歯状の虹彩鉗子とまっすぐな炭化タングステンハサミを使用して、正中線に沿って皮膚を切開します。まっすぐなデュモンピンセットを使用して腹膜壁をつかみ、まっすぐなヴァンナはさみで白線に沿って進み、腹部の開口部に有窓パラフィンフィルムを置き、スプーンのような装置を使用して、角の内側の胚を損傷することなく子宮角を露出させます。
摂氏37度のPBSを子宮角に数滴塗布した後、子宮嚢内の損傷や奇形がないか胚を検査します。各注射の希望の位置に達するまで、胚を嚢内で慎重に回転させます。胚が所定の位置に配置されたら、1〜2マイクロリットルのFast Green標識ウイルス粒子溶液を各胚に注入します。
すべての胚が注入されたら、子宮の角を腹腔に戻し、摂氏37度のPBSを腹部に数滴加えます。次に、ポリアミド 6-0 サイズの縫合糸を使用して腹膜壁を閉じ、ポリアミド 3-0 サイズの縫合糸とハルステッドのモスキート止血鉗子を使用して皮膚を閉じます。