マイクロウェルアレイ内の細菌コロニーの光分解性ヒドロゲルベースの単離

まず、平らな表面に不活性層でコーティングされたマイクロウェルアレイから始めます。

細菌細胞の懸濁液をアレイに追加し、細菌細胞をウェルに沈殿させます。

コーティングを剥がして表面に結合した細胞を除去し、ウェル内に局在する細胞を保持します。

次に、スペーサーの間にマイクロウェルアレイを固定します。

非粘着性コーティングを施したスライドを取り、合成ポリマーと緩衝液に溶解した架橋剤を含むヒドロゲル前駆体溶液をその上に堆積させます。

スライドをアレイ上に反転させ、インキュベートします。架橋剤はポリマーと反応して、細胞を閉じ込める多孔質ヒドロゲルを形成します。

スライドを取り外し、細菌の増殖をサポートし、汚染を防ぐために抗生物質を含む培地にアレイを置きます。

閉じ込められた細菌は、空間的に異なるコロニーに増殖します。

ヒドロゲルには、紫外線にさらされると切断する光分解性架橋が含まれており、細菌コロニーの選択的抽出のための標的ヒドロゲル分解を可能にします。

マイクロウェルアレイ基質上にOD 600 0.1の細菌細胞懸濁液700マイクロリットルを播種し、pH 8のリン酸緩衝生理食塩水ATGN12.5マイクロリットルを使用して、以前に示したようにヒドロゲル前駆体溶液を作ります。非反応性ペルフルオロアルキル化スライドガラス上で12.5マイクロリットルの前駆体溶液をピペットで移動し、細胞を接種したマイクロウェルアレイ基板の反対側に2つの38マイクロメートルのスチールスペーサーを配置します。次に、ペルフルオロアルキル化スライドガラスを前駆体溶液液滴で反転させ、マイクロウェル基板の中央に液滴を置きます。

室温で25分間インキュベートした後にヒドロゲルが形成されたら、マイクロウェル基板からスライドガラスをそっと取り除き、抗生物質を添加したATGN培地を含むペトリ皿に基質を置きます。